消毒前后孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌污染情况监测

方志　张丹俊　沈学怀

摘要[目的]通过对安徽某大型种鸡孵化场在消毒前后孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌污染情况的监测，评估该孵化场的消毒程序、消毒剂选择和使用方法的可行性和实际效果。[方法]采用平板暴露自然沉降法，选用麦康凯培养基为选择性采样培养基，SS培养基为沙门氏菌的进一步鉴别培养基，对分离菌进行革兰氏染色、镜检，并对3种不同消毒剂消毒和未消毒时孵化室空气中的细菌数及孵化出雏时的健雏率进行比较。[结果]连续2 d未消毒，孵化室各功能区即可检测到沙门氏菌和大肠杆菌，且数量随未消毒时间的延长而增多；分别使用安立消、过氧乙酸、聚维酮碘3种消毒剂任一种连续消毒2 d后，孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌数量均降为0，健雏率较未消毒时明显提高。[结论]安立消、过氧乙酸、聚维酮碘3种消毒剂在选择正确的稀释浓度、消毒方法和消毒程序后，可以有效杀灭孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌，建议作为孵化室消毒的首选消毒剂交替选用。

关键词消毒；孵化室；空气；沙门氏菌；大肠杆菌；监测

中图分类号S851.2+4文献标识码

A文章編号0517-6611（2017）36-0075-05

Abstract[Objective]To evaluate the disinfection procedures，choice of disinfectant，feasibility and practical effect of the disinfection method by monitoring the pollution of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room before and after disinfection in a large chicken hatchery of Anhui Province.[Method]The experiment was carried out by natural sedimentation on exposed flat method，with MacConkey culture media as a selective sampling medium.

SS medium was used to further identify Salmonella，and it was confirmed by gram staining and microscopic examination.The number of bacteria in air and health chicks rate in incubator were compared among three different disinfectants and unsterilization.[Result] Salmonella and E.coli were found in each function region of hatchery room after unsterilization for 2 days.With the extension of unsterilization time，the quantity showed an increasing trend.The number of Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room reduced to zero after any of three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine） were used after 2 days.The rate of healthy chicks were significantly improved.[Conclusion] Three kinds of disinfectants （Anlixiao，peracetic acid，povidone iodine）could effectively kill Salmonella and E.coli in the atmosphere of hatchery room with the appropriate diluted concentration，sterilization method and disinfection procedures，so it was suggested that the three disinfectants should be alternately used.

Key wordsDisinfection；Hartchery room；Atmosphere；Salmonella；Escherichia coli；Monitoring

养鸡业在我国畜牧业生产中占重要份额，我国已成为世界养鸡数量最多的国家之一。随着养鸡业集约化、规模化程度的不断提高，环境污染带来的疫病风险也日益加重，严重影响了我国养鸡业的健康发展。其中，孵化室环境污染是雏鸡染病的重要途径之一，可导致雏鸡在孵化和出雏过程中感染某些病原（如沙门氏菌、大肠杆菌等），导致雏鸡早期感染、死亡率增高和生长性能受阻等，因此做好孵化室环境消毒工作是控制雏鸡早期感染、提高成活率和养殖效益的重要一环。沙门氏菌和大肠杆菌是雏鸡的2种重要的致病菌[1]，其中沙门氏菌为革兰氏阴性短小杆菌，常单独存在或成对排列，不形成芽孢和荚膜，需氧及兼性厌氧，最适生长温度为37 ℃，最适pH为6.8～7.8。除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，其他沙门氏菌都有周身鞭毛。沙门氏菌在人或动物肠道内寄生，有的可引发人畜共患病。该细菌在鸡群内以垂直传播为主要传播方式，也可通过污染的粪便、饲料、饮水、空气或其他媒介水平传播。沙门氏菌对雏鸡的危害较大，能够引起鸡的沙门氏菌病，如鸡白痢、鸡副伤寒等。大肠杆菌为革兰氏阴性卵圆形或短杆菌，中等大小，以单个或成对形式存在，需氧及兼性厌氧，最适宜生长温度为37 ℃，最适pH为7.2～7.4，是人和动物肠道内正常菌群的成员之一。在雏鸡出生后数小时可经口进入消化道，大量繁殖定居，终生伴随，并随粪便排出，造成水源、土壤、空气等污染。大肠杆菌如果侵入肠道以外的组织器官，即可引发鸡群发生大肠杆菌病，临床上主要表现为眼炎、气囊炎、腹膜炎、关节炎、输卵管炎、大肠杆菌肉芽肿和败血症等[2]。

