参附注射液联合去甲肾上腺素对脓毒症休克大鼠sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响*

陈 烈 刘 霖王智超 张继龙 朱梦莉

（湖北省武汉市中西结合医院，湖北 武汉 430022）

·研究报告·

参附注射液联合去甲肾上腺素对脓毒症休克大鼠sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响*

陈 烈 刘 霖△王智超 张继龙 朱梦莉

（湖北省武汉市中西结合医院，湖北 武汉 430022）

目的 观察参附注射液联合去甲肾上腺素对内毒素诱导的脓毒症休克大鼠sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的影响，探讨参附注射液对脓毒症休克的可能作用机制。方法 SD大鼠60只，制作脓毒症休克大鼠模型，观察给予药物治疗后大鼠血清sCD163、丙二醛、超氧化物歧化酶的变化。结果 空白组给药后1、6、18 h sCD163含量与给药前比较变化不明显（均P＞0.05）。模型组1、6、18 h sCD163含量与给药前比较，均升高（均P＜0.05）。西药组、参附组、西药加参附组sCD163含量给药后与给药前比较，均下降（均P＜0.05）。各组给药后sCD163含量与模型组给药后同期比较，差异均有统计学意义 （均P＜0.05）。西药加参附组给药后sCD163含量与西药组、参附组两组同期比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。造模后模型组、西药组、参附组、西药加参附组超氧化物歧化酶含量与空白对照组比较明显下降（均P＜0.05）；丙二醛含量则均明显升高（均P＜0.05）。西药组、参附组、西药加参附组给药后18 h超氧化物歧化酶含量与模型组同期比较均升高（均P＜0.05）；而丙二醛含量与模型组同期比较均下降（均P＜0.05）。且西药加参附组的超氧化物歧化酶含量高于同期单纯西药组、参附组（均P＜0.05）；而丙二醛含量则低于同期单纯西药组、参附组（均P＜0.05）。结论参附注射液对脓毒症休克大鼠具有抗氧化作用，sCD163可作为脓毒症的诊断指标及疗效评价指标。

脓毒症休克 参附注射液 sCD163 丙二醛 超氧化物歧化酶

脓毒症是由于病原微生物释放大量内毒素所致的全身炎性反应综合征，如治疗不及时，可能发展为脓毒症休克、多器官功能障碍（MODS）。统计结果表明，约40%重症患者合并有脓毒血症，其死亡率高达36%，已成为严重威胁人类健康的疾病［1］。研究发现脓毒症中氧化应激反应与多脏器功能衰竭密切相关。近几年国内外学者开始应用抗氧化剂治疗脓毒症，并将其视为最有应用前景的治疗方法之一。本研究通过观察参附注射液对脓毒症大鼠sCD163、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量变化，进一步探讨参附注射液的作用机制，为临床应用提供相关理论依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠60只，体质量（250±10）g，由武汉尚合生物有限公司提供（编号13900021）。

1.2 试验用药及试剂 参附注射液（四川雅安三九药业有限公司生产，批号111232）。去甲肾上腺素（批号141204）。脂多糖（LPS）由上海晶优生物科技有限公司提供。留取的血清标本应用于sCD163的检测（Elisa大鼠试剂盒在武汉新启迪科技有限公司购买）。采用黄嘌呤氧化酶法检测血清中SOD活性；硫代巴比妥酸显色法（TBA法）检测血清中MDA含量。

1.3 造模方法 60只SD大鼠以戊二醛（剂量0.6 mL/ 100 g）腹腔注射麻醉，尾静脉注射LPS 0.5 mg/kg，并将右颈动脉插管与多导联生理记录仪连接，记录MAP、心率，当MAP下降至基础动脉压的20%～30%提示造模成功。健康大鼠复制脓毒症休克模型过程中，有4只大鼠意外死亡，6只大鼠平均动脉压未达实验标准而被淘汰。剩余50只大鼠参与实验。

1.4 分组及给药 实验大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、西药组、参附组、西药加参附组5组，每组10只。空白对照组即健康大鼠，不造模。模型组造模后，大鼠尾静脉注射参附组同剂量0.9%氯化钠注射液。西药组造模后，大鼠尾静脉注射去甲肾上腺素剂量为［0.1～0.2 μg/（kg·min）］。参附组造模后，大鼠尾静脉注射参附注射液1.5 mL/kg。西药加参附组造模后，大鼠尾静脉注射去甲肾上腺素加参附注射液，剂量如上所述。

