复方中药制剂对SD大鼠血清抗氧化功能的影响

周金星，靳二辉，刘文举，张超超，王思飞，金光明，*

(1.安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100； 2.安徽科技学院 细胞与分子生物学研究中心，安徽 凤阳 233100)

复方中药制剂对SD大鼠血清抗氧化功能的影响

周金星1，2，靳二辉1，刘文举2，张超超1，王思飞1，金光明1，*

(1.安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100； 2.安徽科技学院 细胞与分子生物学研究中心，安徽 凤阳 233100)

由黄芪、板蓝根、炒白术、茯苓、陈皮、山楂、甘草和山药等中药制成的复方中药制剂，研究其对大鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的影响。选择150只断奶SD大鼠(SPF级)分为对照组、1.5 mL·kg-1组、3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组，对照组有15只大鼠，其余试验组各有45只大鼠。试验期间3个试验组大鼠按每千克体质量每天分别灌胃1.5、3.0和6.0 mL复方中药制剂(含生药1 g·mL-1)，对照组灌胃3.0 mL蒸馏水。于试验开始后10、30、60 d，每组分别取5只大鼠禁食禁水10 h后称重、心脏采血，分离血清，测定样本血清的T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量。结果表明，3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组在灌胃后10 、30 和60 d，其血清T-AOC活性与同日期对照组比较有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加；而血清中MDA含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少。3.0 mL·kg-1组在灌胃30 和60 d，血清T-SOD活性与同日龄对照组比较显著增加(P<0.05)；6.0 mL·kg-1组在灌胃30 和60 d，血清GSH-Px活性与同日龄对照组比较显著增加(P<0.05)。说明口服以黄芪、板蓝根、炒白术等药材组成的复方中药制剂可显著提高SD大鼠的抗氧化功能，其对大鼠的最适灌胃剂量为3.0 mL·kg-1。

复方中药制剂；SD大鼠；总抗氧化能力；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；丙二醛

活性氧自由基(reactive oxygen specie，ROS)，具有很强的生物活性，易与细胞成分反应，造成生物膜系统和生物结构的损坏，使蛋白质失活，引起细胞DNA、RNA在结构和功能上的损害[1]。而机体抗氧化系统是动物体内清除多余活性氧、保护自身免受氧化损伤的重要体系，包括非酶类抗氧化剂和酶类抗氧化剂[2]，衡量机体抗氧化功能常用指标主要有总抗氧化能力(total antioxidative capacity， T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase， SOD)、过氧化氢酶(catalase， CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等。这些抗氧化剂在清除体内自由基，减少脂质过氧化产物，防止各种病理变化中发挥重要作用[3]。而生物体内自由基作用于脂质发生过氧化反应的终产物为丙二醛(MDA)，它可引起蛋白质、核酸等生物大分子交联聚合且具有细胞毒性。因此，研究血清中酶类抗氧化剂活性及氧化产物对动物机体的代谢具有重要的意义。

中草药是我国传统药材，具有副作用较小的优点。研究表明，许多中草药对机体具有抗氧化作用，可清除体内氧自由基，张伟等[4]研究表明，将黄芩、黄芪、紫苏、山楂、陈皮等配成中药复方，可显著降低猪血清中MDA含量，GSH-Px的活性显著高于对照组；刘泽静等[5]研究表明，鱼腥草提取物具有较好的抗氧化作用；郝红伟等[6]研究了以乌梅、马苋齿为主要成分的复方中药制剂可以显著增强小鼠血清、心、肝、脾、肾组织中SOD和GSH-Px的活性，降低小鼠上述组织中MDA的含量；吴骁等[7]研究发现，黄芪注射液可有效地提高机体抗氧化酶活性；Guo等[8]研究表明，以黄柏和白术等中药制成的复方制剂具有一定的抗氧化功能。因此，本研究选择黄芪、板蓝根、炒白术、茯苓、陈皮、山楂、甘草和山药等中药按一定比例配比经水浸泡、水煮、浓缩成1 g·mL-1的药液，通过对SD大鼠进行灌胃处理，观察不同时间、不同剂量药剂对SD大鼠血清T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影响，为复方中药制剂开发提供研究基础和依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

