双氢青蒿素对人胆管癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

相淑芳，邵志坚，朱建明，邹俊涛

（1.广东省广州市海珠区中医医院中药房，广东 广州 510220；2.广州市海珠区瑞宝街社区卫生服务中心检验科，广东 广州 510220；3.中山大学解剖教研室，广东 广州 510220）

论 著

双氢青蒿素对人胆管癌裸鼠移植瘤抑制作用研究

相淑芳1，邵志坚1，朱建明2，邹俊涛3

（1.广东省广州市海珠区中医医院中药房，广东 广州 510220；2.广州市海珠区瑞宝街社区卫生服务中心检验科，广东 广州 510220；3.中山大学解剖教研室，广东 广州 510220）

目的：观察双氢青蒿素（DHA）对裸鼠胆管癌细胞株（QBC939）皮下移植瘤生长的抑制作用。方法：14只裸鼠建立人胆管癌裸鼠皮下移植瘤模型，随机分成两组各7只。每周检测各组裸鼠皮下移植瘤体积及体质量的变化，21天后处死裸鼠检测各组转移瘤重量，两组裸鼠均作心、肝、肺、肾等主要脏器病理切片。结果：DHA组的移植瘤体积和重量小于对照组（P＜0．05），两组裸鼠体质量变化比较差异无统计学意义（P＞0．05），两组裸鼠心、肝、肺、肾组织病理切片未见结构异常。结论：双氢青蒿素对肿瘤生长有一定的抑制作用，未见明显毒副作用。

裸小鼠；胆管癌；双氢青蒿素；抑制作用

胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，由于其解剖位置特殊，起病隐匿，确诊时往往已到晚期，失去根治性切除机会，预后极差。大样本研究显示［1］，1377例未能行手术及放化疗的胆管癌总体平均生存期3.9～7.8个月。对大多数患者而言，更重要的是获得更好的姑息性疗效［2］。因此，开发有效而毒性低的药物对延长患者生存期和提高生活质量具有重要意义。青蒿素是从菊科植物黄花蒿中提取的一种含内过氧化基团的倍半萜内酯化合物，国内多个研究初步显示青蒿素及其衍生物尤其是双氢青蒿素（DHA）具有广泛的抗肿瘤活性，我们的前期研究［3］也发现青蒿素对胆管癌细胞增殖有抑制作用。本研究利用双氢青蒿素对胆管癌荷瘤裸鼠进行干预，报道如下。

1 材料与方法

主要材料：Balb/c裸小鼠18只，购于中山大学实验动物中心，4周龄、体质量14～16g、SPF级。10%小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），0.25%胰酶（美国Sigma公司），RPMI-1640（Gibco公司），双氢青蒿素（重庆华立武陵山制药厂）。

细胞培养：QBC939人胆管癌细胞培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养瓶，置于恒温37℃、饱和湿度、CO2浓度为5%的培养箱中作细胞增殖培养。当培养的细胞总数经细胞计数达5×107以上用胰酶消化、离心收集各瓶细胞制成1×107/mL细胞悬液实验备用。

荷瘤模型建立：每只裸鼠于背部皮下注射浓度为1×107/mL的细胞悬液0.15mL，约2～3周后取成瘤短径0.6cm以上肿瘤形态相近的裸鼠14只。

分组：成瘤裸鼠14只，随机分成两组各7只。A组为空白对照，不作任何干预。B组为DHA组，用食用植物油溶解药物制成DHA溶液，按每100mgDHA配以食用植物油13mL，采用灌胃给药方式，剂量为80mg/kg。每天1次。

移植瘤体积测定：游标卡尺分别测量种植瘤长径（a）和短径（b），根据公式肿瘤体积V＝1/2长径×短径2。每7天测量1次肿瘤长、短径并计算体积。

每隔7天测量裸鼠体质量，观察裸鼠的生长、活动情况及有无药物的毒性情况。

标本采集：用药3周，末次给药24h后颈椎脱臼法处死裸鼠，剥离出完整的移植瘤组织，测量移瘤裸瘤重量。

2 结 果

两组裸鼠移植瘤体积比较见表1。

表1 两组裸鼠移植瘤体积比较 （cm3，±s）

表1 两组裸鼠移植瘤体积比较 （cm3，±s）

注：与对照组比较，△P＜0.05。

组别 第1天 第7天 第14天 第21天A组 0.178±0.0370.393±0.0660.979±0.1251.742±0.226 B组 0.202±0.0490.449±0.0910.876±0.1951.440±0.271△

