SF3B1在急性髓系白血病中的表达

续 琳

(山西医科大学第二医院，山西 太原 030001)

·基础医学·

SF3B1在急性髓系白血病中的表达

续 琳

(山西医科大学第二医院，山西 太原 030001)

目的：探讨SF3B1突变在急性髓系白血病中的发生情况。方法：利用HRMA和DNA直接测序分析65例急性髓系白血病的SF3B1的突变热点。结果： 在AML中存在SF3B1杂合突变，通过DNA直接测序发现1例K666T，1例K700E突变,1例同时具有NPM1和DNMT3A 突变，1例具有DNMT3A和FLT3-ITD突变。结论：SF3B1突变在AML中罕见。

SF3B1；急性髓系白血病；基因突变

急性髓系白血病(Acute myeloidleukemia， AML)是一类源于造血干祖细胞的恶性克隆性疾病，因干祖细胞分化受阻或对正常的分化调节反应异常，导致骨髓或外周血中不成熟细胞增多。近年，关于和白血病相关的基因突变被陆续发现，其中有部分基因突变被证实和疾病的进展及预后相关[1]。有些被作为世界卫生组织对白血病进行分型的依据[2]。

转录本的选择性剪接可以发生于不同的肿瘤中[3]，然而关于其在肿瘤中的致病机制却不清楚。血液肿瘤细胞剪接体基因的体细胞突变近来被认知[4]。RNA剪接因子3B第1亚单位(splicing factor 3B subunit 1，SF3B1)基因RNA 剪接过程中起着重要的作用，其主要由5个小核糖核蛋白(snRNP) 复合体组成，包括U1、U2、U3、U4、U5、U6等。其中，SF3B1编码的蛋白是U2snRNP的一个组成部分。RNA的正常剪接是基于精准识别外显子-内含子交界处的位点，然而当剪接体组份突变时，会导致所翻译蛋白质的改变，从而导致剪接亚型变异和疾病的发生[5]。研究发现6.5%～28.1%的骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome， MDS)和5%～15%的慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)存在SF3B1的基因突变[4]，共有4个突变热点，分别是密码子E622，H662，K666和 K700。并且还发现，具有SF3B1突变的CLL预后不良[6]，而在MDS中的预后价值却存在争议[4]。而关于SF3B1在AML中的发生情况却鲜有报道，故本文将利用HRMA法探索SF3B1在AML中发生情况。

1 资料和方法

1.1 一般资料

65例初诊急性髓系白血病的骨髓标本来源于山西医科大学第二医院2016年5～12月的住院患者，男40例，女25例，中位年龄32岁。所有患者的诊断根据FAB和2008年世界卫生组织的诊断指南确诊[2]。

1.2 方法

使用蔗聚糖基质的密度梯度离心法分离骨髓标本的单个核细胞，使用DNA提取试剂盒提取骨髓标本DNA，操作参照试剂盒说明书执行。 在25μL体积存在下，用1×PCR缓冲，0.25 mmol / L的每个dNTP，2.5 mmol/L MgCl2，0.8μmol/L正向和反向引物，1 UTaq 酶(宝生物，大连)和50 ng基因组DNA。PCR反应使用ABI7300PCR仪。见表1 。

表1 SF3B1 引物序列及反应条件

PCR产物转移到LightScanner(美国)进行高分辨率溶解曲线分析法(High-resolution melting analysis，HRMA)分析，平板以0.10°C/s 的加热速度从55°C 加热到 95°C，利用仪器自带的分析软件，对溶解曲线进行分析。FLT3-ITD、NPM1突变检测按文献中方法执行[5]。

2 结果

样品表现出光滑和对称的熔融曲线表示野生型纯合子SF3B1。3个样本(4.6%)存在复杂的熔解曲线形状的变化，表明为杂合性突变。核苷酸的变化分别为C1997A>C(AAG→ACG，K666T)，C1998G>C(AAG→AAC，K666N)，和C2098A>G(AAA→GAA，K700E)，分别为图1。3例患者的临床特点SF3B1突变如表2所示。

表2 3例SF3B1突变患者的临床及实验室参数

注：M 男性，NA 没有数据，RS 环形铁粒幼红细胞。

A: K666T (C1997A>C) 和K666N (C1998G>C)突变;

