温度对基因组DNA提取的影响

常瑞刚，刘丽霞

（西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730030）

温度对基因组DNA提取的影响

常瑞刚，刘丽霞

（西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 730030）

为了探讨温度对基因组DNA提取质量的影响，以荷斯坦牛血液为实验材料，采用DNA提取试剂盒法在4℃和常温下提取牛血液DNA。结果表明：在4℃下提取的DNA质量要明显高于常温下所提取的。该研究对于提高DNA提取质量具有一定的参考价值。

温度；质量；DNA提取

随着分子生物学技术的快速发展，在动物遗传育种 研究以及基因工程等分子水平的操作均需从生物体中提取基因组DNA。提取基因组DNA的方法种类繁多，目前主要分成两种，一是经典的酚－氯仿抽提法，二是试剂盒法。酚－氯仿抽提法价格便宜，但操作繁琐，而且获得基因组DNA质量欠佳；试剂盒法的优点是简便、快捷，且DNA提取效率较高［1］。目前试剂盒法应用十分广泛，在提取基因组DNA的过程中，DNA的质量受多种因素的影响，提取的DNA质量会影响后续实验结果的可靠性，其中温度是影响其质量的一个重要因素。因此，本实验采用DNA提取试剂盒法在4℃和常温下提取牛血液DNA，旨在探讨温度对DNA提取质量的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验样本 本实验以宁夏贺兰山奶业有限公司同一奶牛场荷斯坦牛为实验动物。用医用采血管经尾静脉采血10 mL，－20℃冻存备用。

1.1.2 实验设备 自动平衡离心机Labofuge 200和高速冷冻离心机D－37520（德国Eppendorf公司），低温冰箱MDF－U541（日本SANYO电子有限公司），凝胶数字成像系统BiO－BEST 140E（美国西蒙子公司）等。

1.2 方法

采用DNA试剂盒法分别在4℃和常温条件下提取牛血液DNA，操作步骤如下。

（1）取牛血液20 μL，不足200 μL可加缓冲液GA补足。

（2）加入20 μL蛋白酶K溶液，混匀。

（3）加入200 μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

（4）加入200 μL无水乙醇，充分振荡混匀15 s，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

（5）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12 000 r/min离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。

（6）向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD，12 000 r/min离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

（7）向吸附柱CB3中加入700 μL漂洗液PW，12 000 r/min离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

（8）向吸附柱CB3中加入500 μL漂洗液PW，12 000 r/min离心30 s，倒掉废液。

（9）将吸附柱CB3放回收集管中，12 000 r/min离心2 min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

（10）将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加25 μL ddH2O（预热），室温放置2～5 min，12 000 r/min离心2 min，将溶液收集到离心管中。

2 结果与分析

本实验研究结果显示，采用0.8%琼脂糖凝胶电泳分析所提取的DNA含量均较高。但相比之下4℃所提取的DNA含量更高，浓度更大，除样品条带外未出现其他条带，表明所提取的DNA未受外源核酸和蛋白质的污染，无断裂，且分子大小相同。6个试验样品迁移率几乎相同。见图1。

图1 不同温度条件下提取的DNA琼脂糖凝胶电泳图

3 讨论

从动物血液中获得高质量的DNA是进行分子遗传育种研究所必需的。在血液中，DNA与蛋白质结合形成染色体，存在于细胞核中，因此，在提取DNA时既要将蛋白质等物质除尽，又要尽可能保持DNA分子的完整性，即DNA带不断裂，且无外源核酸污染。

本实验结果表明，4℃下所提取的DNA浓度更大，含量更高；而常温下所提取的DNA浓度虽然也较高，但条带不整齐且点样孔有亮度，表明有外源核酸和蛋白质的污染。本实验采用DNA提取试剂盒法，在常温条件下提取DNA，由于离心机高速旋转产生大量热量，导致部分基因组DNA降解；而在4℃条件下提取DNA，温度低，血液细胞释放的内源核酸酶活性较低，因此能够保证DNA的完整性。

综上所述，在4℃条件下提取可获得较高质量的基因组DNA。

［1］ 覃莉，江莉，李慕军，等.人类精液DNA提取方法的探讨及影响因素分析［J］.广西医学，2013（4）：406-410.

S823.2

A

2095-3887（2017）03-0073-02

10.3969/j.issn.2095－3887.2017.03.021

2017-03-28

西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金项目（31920170029）；西北民族大学本科生科研创新项目

常瑞刚（1995-），男，在读本科生。

刘丽霞（1983-），女，高级实验师，博士，主要从事动物遗传育种与繁殖研究工作。