不同浓度枯草芽孢杆菌对蛋鸡血液生化指标的影响

查翘楚，张力凡，韩超，叶密，陈辉，黄仁录*，张建设，何晓中，李丽华

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.石家庄藁城区畜牧水产局，河北石家庄052160）

不同浓度枯草芽孢杆菌对蛋鸡血液生化指标的影响

查翘楚1，张力凡1，韩超1，叶密1，陈辉1，黄仁录1*，张建设2，何晓中2，李丽华2

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.石家庄藁城区畜牧水产局，河北石家庄052160）

为研究不同浓度的枯草芽孢杆菌对蛋鸡血液指标的影响，试验选用体重相近的19周龄健康“大午金凤”蛋鸡240只，随机分成4组，试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础日粮；试验Ⅱ组饲喂基础日粮+0.1%的枯草芽孢杆菌；试验Ⅲ组饲喂基础日粮+0.5%枯草芽孢杆菌；第Ⅳ组饲喂基础日粮+1%的枯草芽孢杆菌。预饲期7 d，试验期28 d。结果表明：试验中期和末期，甘油三酯各组之间差异不明显（P＞0.05）；总蛋白第Ⅲ组显著高于对照组（P＜0.05）；试验中期，尿素氮和尿酸第Ⅲ组均显著低于对照组（P＜0.05）；血氨第Ⅱ、Ⅲ组极显著低于对照组（P＜0.01），第Ⅳ组显著低于对照组（P＜0.05）；IgA试验组极显著高于对照组（P＜0.01）；IgM、IgG试验Ⅲ、Ⅳ组极显著高于对照组（P＜0.01）。试验末期尿素氮第Ⅲ组均显著低于对照组（P＜0.05）；尿酸各组之间差异不显著（P＞0.05）；血氨第Ⅲ组极显著低于对照组（P＜0.01），第Ⅳ组显著低于对照组（P＜0.05）；IgA、IgM试验Ⅲ、Ⅳ组极显著高于对照组（P＜0.01）。IgG试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组极显著高于对照组（P＜0.01）。由此表明，添加0.5%的枯草芽孢杆菌对血清指标的影响比较显著。

枯草芽孢杆菌；血液生化指标；蛋鸡

益生菌是指通过改善宿主肠道内的微生态平衡，促进宿主体内有益菌的优势菌群建立，来达到促进动物健康，提高动物免疫力的一系列细菌的统称。益生菌能够刺激动物产生干扰素，提高肠道免疫球蛋白浓度，从而减轻肠道炎性反应，改善肠黏膜功能，稳定肠道，发挥免疫调节机能（Erika等，2001）。枯草芽孢杆菌作为益生菌的一种，在一定程度上能够刺激免疫器官重量的增加，提高动物机体内抗体和免疫球蛋白水平，从而加强细胞和体液免疫机能；同时自身可以合成一部分酶类，如蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等，弥补动物内源性消化酶分泌的不足，促进对营养物质的吸收（张扬等，2003）。本试验以19周龄“大午金凤”蛋鸡为研究对象，旨在研究不同浓度的枯草芽孢杆菌对蛋鸡血液生化指标影响，为枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂在蛋鸡中的应用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料枯草芽孢杆菌：来自河北农业大学生命科技学院，枯草芽孢杆菌含量约为1.0× 107cfu/g。

1.2 试验动物健康、体重相近的19周龄“大午金凤”蛋鸡。

1.3 试验日粮日粮组成及营养水平（表1）参照NRC（1994）蛋鸡营养需要。

表1 日粮组成及营养水平

1.4 试验分组与设计采取单因子试验设计，将240只健康、体重相近的19周龄“大午金凤”蛋鸡随机分成4个组，每组4个重复，每个重复15只鸡，试验Ⅰ组为对照组，饲喂基础日粮；试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组为试验组，试验Ⅱ组饲喂基础日粮和0.1%的枯草芽孢杆菌；试验Ⅲ组饲喂基础日粮和0.5%的枯草芽孢杆菌；试验Ⅳ组饲喂基础日粮和1%的枯草芽孢杆菌。预饲期为1周，试验期为4周。

1.5 饲养管理本试验在环境控制舱中进行，两层立体笼养，自由采食、自由饮水，温度设定为20℃，湿度设定为60%，光照设定为16L∶8D。按照常规的防疫程序进行清扫和消毒，定期接种疫苗，试验期间时时观察鸡群的健康状况。

