婴幼儿肝炎综合征患者代谢因子临床意义研究

李 娴，宋银森，赵 鼎，李林飞，张振华，陈重芬，郭振欣

(郑州市儿童医院,河南 郑州450000)

婴幼儿肝炎综合征患者代谢因子临床意义研究

李 娴，宋银森，赵 鼎，李林飞，张振华，陈重芬，郭振欣*

(郑州市儿童医院,河南 郑州450000)

目的 探讨婴幼儿肝炎综合征(IHS)患儿干血片氨基酸和肉碱浓度变化的临床意义。方法 应用HPLC/MS/MS测定患儿组与对照组干血片氨基酸及肉碱浓度。结果 患儿组与对照组相比辛酰基肉碱C8、葵酰基肉碱C10浓度降低，十四烷酰基肉碱C14、十六烷酰基肉碱C16浓度升高(P<0.05)；缬氨酸(VAL)浓度降低，瓜氨酸(CIT)浓度升高(P<0.05)。结论 婴幼儿肝炎综合征患儿血中氨基酸及肉碱浓度的变化对其诊断和治疗具有一定的临床意义。

氨基酸;肉碱;婴儿肝炎综合征;串联质谱法

(ChinJLabDiagn,2017,21:0990)

婴幼儿肝炎综合征简称婴肝征(IHS)，它不是一种独立的疾病，而是指一组1岁以内(包括新生儿期)起病，伴有血清胆红素升高，肝脏肿大和肝功能损害的临床症候群。它是婴幼儿期常见的黄疸性疾病之一，以肝内病变为主，病因复杂、预后悬殊。为探讨遗传代谢病筛查在婴幼儿肝炎综合征诊治中的价值，我们应用HPLCC/MS/MS技术对100例婴幼儿肝炎综合征患儿及同期在我院体检的100例健康儿童测定其干血片中氨基酸和肉碱的浓度，其结果如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2013年10月-2014年11月我院消化内科住院治疗的婴幼儿肝炎综合征患儿共100例，其中年龄最小为1个月，最大为2岁，男57例，女43例，诊断标准参考全国婴幼儿肝炎综合征诊断标准[1]。对照组为同期在我院健康体检的儿童100例，男60例，女40例，年龄6个月-3岁。两组在年龄、性别分布上无显著差异(P>0.05)。

1.2 标本采集方法 使用一次性采血针刺足跟或手指，深度小于3 mm，将血滴于Scheicher and Schuell 903滤纸样本卡，血斑正反面一致，室温下自然晾干呈深褐色，放于封口塑料袋内，保存于2-8℃冰箱中待检。

1.3 仪器及试剂 甲醇、乙腈、甲酸胺、甲酸均为高效液相色谱级别，购自Sigma公司。96孔聚丙烯锥形板，96孔过滤板，同位素内标及质控购自PerkinElmer公司。氨基酸内标11种：2H4-丙氨酸，2H4，13C-精氨酸，2H2-瓜氨酸，15N，2-13C-甘氨酸，2H3-亮氨酸，2H3-蛋氨酸，2H6-鸟氨酸，13C6-苯丙氨酸，13C5-脯氨酸，13C6-酪氨酸，2H8-缬氨酸。酰基肉碱内标13种：2H9-游离肉碱，2H3-乙酰肉碱，2H3-丙酰肉碱，2H3-丁酰肉碱，2H9-异戊酰肉碱，2H6-戊二酰肉碱，2H3-己酰肉碱，2H3-辛酰肉碱，2H3-癸酰肉碱，2H3-十二酰肉碱，2H3-十四酰肉碱，2H3-十六酰肉碱，2H3-十八酰肉碱。上述内标在实验前用甲醇稀释成工作液备用。仪器:美国安捷仑公司高效液相色谱仪(Agilent 1600) 及6460Triple Quad MS/MS型串联质谱仪。

1.4 测定方法 用打孔器将滤纸片打出直径3 mm的圆形滤纸血片，置于96孔过滤板中，每次实验加入高低两个质控及一个空白，每孔加入工作液100 μl，以封板膜密封，放置于恒温震荡仪以700转/分震荡45 min，然后提取75 μl上清液加入另一个96孔聚丙烯锥形板中，铝箔包裹，即上样检测。高效液相色谱仪的流动相采用乙腈和纯水，自动进样器每次进样2 μl，每次测定采用多反应监测方式进行检测。一个样品测试约需7 min。

1.5 数据分析 质谱数据的定量分析采用安捷伦公司的自带软件Mass Hunter B.05.00 根据各种氨基酸、肉碱及其同位素内标的离子峰强度计算出样品中氨基酸及肉碱浓度，采用spss 17.0软件进行数据分析，测定结果以均数±标准差表示。IHS组患儿与正常组的比较采用t检验，P<0.05为有显著性差异。