150只(25±2)日龄健康、体质量相似的SPF级雄性断奶大鼠购自安徽医科大学实验动物中心(许可证号：SCXK皖2011-002)。大鼠饲养于全膜终端独立通气笼盒(IVC)内，温度为24～28 ℃，湿度为50%～60%，光照时间为12 h·d-1。SD大鼠的饲养管理及IVC的清洗、消毒、灭菌等均严格按照IVC标准化操作规范进行。

1.1.2 试验试剂及仪器设备

总抗氧化能力(T-AOC)测定试剂盒(生产批号：20160802)、超氧化物歧化酶(T-SOD)测定试剂盒(生产批号：20160915)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒(生产批号：20160815)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(生产批号：20160815)均购买自南京建成生物工程研究所；主要仪器有：荧光分光光度计(型号：UV-2700，日本岛津)、高速冷冻离心机(型号：Thermo Scientific Sorvall Stra，德国赛默飞世尔)。

1.1.3 复方中草药配制及制剂的主要成分

试验所用复方中草药主要由黄芪15 g、板蓝根10 g、炒白术10 g、茯苓15 g、陈皮15 g、山楂15 g、甘草10 g和山药10 g等按一定的配比后，添加4倍于复方中草药质量的蒸馏水，经浸泡过夜、水煮、过滤、浓缩、醇沉后，制成复方中药水煎醇沉液，每毫升药液相当于1 g生药材。

复方中药制剂的水煎醇沉液经青岛科标检测研究院对其主要成分含量进行检测，试验所用的水煎醇沉制剂中各主要成分的含量为：总多糖6.12 g·L-1，总皂苷0.448 g·L-1，总黄酮0.047 g·L-1，白术内酯3.67 mg·L-1，甘草苷82.44 mg·L-1。

1.2 试验方法

1.2.1 试验动物的分组与处理

选择150只断奶SD大鼠(SPF级)，分为对照组、1.5 mL·kg-1组、3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组，对照组有15只小鼠，其余试验组各有45只小鼠，预饲养1周后，每天定时测定大鼠体质量变化，称重前3 h，禁食禁水，试验期间三个试验组大鼠按每千克体质量每天分别灌胃1.5、3.0和6.0 mL复方中药制剂，每天灌胃1次，对照组灌胃3.0 mL蒸馏水。

1.2.2 血样采集与检测

各试验组和对照组分别在试验开始后10、30、60 d时间段，每组取5只大鼠禁食10 h以上，称重后经乙醚麻醉，心脏采血，血凝后离心，取血清，经UV2700紫外荧光分光光度计测定样本血清的吸光度，按照试剂盒上公式由吸光度值计算T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量。所有计算方法均按试剂盒操作说明进行。

1.2.3 统计分析

用SPSS20.0统计软件进行所得数据的处理，各组数据之间差异性采用单因子方差分析(One-Way ANOVA)和LSD法进行多重比较分析，以P<0.05作为差异显著性判断标准。所有数据均用平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 复方中药制剂对SD大鼠血清T-AOC的影响

由表1可知，在不同组别的SD大鼠饲养中定时定量灌喂不同剂量复方中药制剂，在试验前期(0～10 d)，除1.5 mL·kg-1组以外，其余各试验组与对照组比较其T-AOC都显著增加，其中3.0 mL·kg-1组增加极显著(P<0.01)；在试验至30 d时，1.5 mL·kg-1组与对照组比较，其T-AOC增加不显著，3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组，其血清中T-AOC与对照组比较增加显著(P<0.05)，但3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组间比较差异不显著；在试验至60 d时，与对照组比较，3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组T-AOC增加极显著(P<0.01)，但1.5 mL·kg-1组T-AOC增加不显著，3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组间比较差异显著(P<0.05)。