笔者通过对安徽省某大型种鸡孵化场孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌污染情况进行监测，评估该孵化场的消毒程序、消毒剂的选择和使用方法的可行性和实际效果，旨在为做好孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌的消毒灭源工作提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料麦康凯培养基（青岛高科园海博生物技术有限公司）；SS培养基（杭州百思生物技术有限公司）；营养琼脂培养基；直径9 cm的一次性培养皿；喷雾消毒器；冰箱（型号为BCD-222，为合肥美菱股份有限公司产品）；恒温箱（型号为SHP-250，为上海三发科学仪器有限公司产品）；高压灭菌锅（型号为XFS-280A+，为浙江新丰医疗器械有限公司产品）；超净工作台（型号为SW-D-2F，为上海博讯实业有限公司有限公司医疗设备厂产品）；消毒剂（安立消，由瑞普生物药业有限公司生产；过氧乙酸，由广州粤丰动物保健有限公司生产；聚维酮碘，由山西新开元动物兽药有限公司生产）。

1.2试验方法

1.2.1孵化室现行消毒程序和消毒方法。

该场孵化室可分为5个功能区：入口处的消毒通道、种蛋贮藏室、孵化大厅、照蛋室和出雏厅。

孵化室入口处分别设置男、女2个更衣室和消毒通道，工作人员进入孵化室必须更换工作服和鞋、帽并经过消毒通道喷雾消毒后方可入内。

种蛋收集后，先放入种蛋贮藏室。种蛋贮藏室分为消毒室和蛋库两部分。首先放入种蛋消毒室，种蛋在此码盘上架后，在密闭的消毒室内用臭氧进行消毒，根据种蛋数量选择30～50 min的消毒时间。种蛋用臭氧消毒后推入蛋库内保存，蛋库内湿度保持在70%～80%，温度12～18 ℃。蛋库地面每天用蘸有消毒药水的湿拖把拖刷，空气用相同消毒剂按照说明书规定比例稀释后进行喷雾消毒。

孵化大厅每天在清扫或冲刷干净后，定时用选定的消毒剂进行喷雾消毒；照蛋室和出雏厅在照蛋和出雏结束后，要对地面和墙壁进行清扫或冲洗，并打开风扇进行通风和排浊，待地面干燥后，关闭风扇，用选定的消毒剂对室内空气和地面实施喷雾消毒。

孵化箱和出雏箱的消毒：孵化箱和出雏箱的顶部容易沉积灰尘和绒毛，应定时用吸尘器吸除灰尘和绒毛。孵化箱内部在种蛋推入前、出雏箱内部在胚蛋推入后均使用高锰酸钾和福尔马林进行熏蒸消毒，具体用量为：高锰酸钾15 g/m3、福尔马林30 mL/m2， 熏蒸时长15～20 min。

