淋巴瘤患者血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达及临床意义

麻鸿飞，季生吉，马连学

（辽宁抚顺矿务局总医院检验科 辽宁 抚顺 113008）

淋巴瘤患者血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达及临床意义

麻鸿飞，季生吉，马连学

（辽宁抚顺矿务局总医院检验科 辽宁 抚顺 113008）

目的 探讨淋巴瘤细胞患者血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达情况及临床应用价值。方法选取淋巴瘤患者36例，淋巴结炎性肿大患者36例与健康人群36例，抽取外周血，经处理后，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR)测定3组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达情况，并分析三种miRNA的诊断率。结果淋巴瘤病例组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达量显著高于淋巴结炎性肿大组、健康对照组（P＜0.05）；miR-21诊断率为56.92%，miR-155诊断率为66.13%，miR-210诊断率为48.08%，三者联合诊断率为83.33%。结论通过对血浆中miR-21、miR-155、miR-210的表达进行测定，可用于淋巴瘤的临床诊断与疗效判定，且三者联合检测具有较高诊断率，值得推广。

淋巴瘤；miRNA；表达；意义

淋巴瘤是一种源自淋巴组织和淋巴结的恶性肿瘤疾病，该病男性患病率高于女性，该病发病率以4%的速度逐年递增，迅速成为了严重影响人类健康的恶性肿瘤，给人们的生命健康造成了极大的威胁[1]。为此，加强淋巴瘤的诊断、治疗与预后评价成为控制淋巴瘤的关键。目前，淋巴瘤诊断主要依靠淋巴结活检病理诊断，但若淋巴瘤不属于非表浅淋巴结肿大或者淋巴结较小的情况，则很难取材，并且病理诊断无法分析肿瘤负荷、分期、浸润程度等情况，无法为临床治疗提供更加全面的临床信息。游离肿瘤标志物主要是指蛋白多糖、细胞因子、核酸等物质，其主要由肿瘤细胞内部或者表面合成，或者由其他细胞诱导合成，并在其他体液、血液中均有相应表达。微小RNA（miRNA）作为一种单链小分子RNA，调节着人类1/3左右的基因。近年来，大量临床报道证实[2]，在细胞生命活动调节中，miRNA可能参与各种信号传导途径，并在细胞分化、增殖、免疫反应等过程中发挥着重要作用，故推断血浆中miR-21、miR-155、miR-210可作为淋巴瘤诊断、疗效评价的重要指标。现结合本科室淋巴瘤患者血浆miR-21、miR-155、miR-210测定结果做如下总结。

1 资料与方法

1.1 临床资料 本研究病例均来自本院2013年1月～2015年12月接诊的淋巴瘤患者，所有患者均经淋巴结组织病理学检测确诊，选取36例作为本研究病例组，其中女12例，男24例，平均年龄（54.21±2.21）岁；从同期接诊患者中选取淋巴结炎性肿大患者36例，其中女14例，男22例，平均年龄（52.35±2.62）岁；另从同期健康体检人群中选取健康人群36例作为对照组，其中女15例，男21例，平均年龄（53.57±2.41）岁，3组患者临床资料比较差异均无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与预处理 每例对象各取外周血3 mL，置于EDTA-K2抗凝管内，以1 600 rpm速度，行10 min离心处理，取上层血浆转移至EP管内，再以13 300 rpm速度，行10 min离心处理，取上层血浆置于EP管内，保存在-80℃环境下备用。

1.2.2 总RNA提取与纯化预处理 取1.5 mLEP管，置入500 μL血浆，置于75℃中加热5 min，放置于42℃下温育1 h。向处理后样本中加入体积相等的TRIzol试剂，充分混合，静置于室温下，20 min后向其中加入氯仿（1/5体积），充分振荡15 s，静置2 min；在4℃下行15 min离心处理，取上清液，并向其中加入体积相等的异丙醇，充分摇匀，放置于-20℃环境下沉淀，次日再次于4℃环境下，行10 min离心处理，去除上清液，并向其中加入75%乙醇（1倍体积），充分洗涤后，再次于4℃环境下，行10 min离心处理，去除上清液，沉淀晾干之后向其中加入适量的DEPC·H2O，确保其完全溶解，即可获得血浆RNA样本。

1.2.3 RNA定量与质量鉴定 采用分光光度计对RNA纯度、浓度进行测定，做好标记。

1.2.4 RT-PCR 运用实时定量反转录-聚合酶链反应（RTPCR)对总RAN RT引物、PCR引物进行测定。

1.2.5 PCR产物电泳及分析 取标本PCR产物8 μl电泳，对目的PCR产物条带进行测定，并运用Quantity one软件对扩增条带亮度进行分析，并测定基因U6亮度。

1.3 统计学方法 采用SPSS15.0对本次研究数据进行分析处理，组间均数比较独立样本均以t值检验。α=0.05为检验标准。

2 结果

2.1 3组对象3种miRNA表达 淋巴瘤病例组血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达量与淋巴结炎性肿大组、健康对照组比较，有显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 3组对象3种miRNA表达诊断价值 miR-21诊断率为56.92%，miR-155诊断率为66.13%，miR-210诊断率为48.08%，三者联合诊断率为83.33%。见表2。