2.2 复方中药制剂对SD大鼠血清T-SOD活性的影响

由表2可知，在灌胃10 d后，与对照组比较，3个试验组大鼠血清中T-SOD活性虽然较对照组有所增加，但差异不显著(P>0.05)；试验至30 d时，1.5 mL·kg-1组和3.0mL·kg-1组大鼠血清的T-SOD活性较对照组增加，其中3.0mL·kg-1组血清的T-SOD活性增加显著(P<0.05)，6.0 mL·kg-1组大鼠血清的T-SOD活性较对照组下降，但差异不显著(P>0.05)；试验至60 d时，3.0 mL·kg-1组大鼠血清的T-SOD活性较对照组增加且差异显著(P<0.05)，6.0 mL·kg-1组大鼠血清的T-SOD活性较同日龄对照组下降，但差异不显著(P>0.05)，但与3.0 mL·kg-1组间比较差异显著(P<0.05)。

表1 不同剂量复方中药制剂对SD大鼠血清中T-AOC的影响

Table 1 Effect of different dose compound Chinese medicine preparation on the T-AOC in serum of SD rats U·mL-1

同行数据后无相同大小字母分别表示组间差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)。下同。

Data marked without the same uppercase and lowercase letter in each row indicated significant differences atP<0.01 andP<0.05， respectively. The same as bellow.

2.3 复方中药制剂对SD大鼠血清GSH-Px活性的影响

由表3可知，在灌胃10 d后，1.5 mL·kg-1组血清中GSH-Px活性减少且与对照组比较差异显著(P<0.05)，3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组增加，但与对照组比较差异都不显著(P>0.05)，但与1.5 mL·kg-1组比较差异显著增加(P<0.05)；在灌胃后30 和60 d，6.0 mL·kg-1组大鼠血清中GSH-Px酶活性与对照组比较呈显著性增加(P<0.05)，除在灌胃后30 d，3.0 mL·kg-1组与对照组和1.5 mL·kg-1组差异显著外，其余各试验组与对照组比较差异不显著(P>0.05)。

2.4 复方中药制剂对SD大鼠血清MDA含量的影响

由表4可知，在灌胃后10 d，3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组血清中MDA含量与对照组比较显著减少(P<0.05)，但1.5 mL·kg-1组血清中MDA含量与对照组比较差异不显著(P>0.05)；灌胃30 和60 d时，3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组血清中MDA含量与对照组比较极显著减少(P<0.01)，1.5 mL·kg-1组血清中MDA含量与对照组比较差异不显著(P>0.05)，但1.5 mL·kg-1组与3.0 mL·kg-1和6.0 mL·kg-1组间比较差异显著(P<0.05)。

表2 不同剂量复方中药制剂对SD大鼠血清中T-SOD活性的影响

Table 2 Effect of different doses of compound Chinese medicine preparation on the T-SOD activity in serum of SD rats U·mL-1

表3 不同剂量复方中药制剂对SD大鼠血清中GSH-Px活性的影响

Table 3 Effect of different doses of compound Chinese medicine preparation on the GSH-Px activity in serum of SD rats U·mL-1

表4 不同剂量复方中药制剂对SD大鼠血清中MDA含量的影响

Table 4 Effect of different doses of compound Chinese medicine preparation on the MDA contents in serum of SD rats nmol·mL-1

3 讨论

3.1 中草药复方制剂对SD大鼠血清中T-AOC、T-SOD和GSH-Px的作用

抗氧化剂的主要作用是清除体内较高的氧自由基与机体代谢产物，维持机体代谢的平衡和稳定，当T-AOC降低后，可导致机体活性氧水平升高，产生炎性介质，造成机体组织的损伤。T-SOD可对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞的伤害。GSH-Px活性体现了机体清除体内氧自由基能力，可以保护组织细胞免受损伤和细胞膜结构功能的完整性[9]。本研究结果表明，随着复方中药制剂灌胃剂量和时间的增加，与对照组相比，SD大鼠血清中T-AOC逐渐增加，其中3.0 mL·kg-1组T-SOD活性在灌胃后30 和60 d极显著增加；GSH-Px活性在6.0 mL·kg-1组灌胃后30 和60 d增加显著，说明本复方中药制剂可一定程度上提高血清中T-AOC、T-SOD和GSH-Px活性，增加机体抵抗氧自由基损伤组织细胞的功能。本复方中药制剂中，经青岛科标检测研究院对其主要成分含量进行检测，其中有效成分甘草苷的含量高达82.44 mg·L-1，有学者研究结果表明，甘草苷30 mg·kg-1·d-1组和60 mg·kg-1·d-1组可显著提高小鼠皮肤中SOD的活性[10]，增强脑组织中SOD、GSH-Px活性[11]，因此，本研究中，经灌胃后30 和60 d，其3.0 mL·kg-1组的T-SOD活性的增加可能与复方中药制剂中甘草苷的大量存在相关。