2 结果

IHS组与对照组相比，辛酰基肉碱C8、葵酰基肉碱C10浓度降低，差异有统计学意义(P<0.05)；十四烷酰基肉碱C14、十六烷酰基肉碱C16浓度升高，差异有统计学意义(P<0.05)，其它肉碱与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。HIS组与对照组比较，缬氨酸(VAL)浓度降低，差异有统计学意义；瓜氨酸(CIT)浓度升高，差异有统计学意义，其它氨基酸与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1，表2。

表1 婴肝组与对照组血片的肉碱浓度比较

3 讨论

采用质谱技术进行新生儿及婴幼儿的遗传代谢病筛查已经广泛应用于美国、欧洲等发达国家[2,3]。婴幼儿肝炎综合征患儿体内存在代谢紊乱，董梅[4]对遗传代谢病类婴幼儿肝炎综合征进行分类，分为四类，分别是胆汁酸代谢障碍，糖代谢障碍，氨基酸代谢障碍及脂类代谢障碍。我们使用HPLC/MS/MS对100例婴幼儿肝炎综合征患儿进行遗传代谢病筛查发现部分氨基酸及肉碱浓度发生改变，如：辛酰基肉碱C8、葵酰基肉碱C10、十四烷酰基肉碱C14、十六烷酰基肉碱C16、缬氨酸、瓜氨酸。说明这些物质可能与婴幼儿肝炎综合征有密切关系。患儿血片中辛酰基肉碱C8、葵酰基肉碱C10浓度升高提示可能患有中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCAD)。而我们的研究发现婴幼儿肝炎综合征患儿血片中辛酰基肉碱C8及葵酰基肉碱C10浓度明显降低，提示婴幼儿肝炎综合征患儿体内存在脂肪酸代谢障碍，与中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MCAD)能明显区分开来。患儿血片中十四烷酰基肉碱C14及十六烷酰基肉碱C16浓度升高提示可能存在极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCAD),我们的研究发现婴幼儿肝炎综合征患儿体内C14及C16浓度较对照组升高，但在正常参考范围上限以内；婴幼儿肝炎综合征与VLCAD不容易区分，因此实践中我们要结合基因诊断、酶学分析及脂肪酸氧化流量分析等综合考虑[5,6]。

表2 婴肝组与对照组血片的氨基酸浓度比较

婴幼儿肝炎综合征患儿体内也存在氨基酸代谢紊乱。瓜氨酸是尿素循环中的中间代谢产物，当尿素循环受阻时就会导致瓜氨酸在体内贮积、血氨升高，婴幼儿肝炎综合征常伴有肝功能损害，我们推测可能是这个原因引起瓜氨酸浓度升高、血氨升高。缬氨酸是人体八种必需氨基酸之一，它与亮氨酸及异亮氨酸一起工作，促进身体正常生长，它还帮助从肝脏清除多余的氮，并将身体需要的氮运输到各个部位，当婴肝症发生时，缬氨酸与对照组相比浓度降低，差异有统计学意义。而亮氨酸虽然浓度也降低，但是与对照组相比，差异无统计学意义。因此对婴幼儿肝炎综合征来说，缬氨酸可能更敏感一些，作为一个辅助指标，指导临床治疗。

婴幼儿肝炎综合征病因很多，常见以感染为主，病毒感染是其主要病因，大约占50%[7]。婴幼儿肝炎综合征并发症多，预后各不相同，因此需要联合检测生化、B超等多种指标以明确病因对症治疗[8,9]，降低患儿死亡率。

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The Clinical Significance of metabolic factor in infant hepatitis syndrome

LIXian,SONGYin-sen,ZHAODing,etal.

(ZhengzhouChildren'sHospital，Zhengzhou450000,China)

Objective The clinical significance of amino acid and carnitine with dried blood concentration in children of infantile hepatitis syndrome (IHS).Methods HPLC/MS/MS was used to examine the dried blood samples of infantile hepatitis syndrome (IHS) with the control group and the patient group of amino acid and carnitine concentration. Results Compared with control group,octanoylcarnitine C8,decanoylcarnitine C10 concentration is reduced,while tetradecyl acyl carnitine C14,palmitoylcarnitine C16 concentration increases(P< 0.05); Valine (VAL) concentration is reduced,citrulline (CIT) concentration increases(P<0.05) .Conclusion Changes in amino acid and carnitine concentrations in blood of children with hepatitis syndrome in infants conclusion has some clinical significance in the diagnosis and treatment.

Amino acid；Carnitine；Infant hepatitis syndrome；Tandem mass spectrometry

河南省医学科技攻关计划指导性计划项目，编号201304082

*通讯作者

1007-4287(2017)06-0990-03

R725

A

李娴，女，34岁，硕士，主管检验技师，研究方向：小儿遗传及代谢病。

2016-11-12)