HPLC测定蒙药阿如健脾散中没食子酸的含量Δ
2017-06-05萨仁格日乐陈红梅乌力吉王秀兰
萨仁格日乐 朝 鲁 陈红梅 奥·乌力吉 王秀兰
(1.内蒙古民族大学附属医院,内蒙古 通辽 028041;2.内蒙古蒙医药工程技术研究院,内蒙古 通辽 028041;3.新疆博州蒙医医院,新疆 博乐 833400;4.内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古 通辽 028041)
HPLC测定蒙药阿如健脾散中没食子酸的含量Δ
萨仁格日乐1,2朝 鲁3陈红梅1奥·乌力吉2,4王秀兰2,4
(1.内蒙古民族大学附属医院,内蒙古 通辽 028041;2.内蒙古蒙医药工程技术研究院,内蒙古 通辽 028041;3.新疆博州蒙医医院,新疆 博乐 833400;4.内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古 通辽 028041)
目的:建立高效液相法测定蒙药阿如健脾散没食子酸含量的方法,为建立该药物的质量标准提供科学方法。方法:采用Inertsil-ODS-35um(250L×4.6)色谱柱,甲醇-水-乙腈-磷酸(20:480:10:2.5)为流动相,流速1mL/min,柱温25℃,在273nm处测定蒙药阿如健脾散中没食子酸的含量。结果:没食子酸线性范围为60~600μg,r=0.998,平均加样回收率为98.86%,RSD=0.74%;结论:本方法简便快速、准确可靠,为该制剂的质量标准制定提供可靠依据。
HPLC法;蒙药阿如健脾散;没食子酸
蒙药阿如健脾散由诃子、五灵脂、寒水石(制)、土木香、胡黄连等5味药组成的传统蒙药制剂。具有健脾和胃,理气镇痛功效,主要用于“赫依协日”、“宝日”、“巴达干”病引起的胃腕胀满,上腹疼痛诸症[1-2]。本文中笔者以诃子中主要成分没食子酸为指标,采用HPLC法测定其含量,为建立该药物的质量标准提供科学方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器:LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-20A型检测器;KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);AUX220型电子天(Max220gd=0.01mg)(日本岛津)。
1.2 试药:三批阿如健脾散:内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室(20160409,20160410,20160411);没食子酸对照品()110831-201605:中国药品生物制品检定所,批号110713-200708;乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其余溶剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件[3]:LC-20AT泵,SPD-20A检测器,SIL-20A全自动进样器,Labsoiution工作站;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Inertsil-ODS色谱柱(250mm*4.6);流动相:甲醇:水:乙腈-磷酸(4:96:0.2:0.05),流速1.0mL/min;柱温25℃;检测波长273nm;理论板数3000以上。
2.2 标准曲线的制备:精密称取没食子酸对照品适量,加甲醇制成每1mL含60ug的溶液。精密吸取没食子酸对照品溶液1.0μL、2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL进样,测定其峰面积。按峰面积积分值对浓度进行线型回归计算,得标准曲线回归方程为A=58156C-40977,R=0.998。结果表明没食子酸在60~600μg范围内呈良好的线性关系,结果见表1。
表1 没食子酸进样量(μg)与峰面积(A)的关系
2.3 空白干扰实验:按阿如健脾散处方比例称取除诃子以外的其它药材适量,依照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液,在相同的色谱条件下测定,阴性对照溶液在没食子酸出峰位置上无干扰。结果见图1~3。
图1 没食子酸对照品色谱图
图2 阴性对照品色谱图 图3 阿如健脾散色谱图
2.4 精密度实验:取浓度为60μg/mL的对照品溶液及样品液各1μL,分别进样,重复5次测定峰面积。结果为对照品RSD=0.57%,样品RSD=1.11%。
2.5 重复性实验:取同一批号样品5份,按样品测定项下方法制备和测定,其RSD=1.05%。
2.6 回收率试验:精密称取已知没食子酸的样品5份,分别加入一定量的没食子酸对照品,按供试品处理方法处理后进样1μL测定,计算没食子酸回收率,结果见表2。
表2 样品回收率试验结果
3 供试品溶液的制备和测定[4]
3.1 供试品溶液的制备:称取3个批号阿如健脾散约粉末1.50g,精密称定,置加甲醇具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,过滤,加甲醇定容至50mL,摇匀,即得。
3.2 供试品溶液的测定:精密吸取供试品液1μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算含量,结果见表3。
表3 阿如健脾散中没食子酸的含量(n=3)
4 讨论
诃子为阿如健脾散中的主药之一,占组方的40.0%,没食子酸为其主要活性成分之一。本文分别以水:甲醇:冰醋酸及甲醇:水:乙腈-磷酸为流动相,采用HPLC法测定没食子酸的含量,结果甲醇:水:乙腈-磷酸较好的分离效果较好,因此选定该流动相进行含量测定。实验表明本方法简便易行,重现性好,为建立该药物的质量标准研究奠定了良好基础。
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)[S].1998:149.
[2]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准[S].1984:337.
[3]内蒙古自治区食品药品监督管理局.内蒙古蒙药制剂规范注释(2007年版;第一册下)[S].呼和浩特:内蒙古人民出版社,2007:125.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:1363.
2016年12月22日收稿
内蒙古蒙医药科技重大专项项目子课题(GLY20150710)
萨仁格日乐(1968.9-)内蒙古通辽科左后旗人,内蒙古民族大学附属医院工作, 主任蒙药师,从事蒙药制剂及质量标准研究。
R291.2
B
1006-6810(2017)04-0042-02