蛋盘和出雏盘均在使用后先用高压水枪进行冲洗清洁，放置阳光下晒干或者在清洁、通风的室内晾干后，再用选定的消毒剂按照使用说明书进行喷雾消毒后备用。

1.2.2监测方法

1.2.2.1监测项目。孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌的数量。

1.2.2.2采样方法。采用平板暴露自然沉降法[3]采集样品。

1.2.2.3监测地点。种蛋贮藏室、孵化箱、孵化大厅、照蛋室、出雏厅。

1.2.2.4监测位置。每个监测地点每次监测的位置固定，包括培养皿的放置高度（离地面1 m）和水平面等。

1.2.2.5采样时长。通過预试验来确定采样时长。选用麦康凯培养基，采用自然沉降法采样，在连续3 d未消毒的出雏厅内收集样品，以5 min为起点和间隔时长单位，设置5、10、15、20、25和30 min 6个采样梯度时长，每个时长同时用3个培养皿进行采样。采样结束后将样品密封带回实验室，放置37 ℃恒温箱内培养24 h，观察并记录细菌的菌落数量，以3个培养皿上的同类菌落平均数为参照，选择在麦康凯培养皿上生长20个左右菌落的采样时长作为此次试验的采样时长。

1.2.2.6监测采样时间。选用一种消毒剂连续消毒7 d，对后5 d进行连续采样监测，每天在不同监测点使用消毒剂消毒后1和12 h，分别进行采样监测。

1.2.2.7细菌培养。将每次采样后的培养基妥善封存，及时送回化验室，置于37 ℃恒温箱内培养24 h，观察并记录细菌种类及菌落数。

1.2.2.8主要孵化参数记录。安排专人对不同条件下监测期间内的健雏率、弱雏率等孵化参数进行记录。

1.2.2.9消毒剂及其稀释浓度。选择过氧乙酸、安立消和聚维酮碘3种常用的消毒剂交替使用，稀释浓度分别为1∶200、1∶300、1∶500。

1.2.3大肠杆菌和沙门氏菌菌落判定方法。选用麦康凯培养基为选择性采样培养基，SS培养基为沙门氏菌的进一步鉴别培养基；根据大肠杆菌和沙门氏菌在以上鉴别培养基上生长的菌落形态、颜色等，结合细菌革兰氏染色镜检结果进行菌落判定。

1.2.3.1大肠杆菌与沙门氏菌在麦康凯培养基上生长的菌落特征[4]。大肠杆菌在麦康凯培养基上生长的菌落特征：菌落鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。

沙门氏菌在麦康凯培养基上生长的菌落特征：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色，圆形，稍微凸起，边缘整齐，湿润光滑。

1.2.3.2大肠杆菌和沙门氏菌在SS培养基上生长菌落的特征[5]。大肠杆菌在SS培养基上生长的菌落特征：菌落生长一般或较差，该菌发酵乳糖，菌落呈桃红色或者粉红色。沙门氏菌在SS培养基上生长的菌落特征：生长良好，该菌不发酵乳糖，有的能产生硫化氢，菌落呈无色半透明或黑色。

1.2.4孵化室空气中的细菌含量计算。按照奥氏公式[6]计算孵化室空气中的细菌含量，即空气中每立方米细菌数=50 000N/AT。式中，N为平板上生长的菌落数，A为所用的平板面积（cm2），T为平板检测时暴露在空气中的时间（min）。

2结果与分析

2.1监测采样预试验结果由表1可知，当采样时长为20 min 时，平均生长菌落数量为19个，最接近于20个。为便于后续试验结果的分析，故选择采样时长20 min作为此次试验的采样时长。

2.2未消毒状况下孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌的监测结果

在连续7 d对孵化室不消毒的情况下，对后5 d实施孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌的连续监测，结果见表2和表3。由表2和表3可知，各监测点均可检测到一定数量的沙门氏菌和大肠杆菌，以出雏厅数量最多，蛋库数量最少；随着未消毒时间的延长，细菌数量呈逐渐增多趋势。每个监测点和时间点的大肠杆菌污染量均较沙门氏菌污染量多。

2.3使用3种消毒剂消毒后的监测结果在连续7 d使用某种消毒剂任一种对孵化室消毒后，对后5 d孵化室内蛋库、孵化箱、孵化厅、照蛋室、出雏厅空气中沙门氏菌和大肠杆菌数量进行连续监测。监测结果表明，使用上述3种消毒剂按照孵化室现行消毒程序和消毒方法连续消毒3 d后，不同时间点各监测点的沙门氏菌和大肠杆菌数量均降至零。