1.6 样品的采集在试验期的第2周和第4周，以重复为单位，每个重复随机选取2只鸡，翅下静脉采血，用促凝管收集5 mL，在4～5℃下以3000 r/min离心10 min，吸取上清液，置于血清管内，-20℃冷冻保存待测血清生化指标。血液生化指标主要包括甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCHO）、总蛋白（TP）、尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、血氨（BA）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）。

1.7 测定方法甘油三酯（TG）：采用试剂盒GPO-PAP酶法，单位g/L；总胆固醇（T-CHO）：采用试剂盒COD-PAP法测定，单位g/L；总蛋白（TP）：采用试剂盒法双缩脲法（Biuret法）测定，单位g/L；尿酸（UA）：采用试剂盒酶比色法测定，单位μmol/L；尿素氮（BUN）：采用试剂盒OPA法测定，单位μmol/L；血氨（BA）：采用无蛋白滤液法测定，单位μmol/L。试剂盒购自南京建成生物试剂有限公司，分析仪器采用Microlab 300半自动生化分析仪。IgA、IgM、IgG：采用酶联免疫检测试剂盒检测，试剂盒购自南京建成生物试剂有限公司，分析仪器采用酶标仪。

1.8 数据整理与分析首先利用Microsoft office excel 2007软件进行初步的数据整理，然后采用IBM SPSS Statistics 21.0软件对各个因素进行单因素方差分析，再用LSD进行多重的比较分析。结果以“平均值±标准差”来表示，以P＜0.05来表示差异显著，以P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与分析

由表2可知，试验第2周时，甘油三酯各组之间差异不明显（P＞0.05），但试验组均低于对照组；第Ⅲ组总胆固醇较对照组降低34.86%（P＜0.05）；第Ⅲ组总蛋白较对照组提高42.06%（P＜0.05）；试验第4周时，甘油三酯和胆固醇各组之间差异不明显（P＞0.05），但试验组均低于对照组；第Ⅲ组总蛋白较对照组提高19.05%（P＜0.05）。

表2 枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡甘油三酯、总胆固醇、总蛋白的影响g/L

由表3可知，试验第2周时，第Ⅲ组尿素氮和尿酸较对照组分别降低35.53%和24.91%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ组相对于对照组有降低趋势；第Ⅱ、Ⅲ组血氨较对照组分别降低43.11%，52.64%（P＜0.01），第Ⅳ组较对照组降低30.12%（P＜0.05），试验第4周时，第Ⅲ组尿素氮较对照组降低47.42%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ组相对于对照组有降低趋势；尿酸各组之间差异不显著（P＞0.05）；第Ⅲ组血氨较对照组降低35.81%（P＜0.01），第Ⅳ组较对照组降低25.82%（P＜0.05）。

表3 枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡尿素氮、尿酸、血氨指标的影响μmol/L

由表4可知，试验第2周时，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组IgA分别较对照组提高58.45%、55.98%、41.93%（P＜0.01）；试验Ⅲ、Ⅳ组IgM分别较对照组提高22.14%，13.89%（P＜0.01）；试验Ⅲ、Ⅳ组IgG分别较对照组提高57.89%、40.26%（P＜0.01）；试验第4周时，试验Ⅲ、Ⅳ组IgA分别较对照组提高65.19%、28.03%（P＜0.01）；试验Ⅲ、Ⅳ组IgM分别较对照组提高34.72%、16.61%（P＜0.05）试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组IgG分别较对照组提高69.37%，67.29%、51.91%（P＜0.01）。

3 分析与讨论

3.1 不同浓度枯草芽孢杆菌对血清中甘油三酯、胆固醇、总蛋白的影响血清蛋白指标是机体蛋白质合成代谢的一个重要标志，其中血清总蛋白浓度高是蛋白质代谢旺盛的表现，有利于促进生长和提高饲料转化率。楚青惠（2014）在保育仔猪日粮中添加乳酸菌研究结果表明，血清总蛋白和甘油三酯与对照组相比均无显著差异。吴俊峰等（2012）研究表明，在蛋鸡饲料中添加枯草芽孢杆菌使血清中总蛋白含量呈增加趋势。本试验研究表明，试验中期和末期，试验组中总蛋白质含量均高于对照组，与前人的研究结果相一致，说明添加枯草芽孢杆菌能够增强蛋白质的代谢水平。血清总胆固醇含量受参与胆固醇合成的关键酶-羟甲基戊二酸单酰辅酶A活性的影响，Fukushima（1995）报道，益生菌可以抑制胆固醇合成过程中的关键酶。李福彬（2010）研究结果表明，饲料中添加地衣芽孢杆菌能够降低血清胆固醇含量，这与本试验研究结果相一致。由此可以表明枯草芽孢杆菌也可能通过抑制羟甲基戊二酸单酰辅酶A活性来降低血清胆固醇。