本复方中药制剂中，选取“清热解毒、扶正固本”类中药黄芪、板蓝根、茯苓、陈皮、山楂、甘草及山药为主要组成成分，研究表明，这些中药中含有的多糖成分也具有较好的体内抗氧化作用。日粮中添加不同水平的黄芪多糖，可显著或极显著提高各黄芪多糖处理组雏鸡血清中SOD、GSH-Px和GR的活性，不同程度地提高蛋鸡血清和蛋黄SOD、血清GSH-Px和T-AOC活性[12-14]；陈红梅[15]研究表明，在质量浓度达到0.4 mg·mL-1时，茯苓皮多糖对羟基自由基的清除能力高于Vc，具备天然抗氧化剂的作用；卢华杰等[16]研究结果表明，茯苓多糖具有较好的抗氧化作用。山楂多糖具有较好的抗氧化功能，可以清除DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基能力[17]；山楂蜂花粉多糖及山药多糖对DPPH自由基的清除作用和羟基自由基的抑制作用明显[18-19]。上述研究都注重单一的中草药成分如多糖的抗氧化作用，但中草药药物成分复杂，许多成分如皂苷、黄酮及苷类等都具有抗氧化功能，通过复方组配，可以取长补短，均衡中药制剂中各有效成分的含量，提高复方制剂的抗氧化功能。经对本复方中药制剂检测发现，其总多糖成分高达6.12 g·L-1，总皂苷0.448 g·L-1，总黄酮0.047 g·L-1，白术内酯3.67 mg·L-1，甘草苷82.44 mg·L-1，说明本复方中药制剂中含量较高的多糖、甘草苷、总黄酮等药物成分协同增加了抗氧化功能，可有效地提高SD大鼠血清中抗氧化酶的活性，增强机体的抗氧化能力。值得注意的是，在不同日期，1.5 mL·kg-1组与对照组比较往往差异不显著(P>0.05)，而3.0 mL·kg-1组与对照组比较差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)，说明本复方中药制剂在发挥抗氧化作用时其用量需达到一定的阈值后才能发挥作用，以3.0 mL·kg-1组抗氧化能力最强，6.0 mL·kg-1组有些抗氧化指标反而不如3.0 mL·kg-1组，说明抗氧化能力与复方中药制剂的用量并不呈正相关。

3.2 中草药复方制剂对SD大鼠血清中MDA含量的影响

生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应，氧化的终产物为丙二醛(MDA)，能引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合，且具有细胞毒性。MDA是氧自由基过量形成或抗氧化系统削弱时引起细胞的损伤，其原理是触发细胞膜上的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，从而产生MDA，使细胞膜通透性增加和细胞膜流动性降低，Ca+流入细胞内，使Ca+负荷增加，从而导致细胞的死亡[20]。研究结果表明，饲料中MDA含量增加可导致草鱼生长性能下降，损伤草鱼肝胰腺增加脂肪性肝炎的发生率，以及损伤草鱼肠道绒毛和微绒毛，降低其消化吸收能力[21-22]。对于中药制剂对动物血清及器官组织中MDA水平的影响研究较多，如李姿慧等[23]研究结果表明，参苓白术散能显著改善脾虚湿困型UC大鼠血清EGF、SOD、MDA的水平；于莲等[20]研究了纳米山药多糖可明显降低大鼠结肠中MDA含量。山楂叶总黄酮可抑制高脂饮食所升高的MDA水平[24]，腹腔注射板蓝根多糖可显著降低中华鳖肝脏中MDA含量[25]。因此，通过减少器官或血清中MDA的含量或抑制MDA的产生，将对细胞损伤起重要的保护作用。本研究结果表明，复方中药制剂在3.0 mL·kg-1组和6.0 mL·kg-1组时，与对照组比较其血清中MDA含量呈现显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)减少，说明本复方制剂可有效减少血清中MDA的含量，减少其对细胞产生的损伤。