2.43种消毒剂消毒后和未消毒状况下孵化出雏情况统计

由表4可知，使用以上3种消毒剂消毒后与未消毒状况下，监测期内不同品种鸡的种蛋孵化出雏平均健雏率表现为消毒后比未消毒状况下好，使用3种消毒剂消毒后的混合品种平均健雏率分别较未消毒状况下提高2.69、2.71和2.95百分点。

从图1可以看出，同一品种鸡在消毒和未消毒状态下，品种817平均健雏率的增幅最大，为2.89%～3.49%；土鸡次之，为2.29%～2.74%；新广麻平均健雏率的增幅最小，为2.11%～2.54%。不同消毒剂消毒后生成的平均健雏率差异较小，消毒效果相近。

3讨论

（1）孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌主要来自受污染的种蛋、蛋箱、出雏箱和运输车辆以及人员等的携带，孵化过程中腐败的破损蛋、亡蛋对环境的污染以及出雏时携带细菌的绒毛和灰尘等对空气环境的污染[7]。该试验结果表明，如果连续2 d以上不消毒，孵化室各个功能区的空气中大肠杆菌和沙门氏菌的含量就会呈现不断增加的趋势，导致孵化室严重污染，其中以出雏厅和照蛋室污染最为严重，这与出雏时细菌随着绒毛和灰尘在空中飞扬，以及后期照蛋时腐败的亡蛋和死胚破损对环境造成的污染有关，因此选用适合的消毒剂和消毒程序可在连续2 d的消毒后杀灭孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌。

（2）安立消、过氧乙酸、聚维酮碘分别为阳离子表面活性剂、强氧化剂、碘制剂类消毒药，是养殖生产中使用广泛、性价比较高的3种消毒剂。该试验结果表明，虽然3种消毒剂的杀菌原理不同，但都能较好地杀灭孵化室空气中的大肠杆菌和沙门氏菌，可以作为孵化室常规消毒的首选消毒剂。为了避免耐药性的产生，建议以上3种消毒剂交替使用，每14 d更换一种消毒剂。李宝栋等[8]所报道的安立消和过氧乙酸对蛋鸡舍空气中大肠杆菌的消毒杀灭效果与该试验结果相一致。

（3）选择合适的消毒剂和消毒程序对孵化室进行消毒，能明显提高孵化出雏时的健雏率。该试验结果表明，使用上述3種消毒剂中的任何一种按照正确的使用方法消毒后，均能明显提高不同品种鸡孵化出雏时的健雏率，其中以817平均健雏率的增幅最大，为2.89%～3.49%；土鸡次之，为2.29%～2.74%；新广麻平均健雏率的增幅最小，为2.11%～2.54%。这可能与品种不同或此次监测期间孵化批次及数量不等有关；对于同一品种鸡，不同消毒剂消毒后产生的平均健雏率也略有差异，但变化幅度很小，这种差异是否因不

同消毒剂对孵化和出雏中的种蛋与雏鸡产生一定的不良作用有关则有待进一步探讨。

4结论

沙门氏菌和大肠杆菌是对雏鸡危害重大的2种细菌性病原，孵化室一旦被其污染，不仅会造成雏鸡出雏率和健雏率下降，导致雏鸡早期死亡率升高，生长性能下降，而且会严重影响孵化场的声誉并导致经济效益下降。因此，做好孵化室的消毒工作是提高孵化出雏效率和经济效益的重要环节。选择适宜的消毒剂和执行严格的消毒程序可以有效杀灭孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌，可以显著提高出雏时的健雏率和早期成活率。安立消、过氧乙酸、聚维酮碘3种消毒剂均具有性价比高、易购买等特点，在采取正确的稀释浓度、消毒方法和消毒程序后，可以有效杀灭孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌，建议作为孵化室消毒的首选消毒剂交替选用。

参考文献

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[8] 李宝栋，赵瑞霞，邓宇，等.蛋鸡舍空气微生物检测及常用带鸡消毒剂筛选[J].黑龙江畜牧兽医，2016（10）：100-103.