表4 枯草芽孢杆菌制剂对蛋鸡IgA、IgM、IgG的影响μmol/L

3.2 不同浓度枯草芽孢杆菌对血清中含氮物浓度的影响蛋白质进入动物体内在多种酶的作用下生成氨基酸，氨基酸再经分解代谢最终生成氨和其他物质。氨是动物体内的有毒物质，体内的氨大部分通过合成尿素排出体外，一部分合成其他含氮物质（包括非必需氨基酸、谷氨酰胺等），少量的氨可直接经尿排出，禽类则主要是生成尿酸。尿酸是禽类蛋白质分解代谢的主要终产物，尿酸反映了机体蛋白质代谢的差异，蛋白质分解代谢减弱时尿酸含量下降。本试验研究表明，试验中期0.1%、0.5%、1%添加组尿素氮分别降低0.2、1.35、0.52 mmol/L；尿酸分别降低9.56、19.59、15.92μmol/L，血氨分别降低54.28、66.27、37.92μmol/L；试验末期0.1%、0.5%、1%添加组尿素氮分别降低1.73、2.48、2.25 mmol/L；血氨分别降低32.73、50.69、36.55μmol/L；步长英（2008）研究结果表明，饲粮中添加不同浓度的芽孢杆菌使血清中尿酸含量显著提高。杨海英等（2007）试验证明，益生素可使仔猪血清尿素氮含量降低，促进蛋白质沉积；与本试验研究结果一致，说明蛋鸡体内内源蛋白分解减弱，日粮氮素利用率得到有效提高。

3.3 不同浓度枯草芽孢杆菌对IgA、IgM、IgG的影响枯草芽孢杆菌能够刺激畜禽免疫器官的发育，刺激T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强畜禽的细胞免疫和体液免疫功能，提高畜禽机体健康水平（王宗伟等，2015）。冯敏山等（2009）在产蛋鸡饲粮中添加微生态制剂后，发现血清中IgA、IgM、IgG含量均有所提高，祝天龙等（2015）在仔猪饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂后发现，各试验组IgA、IgM、IgG相对于对照组，均有不同程度的提高。枯草芽孢杆菌可显著提高IgA、IgG含量，对IgM有提高的趋势。本试验研究表明，蛋鸡饲粮中添加0.1%、0.5%、1%枯草芽孢杆菌能够使IgA、IgM、IgG含量增加，由此表明枯草芽孢杆菌能够提供蛋鸡免疫力。

4 结论

本试验结果表明，蛋鸡饲粮中添加0.5%的枯草芽孢杆菌能够使总蛋白含量增加；胆固醇、尿素氮、尿酸、血氨含量降低；免疫球蛋白含量升高，从而改善了蛋鸡的免疫水平。

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In order to study the effects of different concentrations of Bacillus subtilis on blood biochemical index of laying hens，a total of two hundred and fouty healthy laying hens of Dawu Jinfeng with similar weight were selected and random ly divided into four groups with four replicates per group and fifteen hens per replicate.Layering hens in control group were fed basic diet.The other three trail groupswere fed diet supplemented with 0.1%，0.5%，1%of Bacillus subtilis respectively for a fourweeks.The results showed that in themiddle and the end of the test，triglycerides of each testgroups showed no significant differences；The total protein of groupⅢwas significantly higher than the control group（P＜0.05）；In themiddle of the test，urea nitrogen and uric acid of groupⅢwere significantly lower than control group（P＜0.05）；Blood ammonia of groupⅡand groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA of treatment groupswas significantly higher than the control group（P＜0.01）；IgM and IgG of groupⅢand groupⅣwere significantly higher than the control group（P＜0.01）；In the end of the test，urea nitrogen of groupⅢwas significantly lower than control group（P＜0.05）；uric acid of each test groups showed no significant differences（P＞0.05）；Blood ammonia of groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA，IgM of groupⅢ，Ⅳwere very significantly higher than the control group（P＜0.01）.IgG of treatment group was significantly higher than the control group（P＜0.01）.It’s concluded that the optimal supplementation of Bacillus subtilis was 0.05%.

Bacillus subtilis；blood biochemical index；laying hens

S816.7

A

1004-3314（2017）06-0015-04

DO I：10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170604

国家蛋鸡产业技术体系建设专项奖金（CARS-41-K18）

*通讯作者