1.5 标本采集及处理 正常对照组大鼠通过尾静脉留取血液。模型组、西药组、参附组、西药加参附组在给药前及给药后1、6、18 h分别取血，血标本经3000 r/min离心，留取血浆及血细胞。

1.6 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件处理。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组脓毒症模型大鼠sCD163含量比较 见表1。结果示，空白组给药后1、6、18 h sCD163含量与给药前比较变化不明显 （均P＞0.05）。模型组1、6、18 h sCD163含量与给药前比较，均升高（均P＜0.05）。西药组、参附组、西药加参附组sCD163含量给药后与给药前比较，均下降（均P＜0.05）。各组给药后sCD163含量与模型组给药后同期比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。西药加参附组给药后sCD163含量与西药组、参附组两组同期比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05），提示联合治疗组效果优于单用药物治疗组。

2.2 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h SOD含量比较 见表2。结果示，造模后模型组、西药组、参附组、西药加参附组SOD含量与空白对照组比较明显下降（均P＜0.05）。西药组、参附组、西药加参附组给药后18 h SOD含量与模型组同期比较，均升高（均P＜0.05）；且西药加参附组SOD含量高于同期单纯西药组、参附组（均P＜0.05）。

表1 各组脓毒症模型大鼠sCD163含量比较（ng/mL，±s）

表1 各组脓毒症模型大鼠sCD163含量比较（ng/mL，±s）

与本组给药前比较，*P＜0.05；与模型组同期比较，△P＜0.05；与西药组、参附组同期比较，#P＜0.05。

组别 n空白对照组 10模型组 10西药组 10给药前 给药后1 h 给药后6 h 给药后18 h 19.15±6.50 20.68±8.78 20.41±9.18 21.35±8.76 75.64±15.35 88.76±17.35*97.28±19.32*108.22±24.31*81.45±22.51 68.50±16.47*△51.42±19.23*△33.26±15.92*△参附组 10 78.80±23.45 73.35±18.64*△56.64±17.83*△34.52±18.19*△西药加参附组 10 86.77±17.80 66.81±18.42*△#45.39±16.48*△#26.42±14.86*△#

表2 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h SOD含量比较（U/mL，±s）

表2 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h SOD含量比较（U/mL，±s）

与空白对照组比较，&P＜0.05；与本组给药前比较，*P＜0.05；与模型组同期比较，△P＜0.05；与西药组、参附组同期比较，#P＜0.05。下同。

组别 n空白对照组 10模型组 10西药组 10给药前 给药后18 h 440.21±26.21 442.56±29.38 310.77±24.95&281.65±27.53&308.83±23.31&363.71±26.45&*△参附组 10 309.57±25.43&353.82±27.69&*△西药加参附组 10 310.08±25.81&395.77±26.25&*△#

2.3 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h MDA含量比较 见表3。结果示，经造模后模型组、西药组、参附组、西药加参附组MDA含量与空白对照组比较均明显升高（均P＜0.05）。西药组、参附组、西药加参附组给药后18 h MDA含量与模型组同期比较，均下降（均P＜0.05）；且西药加参附组MDA含量低于同期单纯西药组、参附组（均P＜0.05）。

表3 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h MDA含量比较（nmol/L，±s）

表3 各组脓毒症模型大鼠给药前、给药后18 h MDA含量比较（nmol/L，±s）

组别 n空白对照组 10模型组 10西药组 10给药前 给药后18 h 2.27±0.59 2.25±0.68 6.35±0.55&8.84±0.47&*6.52±0.61&4.58±0.61&*△参附组 10 6.68±0.54&4.73±0.54&*△西药加参附组 10 6.47±0.63&3.38±0.42&*△#

3 讨 论

中医学认为感染性休克的基本病机是“阳气耗损，邪毒内陷”，参附注射液组方源自参附汤，由红参、黑附片组成，具有回阳救逆、益气固脱的功效，临床常用来治疗休克重症［2-3］。现代药理研究发现参附注射液中含有人参皂苷、人参蛋白、乌头碱类生物碱等多种活性成分，其中人参皂苷可通过调节过氧化氢酶（CAT）和血清SOD活性，具有抗氧化作用，而人参蛋白可提高耐缺氧能力［4-7］。

