miR-135a-5p在子宫内膜癌中的表达及意义

冷洪锐，孔繁菲，马晓欣

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳110004）

miR-135a-5p在子宫内膜癌中的表达及意义

冷洪锐，孔繁菲，马晓欣

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳110004）

目的探讨子宫内膜癌中miR-135a-5p的表达及意义。方法收集中国医科大学附属盛京医院妇产科2016年手术切除的子宫内膜癌组织55例以及对照组正常子宫内膜标本30例，运用实时PCR检测miR-135a-5p在子宫内膜癌组织以及正常子宫内膜标本的表达情况，并分析其与临床病理参数的关系及意义。结果子宫内膜癌组织中miR-135a-5p的表达水平低于正常子宫内膜组织，具有统计学差异（P=0.021）；miR-135a-5p在子宫内膜癌中的表达与肿瘤的分化程度有关（P=0.008）；结论miR-135a-5p在子宫内膜癌中低表达并且与子宫内膜癌的发生、发展有关。

miR-135a-5p；子宫内膜癌；表达

子宫内膜癌是女性生殖系统高发恶性肿瘤之一。占女性恶性肿瘤的第4位［1］。近年发病率呈上升趋势。因此新的肿瘤标记物对于子宫内膜癌的诊断及治疗有重要意义。研究［2-3］表明，miRNAs参与调节肿瘤细胞的行为。其中，miR-135a-5p已被证实与胆囊癌［4］、肾透明细胞癌［5］、肝癌［6］等恶性肿瘤的发生、发展密切相关。然而其在子宫内膜癌中的作用尚未报导。本研究采用实时PCR法检测miR-135a-5p在子宫内膜癌组织中的表达，探讨其在子宫内膜癌中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集中国医科大学附属盛京医院手术切除并经病理证实的子宫内膜癌标本55例及对照组正常内膜组织标本30例。高/中分化癌48例、低分化癌7例；伴有淋巴结转移及脉管浸润者3例，无转移者52例。按2009年国际妇产科联盟（FIGO）的分期标准进行手术分期：Ⅰ期47例，Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期8例。子宫内膜癌患年龄＞60岁20例，≤60岁35例。肌层浸润≥1/2肌层18例，＜1/2肌层37例；Ⅰ型子宫内膜癌（雌激素受体依赖型）51例，Ⅱ型子宫内膜癌（非雌激素受体依赖型）4例。55例子宫内膜癌标本中，所有患者术前均未接受过任何放化疗或分子靶向治疗。对照组组织标本均取自因子宫内膜息肉行宫腔镜手术的子宫内膜组织标本，经病理证实无子宫内膜病变。

研究均征得患者及家属同意，签署知情同意书。手术切除的标本立即放入液氮中保存，随后转入-80℃冰箱保存以供实时PCR检测。

1.2 试剂与仪器

Trizol，Mir-X™miRNA First-Strand Synthesis和SYBR®Premix Ex Taq™ⅠⅡ均购自TaKaRa公司。miR-135a-5p引物生工公司设计并合成，以U6为内参，引物序列为U6上游序列：5’-GGAACGATACA GAGAAGATTAGC-3’；下游序列：5’-TGGAACG CTTCACGAATTTGCG-3’；miR-135a-5p：5’-GCCTA TGGCTTTTTATTCCTATGT-3’。

1.3 实时PCR

1.3.1 提取总RNA：取60 mg冰冻的子宫内膜癌组织加1 mL rizol，严格按RNAiso Plus说明书提取组织中的总RNA。利用分光光度计测量提取的RNA吸光值，计算浓度，所有标本总RNA吸光度的比值（A260/A280）均为1.8～2.1，表明RNA纯度好。

1.3.2 逆转录总RNA：逆转录试剂盒说明书将总RNA逆转录成cDNA，以cDNA为模板分别对miR-135a-5p基因进行实时PCR反应。实时PCR按照SYBR Green说明书配制反应体系。mRQ Buffer（2×）5 μL，RNA样本（0.25～8 μg）3.75 μL，mRQ酶1.25 μL；反应条件为37℃1 h，85℃5 min。

1.3.3 miR-135a-5p的实时PCR：PCR反应体系（20 μL）为SYBR PremixExTaqⅡ（2×）10μL，PCR Forward Primer（10 μmol/L）0.8 μL，PCR Reverse Primer（10 μmol/L）0.8 μL，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.4 μL，DNA模板2.0 μL，ddH2O 6.0 μL；反应条件为95℃30 s，95℃5 s，60℃30 s，每个反应均设置复孔，求平均Ct值作为实验结果。得到miR-135a-5p基因以及内参基因U6的相对表达量，采用2-△△CT进行统计分析。

1.4 统计学分析

应用SPSS 20.0处理数据，结果以x±s表示，子宫内膜癌组织及正常内膜组织中miR-135a-5p的表达量采用独立样本t检验方法分析，miR-135a-5p与临床病理资料之间的关系采用非参数检验方法分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-135a-5p在不同类型子宫内膜组织中的表达

miR-135a-5p在子宫内膜癌组织中及正常子宫内膜组织中的表达量分别为7.640±15.524和31.678±56.654，miR-135a-5p在子宫内膜癌组织中的表达水平明显低于正常子宫内膜组织，差异具有统计学意义P＜0.05。见图1。

图1 miR-135a-5p在不同子宫内膜组织中的表达情况Fig.1 The expression of miR-135a-5p in different endometrial tissue types