3 讨论

淋巴瘤的发病原因目前尚不明确，但学界认为与自身免疫功能异常、感染、放射性物质环境等均有直接关联[3]。组织活检是淋巴瘤诊断的主要标准，该方法具有较高准确性，且操作方法非常直观，但这种方法取材难度较大，加之创伤面积大，患者普遍难以接受。为此，排除临床特征检查和影像学等诊断手段，血清肿瘤标记物的优势随之体现，并成为了临床疾病诊断、预后判断等重要方法[4]。目前关于miRNA的来源问题尚无统一定论，但经过长期的研究已证实，其与血细胞有较大关联，且经过大量实验发现，外周miRNA在酸碱、温度等变化的情况下，其表达仍然非常稳定，同时外周血不存在性别差异，更利于参照值的设定[5]。为此，血浆miRNA检测是一种操作简单且不易受干扰的标志物，故本研究通过对血浆中miR-21、miR-155、miR-210表达进行测定，分析其在淋巴瘤诊断中的应用价值。

表1 miR-21、miR-155、miR-210在3组中的表达量（±s）

表1 miR-21、miR-155、miR-210在3组中的表达量（±s）

注：与病例组比较，aP＜0.05

项目miR-21 miR-155 miR-210健康对照组（n=36）1.10±0.55a1.04±0.49a1.50±0.91a病例组（n=36）1.34±0.39 1.23±0.34 2.01±1.01淋巴结炎性组（n=36）0.78±0.23a0.62±0.35a1.09±0.32a

表2 miR-21、miR-155、miR-210对3组的诊断率（n）

miR-21在多种实体瘤中均有表达，有研究者[6]通过对比正常人与弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清中miR-21表达，结果发现，淋巴瘤患者的表达量是常人的2.56倍左右，故其认为在弥漫大B细胞淋巴瘤诊断、鉴别中，可将miR-21作为重要标志物。miR-155位于人类21号染色体上，其表达水平直接受到BIC转录水平的影响。有研究[7]通过对弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清miR-155表达量进行测定，结果发现，miR-155的拷贝数相较于正常的B细胞中表达量高出10-30倍。miR-210作为一种缺氧特异性miRNA，当体外处于缺氧状态时，其表达量会呈现为明显升高，有研究者[8]通过对弥漫大B细胞淋巴瘤患者血清与淋巴组织中miR-210表达量进行测定发现，均呈现为高表达，且相较于常人高出4.15倍。

本研究通过选取miR-21、miR-155、miR-210作为肿瘤检测标志物，采用RT-PCR对其表达量进行测定，结果发现，淋巴瘤病例组患者中miR-21、miR-155、miR-210表达量均显著高于淋巴结炎性肿大组、健康对照组（P＜0.05）。该结果与上述各文献报道结果一致，这表明miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中均呈现为高表达，可用于淋巴瘤的临床诊断。另通过对miR-21、miR-155、miR-210诊断价值进行对比，结果显示，三者联合诊断的诊断率可达到了83.33%，显著高于miR-21、miR-155、miR-210单一诊断率。该结果表明，三者联合诊断具有更高的诊断价值。

综上所述，通过对淋巴瘤、淋巴结炎性肿大与健康人群血浆中miR-21、miR-155、miR-210进行测定，证实miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤中呈现为高表达，且三者联合诊断具有较高价值，故认为miR-21、miR-155、miR-210在淋巴瘤诊断、治疗、预后判定中具有较高应用价值。

[1]胡应霞，张海蓉，石围，等.血浆miR-155、miR-196a、miR-21和miR-210对胰腺癌的早期诊断价值[J].肿瘤，2015，34（10）：1135-1143.

[2]叶俏，沈洁，黄菊.血浆循环DNA在原发性干燥综合征和淋巴瘤中的比较分析[J].中华全科医学，2014，11（1）：15-17.

[3]李春红，付蓉，王一浩，等.miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤组织中的表达及临床意义[J].中国实验血液学杂志，2014，21（2）：339-343.

[4]李春红，付蓉.miR-21过表达与淋巴瘤诊治[J].中国肿瘤临床，2014，51（7）：471-474.

[5]史晋叔，张娟，李剑.miR-155在弥漫性大B细胞淋巴瘤发病中的作用及可能机制[J].中国实验血液学杂志，2014，21（3）：869-872.

[6]卞国奉，陈爱军.miR-21、miR-155在乳腺癌患者血液与肿瘤组织中表达水平的相关性研究[J].海南医学，2012，39（18）：1-3.

[7]俞心念，陈宝安.MicroRNA在弥漫大B细胞淋巴瘤诊断预后方面的研究进展[J].中国实验血液学杂志，2013，20（5）：1351-1355.

[8]马瑞，哈德提·别克米托夫，顾霞，等.淋巴瘤组织和血浆中TNT-α表达及其临床意义[J].临床与实验病理学杂志，2011，26（9）：939-943.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.07.014