近些年，氧化应激与脓毒症的关系倍受关注，目前认为脓毒症疾病过程中的氧化损伤或是导致细胞损伤、器官功能失调、机体死亡的重要原因。氧化应激是指机体遭受感染刺激后，大量炎性介质释放，通过呼吸爆发，产生过多活性氧（ROS）或其代谢障碍并超过内源性抗氧化系统对其的消除能力时，致使脂质过氧化、蛋白质变性、核酸受损及线粒体、内质网等细胞器损伤，从而导致组织损伤［8-9］。部分研究表明脓毒症相关器官功能障碍的发生和发展与氧化应激反应密切相关，其可能主要通过高活性氧代谢物直接修饰宿主蛋白质的转录调控导致酶功能失调、对细胞成分造成脂质过氧化损伤，破坏生物膜通透性，改变遗传信息，导致细胞结构、代谢和功能紊乱［10-11］。另一方面，脓毒症时器官组织多合并缺血缺氧，在这种缺血缺氧情况下又可使活性氧（ROS）产生增加，从而进一步加重组织损伤。本研究中发现应用参附注射液联合去甲肾上腺素治疗后大鼠SOD含量升高，MDA含量下降，较单纯参附组或西药组数值改变幅度更明显，提示其有较好抗氧化作用，与目前现代药理学研究结果基本一致。

脓毒症以全身炎性反应综合症为主要表现的疾病，是急诊监护病房中常见的疾病之一，易合并多脏器功能衰竭，死亡率高。CD163又名血红蛋白清道夫受体，分子量约130 KDa，属于清道夫受体家族B类第一亚组，是目前仅发现存在于单核-巨噬细胞系统细胞膜上的跨膜分子［12］。脓毒症时细菌分泌的内毒素能诱导巨噬细胞细胞膜上的CD163经蛋白切割后成为可溶性血红蛋白清道夫受体（sCD163）于血液中。有学者通过研究证实sCD163可通过巨噬细胞对炎症进程调节，并可通过巨噬细胞诱导生成CO，发挥抗炎作用［13-14］。Gaini S等通过观察脓毒症患者sCD163与CRP的变化，证实sCD163对脓毒症的预后判断有重要意义，其敏感性明显优于CRP，可做为临床评估感染严重程度的敏感指标及疗效评价指标，值得临床推广及应用［15-16］。本实验中发现经LPS造模成功后模型组sCD163值随时间推移逐渐升高，而空白对照组sCD163的含量无明显变化。给予相应药物治疗后，西药组、参附组、西药加参附组治疗后sCD163值较前下降，其中西药加参附组与单纯西药组、参附组相比较差异有统计学意义，提示参附注射液联合去甲肾上腺素效果优于单用西药组或参附组。

综上所述，本研究通过参附注射液联合去甲肾上腺素观察对脓毒症大鼠sCD163、SOD、MDA的影响，发现SCD163可作为早期脓毒症诊断指标及脓毒症严重程度及治疗效果评价指标，并证实参附注射液有一定的抗氧化作用，值得进一步深入研究。

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Effect of Shenfu Injection Combined with Norepinephrine on sCD163，Malondialdehyde and Superoxide Dismutase in Endotoxin Induced Septic Shock Rats

CHEN Lie，LIU Lin，WANG Zhichao，et al. WuhanHospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Hubei，Wuhan 430022，China.

Objective：To observe the effect of Shenfu injection combined with norepinephrine on sCD163，malondialdehyde and superoxide dismutase in endotoxin induced septic shock rats and study the possible mechanism of Shenfu injection on septic shock.Methods：60 SD rats were selected to make septic shock rat models.The changes of serum sCD163，malondialdehyde and superoxide dismutase after treatment was observed.Results：Shenfu injection combined with noradrenaline decreased the numerical treatment of sCD163，MDA in septic shock rats，compared with Western medicine group and Shenfu group，the difference had statistical significance.And superoxide dismutase content of Western medicine+Shenfu group was higher than that of the western medicine group and the Shenfu group，the difference was statistically significant（all P＜0.05）.The curative efficacy in the norepinephrine injection+Shenfu group was superior to Shenfu injection group or western medicine group.Conclusion：Shenfu injection has antioxidant effect on septic shock rats，sCD163 can be used as a diagnostic index and therapeutic evaluation index of sepsis.

Shenfu injection；Septic shock；SCD163；Malondialdehyde；Superoxide dismutase

R285.5

A

1004-745X（2017）04-0598-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.04.010

2016-12-20）

武汉市卫计委科研资助项目（WZ14A05）

△通信作者（电子邮箱：linln750215@163.com）