2.2 miR-135a-5p的表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系

将子宫内膜癌组织中miR-135a-5p的表达水平与临床病理资料进行统计分析，结果发现子宫内膜癌组织中miR-135a-5p的表达与肿瘤的分化程度显著相关（P＜0.05），且分化程度越高的子宫内膜癌组织中miR-135a-5p的表达水平越高；但是子宫内膜癌组织中miR-135a-5p的表达与患者临床分期、病理类型、性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移无关（P＞0.05），见表1。

3 讨论

子宫内膜癌是一个发病过程复杂，伴随着遗传和表观遗传的改变［7］。虽然期别较早的患者5年生存率逐渐升高，但分化程度差，侵袭性高的子宫内膜癌，预后不良，占到内膜癌死亡率的40%。基因芯片的研究已经确定了一些miRNAs调控了子宫内膜癌的发生、发展及预后，为进一步了解子宫内膜癌发生的分子机制提供了新的见解。

表1 子宫内膜癌中miR-135a-5p的表达与临床病理参数的关系（Tab.1 Correlation between miR-135a-5p expression and clinicopathological characteristics of endometrial carcinoma（x±s）

表1 子宫内膜癌中miR-135a-5p的表达与临床病理参数的关系（Tab.1 Correlation between miR-135a-5p expression and clinicopathological characteristics of endometrial carcinoma（x±s）

ER，estrogen receptor；PR，progestogen receptor.

Chinico pathological characteristicnExpression level of miR-135a-5pP Age（year）0.707≤60355.112±10.730＞60204.164±7.746 Surgical/pathologic stage 0.137Ⅰ474.744±7.303Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ824.655±33.489 Histological differentiation 0.008 High/moderate485.459±10.560 Poor70.751±0.958 Depth of infiltration 0.559＜1/2374.047±5.425≥1/2186.246±15.239 Lymph node metastasis and vascular invasion 0.681 No524.647±9.830 Yes36.851±7.870 Type of pathology 0.669Ⅰ514.688±9.903Ⅱ4 6.940±7.684 ER 0.669 + 514.688±9.903 -4 6.940±7.684 PR 0.868 + 494.865±10.091 -5 4.303±6.525

microRNAs是一类非编码小RNA，由17～25个核苷酸组成。miRNAs绑定位于3’非翻译区的特定靶mRNA的部分互补序列，导致mRNA降解和翻译抑制［8］。miRNAs参与一系列细胞增殖、分化、侵袭、转移及凋亡等生物学过程。癌基因与抑癌基因的异常表达与动态平衡丢失通常导致肿瘤的形成和癌症的发展［9］。

近年来的研究［10-15］表明，miRNA在子宫内膜癌发生、发展的不同阶段，其表达谱存在明显异常，如miR-27，miR-203，miR-205，miR-141和miR-200在子宫内膜癌中上调，而miR-30c，miR-101，miR-449，miR-143和miR-145表达下调。这些数据强调了miRNAs在子宫内膜癌发生发展中的重要性。miR-135a是RNA-135家族的重要成员，基因位于第3号染色体（p21.1）。miR-135 a在经典的霍奇金淋巴瘤和胃癌中起抑制肿瘤细胞增殖的作用［16-17］，miR-135a在乳腺癌［18］、肝癌［6］中高表达。ZHOU等［4］研究表明，miR-135a-5p在胆囊癌中明显抑制在体外和体内的癌细胞增殖。MULLER等［5］研究表明，miR-135a-5p在肾透明细胞癌组织中表达下调，起抑制因子作用。然而miR-135a-5p在子宫内膜癌中的作用尚未报导。

本研究运用实时PCR法检测发现miR-135a-5p在子宫内膜癌组织中相对表达量低于正常子宫内膜组织（P＜0.05），这一结果提示miR-135a-5p可能作为抑癌基因参与了子宫内膜癌的发生、发展，同时发现其与组织病理学分级有关，高/中分化的子宫内膜癌患者中其表达量明显高于低分化（P＜0.05），这也进一步提示miR-135a-5p在子宫内膜癌的发展过程中扮演的很可能是抑癌基因的角色。与上述报导中提出的miR-135a-5p能够抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移的观点一致。

综上所述，miR-135a-5p与子宫内膜癌的发生发展存在联系，并且其表达与组织学分化程度存在相关性，而探究其具体的作用机制将成为进一步的研究重点，并将为子宫内膜癌的早期发现及有效治疗提供新思路。

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（编辑 于溪）

Expression and Significance of miR-135a-5p in Endometrial Carcinoma

LENG Hongrui，KONG Fanfei，MA Xiaoxin

（Department of Obstetrics and Gynecology，Shengjing Hospital，China Medical University，Shenyang 110004，China）

Objective To investigate the expression and significance of miR-135a-5p in endometrial carcinoma and to correlate expression levels with clinicopathological features.MethodsFifty five endometrial carcinoma samples and thirty normal endometrial tissue samples were surgically obtained，and the expression of miR-135a-5p was quantitated by real-time polymerase chain reaction.The relationship between the expression level of miR-135a-5p and clinicopathological data of individual patients was analyzed.ResultsThe expression of miR-135a-5p was lower in the endometrial carcinoma group than in the normal endometrial group（P=0.021），and correlated significantly with the histologic grade of the endometrial neoplasm（P=0.008）.ConclusionThe expression of miR-135a-5p is lower in endometrial carcinoma than in normal endometrial tissue.In endometrial carcinoma，the miR-135a-5p expression status has a statistically significant relationship with the histological characteristics of the tumor.

miR-135a-5p；endometrial carcinoma；expression

R737.33

A

0258-4646（2017）06-0485-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2017.06.002

国家自然科学基金（81472438，81272874）；辽宁省科学技术计划（2013225079）

冷洪锐（1987-），女，医师，硕士研究生.

马晓欣，E-mail：maxiaoxin666@aliyun.com

2017-01-24

网络出版时间：