两组移植瘤质量比较见表2。

表2 两组移植瘤质量比较

两组裸鼠体质量比较见表3。

表3 两组裸鼠质重比较 （g，±s）

表3 两组裸鼠质重比较 （g，±s）

组别 第1天 第7天 第14天 第21天A组 20.277±0.79020.563±0.95721.076±0.93721.521±0.932 B组 20.643±0.67520.973±0.64521.401±0.64621.724±0.620

3 讨 论

目前体外实验证实青蒿素及其衍生物抗肿瘤的主要途径有：铁离子介导的活性氧杀灭肿瘤细胞，细胞周期阻滞，诱导凋亡，抑制肿瘤血管新生，抑制肿瘤细胞侵袭和转移等。双氢青蒿素是青蒿素类化合物体内主要活性代谢物之一，也是目前所知的该类化合物中疗效较好的抗肿瘤候选化合物［4］。陆金健等［5］报道DHA对体外培养的肝癌、胃癌、白血病、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、横纹肌肉瘤和神经母细胞瘤等肿瘤增殖均具有一定的抑制作用。青蒿素及其衍生物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞的毒性较小，刘奕明等［6］报道DHA静滴在中国健康受试者体内较安全。本实验在连续DHA用药3周后实验动物的健康状况基本无恶化，证实DHA较为安全。

［1］ JONGHA PARK，MYUNG-HW AN KIM，Kyu-pyo Kim ．Natural History and rognostic Factors of Advanced Cholangiocarcinoma without Surgery，Chemotherapy，or Radiotherapy：A Large-Scale Observational Study［J］．Gut Liver，2009，3（4）：298-305．

［2］ 黄志强．肝门部胆管癌外科治疗效果有待提高［J］．临床外科杂志，2006，14（2）：65-66．

［3］ 郑梦薇，邵志坚．青蒿素对人胆管癌细胞的体外抑制作用［J］．药物研究，2008，17（11）：15．

［4］ EFFERTH T． Willmar Schwabe Award 2006：antiplasmodial and antitumor activity of artemisininfrom bench to bedside［J］．Planta Med，2007，73（4）：299-309．

［5］ 陆金健，黄鸣清，陈修平，等．二氢青蒿素抗肿瘤作用及其机制研究进展［J］．中国药理学与毒理学杂志，2012，26（3）：397-401．

［6］ 刘亦明，曾星，邓远辉，等．单次静滴双氢青蒿素在健康人体的药代动力学和安全性［J］．中国临床药理学杂志，2009，25（3）：231-234．

Objective：To study the inhibition effect of dihydroartemisinin（DHA）on cholangiocarcinoma cell line QBC939 subcutaneous transplantation tumor. Method: 14 nude mice subcutaneous tumor models of human bile duct cancer were established，then were divided into 2 group evenly in random. The changes of volume and weight of both groups nude rice were detected every week. After 21 days，the nude mice were sacrificed to detect the weight of xenograft of each group. The main organs，such as the heart，the liver，the lung and the kidney of both groups nude mice were made into paraffin section. Result: The volume and weight of xenograft of DHA group was less than that of the control group（P＜0.05）. There was no statistical significance in weight changes between the two groups of nude mice（P＞0.05）. NO structural abnormalities were observed in pathological section of the heart, the liver，the lung and the kidney tissues of both groups nude mice. Conclusion：DHA has certain inhibition effect on tumor growth. No significant toxicity and side effect was observed.

Nude mouse；Cholangiocarcinoma；Dihydroartemisinin（DHA）；Inhibition effect

R273.58

B

1004-2814（2017）04-0345-02

2016-12-26

广州市海珠区科技计划项目：2014-yl-03