综上所述，由黄芪、板蓝根、炒白术、茯苓、陈皮、山楂、甘草和山药按一定配比制成的复方中药制剂对提高大鼠血清中T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性和降低血清中MDA含量具有较好的效果，其中以3.0 mL·kg-1灌胃组对大鼠抗氧化功能提高最为显著。

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(责任编辑 卢福庄)

Effect of compound Chinese medicine preparation on the antioxidant function in serum of SD rats

ZHOU Jinxing1，2， JIN Erhui1， LIU Wenju2， ZHANG Chaochao1， WANG Sifei1， JIN Guangming1，*

(1.CollegeofAnimalScience，UniversityofScienceandTechnologyofAnhui，Fengyang233100，China; 2.CellandMolecularBiologyResearchCenter，UniversityofScienceandTechnologyofAnhui，Fengyang233100，China)

To study the effects of compound traditional Chinese medicine preparation， which consists ofRadixastragali，Radixisatidis，Friedatractylodes，Poriacocos， orange peel， hawthorn， liquorice and yam on the T-AOC， T-SOD， GSH-Px activity and MDA content in serum of SD rats. 150 SD rats (SPF animal) were randomly divided into control group， 1.5， 3.0 and 6.0 mL·kg-1treatment group with 15， 45， 45， 45 SD rats， respectively. The rats of different treatment groups were administered using gavage methods according to dosage 3.0 mL·kg-1distilled water for control group， and 1.5， 3.0 and 6.0 mL·kg-1compound traditional Chinese medicine preparation (containing raw herbs 1 g·mL-1) for treatment groups， respectively. Rats were regularly weighed and given medicine or distilled water by gavage every day. On the 10th， 30thand 60thday of the experiment， 5 rats fasted and banned water for 10 h were selected in every experiment group to be weighed and picked blood from the heart， for isolating serum sample to measure T-AOC， T-SOD， GSH-Px activities and MDA content. The results showed that on the experimental 10th， 30thand 60thday， the T-AOC activity in 3.0 mL·kg-1and 6.0 mL·kg-1group significantly (P<0.05) or extremely significantly increased (P<0.01)， and the MDA contents in 3.0 mL·kg-1and 6.0 mL·kg-1group significantly (P<0.05) or extremely significantly decreased (P<0.01)， compared with the control group on the same day. On the 30thand 60thday， the T-SOD activity in 3.0 mL·kg-1group significantly increased (P<0.05)， and the GSH-Px activity in 6.0 mL·kg-1group significantly increased (P<0.05)， compared with the control group. Compound traditional Chinese medicine preparation could significantly improve the SD rats’ antioxidant function. The optimum dosage of compound traditional Chinese medicine preparation to rats was 3.0 mL·kg-1by gavage methods.

compound traditional Chinese medicine preparation; SD rat; T-AOC; T-SOD; GSH-Px; MDA

http://www.zjnyxb.cn周金星，靳二辉，刘文举，等. 复方中药制剂对SD大鼠血清抗氧化功能的影响[J].浙江农业学报，2017，29(5): 737-743.

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.05.08

2016-12-13

安徽省农业科技成果转化项目(1504032001)；安徽省科技攻关项目(1301042102)；安徽省高等学校自然科学研究重点项目(KJ2016A823)；安徽省第七批“115”产业创新团队项目(皖人才[2014]4号)；安徽科技学院重点建设学科项目(AKZDXK2015A04)；北京农学院兽医学(中兽医)北京市重点实验室开放课题(kf2016035)

周金星(1976—)，男，安徽五河人，博士，副教授，主要从事动物组织病理与中草药药理学研究。E-mail: zhoujx@ahstu.edu.cn

*通信作者，金光明，E-mail: jingm@ahstu.edu.cn

S853.1

A

1004-1524(2017)05-0737-07

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2017，29(5): 737-743