β-半乳糖凝集素3在非小细胞肺癌组织中的表达变化及意义

张艳红，赵桂凤，尹奎夫，刘美华，魏秀平

(1潍坊市妇幼保健院，山东潍坊 261000；2潍坊市人民医院)

β-半乳糖凝集素3在非小细胞肺癌组织中的表达变化及意义

张艳红1，赵桂凤2，尹奎夫1，刘美华1，魏秀平1

(1潍坊市妇幼保健院，山东潍坊 261000；2潍坊市人民医院)

目的 观察β-半乳糖凝集素3(Gal-3)在非小细胞肺癌(NSCIC)组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法 140例NSCIC患者，手术切除肿瘤组织140例份作为肺癌组，选取其中60例份癌旁组织作为癌旁组，同时选取60例份肺良性肿瘤组织作为良性组。采用免疫组织化学染色法检测三组组织中的Gal-3，并观察Gal-3的表达与NSCLC临床病理参数的关系。结果 肺癌组、癌旁组、良性组Gal-3阳性表达率分别为67.1%、38.3%、43.3%，肺癌组与癌旁组、良性组比较P均<0.05。腺癌、高临床分期、有淋巴结转移的NSCLC患者Gal-3阳性表达率较鳞癌、低临床分期、无淋巴结转移者高(P均<0.01)。结论 Gal-3在NSCLC组织中高表达，与NSCLC的发生、发展有关。

β-半乳糖凝集素3；肺癌；非小细胞肺癌；肿瘤预后

肺癌病死率居全球癌症首位[1]。由于人体肺内缺乏痛觉神经分布，双肺有强大的呼吸功能储备，早期肺癌患者通常没有症状，大部分肺癌患者就诊时已处于局部晚期或出现远处转移，因此深入研究肺癌转移机制并尽早干预其过程具有重要意义[2]。癌基因、原癌基因激活的重要机制是基因过表达。β-半乳糖凝集素3(Gal-3)属于S凝集素、半乳糖凝集素3亚家族，专一识别β-半乳糖苷[3]，在上皮细胞与免疫细胞中广泛表达。有研究[4]报道,Gal-3的表达与乳腺癌、甲状腺癌等有关，但其在肺癌中的研究较少。非小细胞肺癌(NSCLC)为肺癌的常见病理类型[5]，因此本研究观察了140例NSCLC组织中Gal-3的表达情况，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2013年2月～2016年2月在潍坊市妇幼保健院和潍坊市人民医院经过病理确诊的140例NSCIC患者，年龄50～74(59.3±10.2)岁，其中男76例、女64例。入选患者均符合美国联合癌症分类委员会(AJCC)和国际抗癌联盟(UICC)2002年制定的肺癌诊断与分期标准[6]。排除标准：已行放、化疗者；患有间质性肺炎等其他肺部疾病者;妊娠期或哺乳期患者。140例患者中鳞癌96例、腺癌44例，中高分化83例、低分化57例，根据国际抗癌联盟(2002版)pTNM病理分期标准I～Ⅱ期67例、Ⅲ～Ⅳ期73例，有淋巴结转移86例、无转移54例。手术切除肿瘤组织140例份作为肺癌组，并选取其中距离癌组织5 cm的癌旁组织60例份作为癌旁组。同时选取同期因肺良性肿瘤行手术切除的60例份肺良性肿瘤组织作为良性组。三组患者性别、年龄比较无统计学差异。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有患者知情同意并签署知情同意书。

1.2 Gal-3检测方法 采用免疫组织化学方法。鼠抗人Ga1-3单克隆抗体、EliVisionTMplus试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京普利莱基因技术有限公司。将三组肺组织石蜡切片经二甲苯、梯度乙醇脱蜡至水，PBS冲洗3次，140 ℃高压进行抗原修复，共150 s，自然冷却后再用PBS冲洗。滴入一抗，阴性对照滴入PBS，4 ℃冰箱过夜。次日PBS冲洗，滴入二抗，37 ℃温箱内孵育30 min。PBS冲洗，滴入DAB显色剂，最后经苏木素染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明封片。Gal-3主要在细胞质中表达，当出现黄色或黄棕色颗粒时为阳性表达。免疫组化结果由我院两位资深病理医师评定，用染色强度和阳性细胞百分比的乘积来评分。其中染色强度阴性计0分、弱计1分、中计2分、强计3分。选择染色较好的区域，随机选择连续的5个高倍视野，计数10个高倍视野(×400)分别计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞数百分比(%)，取其平均值，阳性细胞≤5%计0分、>5%～25%计1分、>25%～50%计2分、>50%计3分。将上述两项积分的乘积<3定为阴性表达，≥4定为阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

肺癌组、癌旁组、良性组Gal-3阳性表达率分别为67.1%(94/140)、38.3%(23/60)、43.3%(26/60)，肺癌组与癌旁组、良性组比较P均<0.05，癌旁组与良性组比较P>0.05。Gal-3表达与NSCLC临床病理参数的关系见表1。

表1 Gal-3表达与NSCLC临床病理参数的关系

3 讨论

NSCLC占肺癌的80%～85%，男性发病多见，其发病机制尚不清楚，可能与多种基因出现高表达有关。Gal-3是β-半乳糖苷结合的动物凝集素的一种，相对分子质量为31 000 Da[7]，由N端结构域、富含甘氨酸、酪氨酸与脯氨酸串联重复序列的结构域、糖识别结构域组成。Gal-3具有调节细胞的生长与抑制细胞的凋亡、参与调节细胞黏附的过程、参与炎症反应过程、参与调节免疫、参与肿瘤浸润与转移、参与mRNA前体剪接等多种生物学功能。Gal-3基因的过表达导致细胞异常增生，使肿瘤细胞间的黏附力减弱，增强移动性，降低细胞的分化能力[8]。肿瘤细胞在黏附力降低的情况下，受到血流冲击，容易脱离原发灶出现淋巴结远处转移[9]。Takeuchi等[10]研究发现，Gal-3在正常甲状腺(0/35)或良性结节(1/11)中仅有1例呈阳性表达，而在乳头状和滤泡状癌中阳性表达率达100%。李路等[11]研究表明，NSCLC中Gal-3表达率高，其高表达率和NSCLC的发生、发展、转移关系密切，抑制Gal-3的表达后，抗肿瘤效应显著增强。李静等[12]研究表明，NSCLC患者Gal-3的表达水平与肺部良性病变的患者相比明显上调，Gal-3的表达水平与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移存在明显相关性，肿瘤直径较大、分化程度较低、出现淋巴结转移患者的Gal-3水平明显增加，提示Gal-3的高表达是NSCLC患者的预后不良因素。

本研究结果表明，Gal-3在肺癌组的阳性率较良性组、癌旁组高，Gal-3的表达与NSCLC的病理类型、临床分期、淋巴结转移情况有关，与上述学者的研究结果不完全一致，考虑与所选研究对象不同有关。今后我们将扩大样本量，进一步探讨Gal-3的表达水平与肿瘤分化程度的关系。总之，Gal-3在NSCLC组织中高表达，与NSCLC的发生、发展有关，可以为临床医师早期诊断NSCLC和判断患者预后提供可靠帮助。

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山东省潍坊市卫生局科研计划项目(2016wsjs009)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.22.023

R734.2

B

1002-266X(2017)22-0061-02

2016-12-11)