B: K700E (C2098A>G) 突变; WT 野生型; 直线代表突变密码子; 箭头指示突变位点。

图1 SF3B1的DNA测序结果

Fig1 Results of SF3B1DNA Direct Sequencing

3 讨论

在本研究中， SF3B1突变在AML有非常低的发生。此外，在检测SF3B1K666T时 HRMA的最大灵敏度可达5%，高于直接DNA测序(10%)。虽然有报道显示，SF3B1突变与环形铁粒幼细胞(RS)相关，在AML的突变率为(2.6%～5%)[4]，原发性血小板增多症(3%)，原发性骨髓纤维化(4%～6.5%)[7]，慢性粒细胞白血病(4.5%～6.5%[4，7]，乳腺癌(1%)，肾肿瘤(3%)，多发性骨髓瘤(3%)，和腺样体囊性癌(4%)[7]。

研究中发现有突变的3例患者均为正常核型，1例有NPM1和DNMT3A突变，1例FLT3-ITD和DNMT3A突变。这与达姆等[8]报道的SF3B1基因突变与DNMT3A突变有关系(35%患者有SF3B1突变伴随DNMT3A突变)，相一致。最近，在大样本研究中发现，16%(44 / 275)的AML患者有SF3B1突变[9]。在RS≥15%患者有约31%的患者有SF3B1突变，在48.9%正常核型病例中有≥15%的铁粒幼细胞。此外还发现，SF3B1突变与年龄、M2和M4、FLT3-ITD,RUNX1等基因相关[9]。

因随访数据不足，SF3B1基因突变对AML预后的影响，在本研究中无法明确。目前有关SF3B1基因突变对预后的影响的有关报道相互矛盾[10]。

综上所述， SF3B1在AML患者突变频率很低。而SF3B1突变和其他基因突变的关系及在预后评价中的价值却有待进一步研究。

[1] 孙妍珺.急性髓细胞白血病DNMT3A基因突变的临床研究[D]．苏州：苏州大学，2016.

[2] 马 军，赵东陆.WHO 2016(修订版)急性髓系白血病分型解读[J]．临床血液学杂志，2017,30(3)：169-171.

[3] 徐敏杰，窦同海，徐佳熹.癌症相关基因选择性剪接进化数据库的构建[J]．复旦学报(自然科学版)，2016，55(5)：649-659.

[4] Maciejewski JP, Padgett RA. Defects in Spliceosomal Machinery: a new pathway of leukaemogenesis[J]. Br J Haematol,2012,158：165-173.

[5] Yokoi A，Kotake Y，Takahashi K，et al． Biological Validation that SF3b is a Target of the Antitumor Macrolide Pladienolide[J]．FEBS J，2011，278(24): 4870-4880．

[6] Rossi D, Bruscaggin A, Spina V, et al. Mutations of the SF3B1 Splicing Factor in Chronic Lymphocytic Leukemia: association with progression and fludarabine-refractoriness[J]. Blood，2011，118：6904-6908.

[7] Papaemmanuil E, Cazzola M, Boultwood J, et al.Somatic SF3B1 Mutation in Myelodysplasia with Ring Sideroblasts[J]. N Engl J Med，2011，365:1384-1395.

[8] Damm F, Kosmider O, Gelsi-Boyer V, et al. Mutations Affecting mRNA Splicing Define Distinct Clinical Phenotypes and Correlate with Patient Outcome in myelodysplastic syndromes[J].Blood，2012，119：3211-3218.

[9] Jeromin S, Bacher U, Bayer K, et al. SF3B1 Mutations Aredetectable in 48.9% of Acute Myeloid Leukemia with Normal Karyotype (AML-NK)and ≥15% Ring Sideroblasts are Closely Related to FLT3-ITD and RUNX1 Mutations[J].Blood，2012，120:406.

[10] Malcovati L, Papaemmanuil E, Bowen DT, et al. Clinical Significance of SF3B1 Mutations in Myelodysplastic Syndromes Andmyelodysplastic/myeloproliferative Neoplasms[J].Blood,2011,118：6239-6246.

本文编辑：王知平

统计学符号的书写

Expression of SF3B1in Acute Myeloid Leukemia

XU Lin

(TheSecondHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,ShanxiProvince,China)

Objective: To investigate the occurrence of SF3B1mutation in acute myeloid leukemia.Methods:SF3B1mutation hot spots of 65 cases of acute myeloid leukemia were analysed using high resolution melting analysis (HRMA) and DNA direct sequencing.Results:In the AML, the SF3B1heterozygotic mutation was found. By sequencing the DNA directly, 1 case K666T, 1 case of the K700E mutation, 1 case with NPM1and DNMT3A mutation, and 1 with DNMT3A and FLT3-ITD mutation were also founded. Conclusions:SF3B1mutation is rarely found in AML.

SF3B1; acute myeloid leukemia; genetic mutations

续 琳，女，工程师，从事医疗设备工作

R733.3

A

1671-0126(2017)03-0001-03