生殖支原体感染与女性黏液脓性宫颈炎相关性研究

李冰蕾，占 城

生殖支原体感染与女性黏液脓性宫颈炎相关性研究

李冰蕾，占 城

李冰蕾

目的建立生殖支原体Taqman MGB荧光聚合酶链反应(PCR)检测方法，检测宫颈炎患者生殖支原体感染情况，以期发现生殖支原体感染与女性黏液脓性宫颈炎之间的相关性。方法参照国内、外文献建立Taqman MGB荧光PCR检测技术；采集大连市皮肤病医院性病门诊有黏液脓性宫颈炎的女性患者生殖道分泌物标本74例、体检中心对照组标本63例，应用上述检测方法检测标本中的生殖支原体。结果Taqman探针荧光PCR法敏感性和特异性均较好。黏液脓性宫颈炎患者生殖支原体阳性率为24.3%，对照组未检测出生殖支原体；除不孕以外其他几项调查内容包括尿道炎症状、非婚性接触史、复发性宫颈炎以及治疗史均与生殖支原体感染有关联（P＜0.001），其阳性率分别为17.6%、52.9%、42.5%、100%。结论Taqman MGB 荧光PCR法是目前较为适用的生殖支原体检测方法。生殖支原体感染可能是黏液脓性宫颈炎的致病因素；生殖支原体的检测在指导复发性宫颈炎的治疗中有较为重要的意义。

宫颈炎, 黏液脓性；支原体，生殖；聚合酶链反应

[J Pract Dermatol, 2017, 10(2):83-84]

黏液脓性宫颈炎（mucopurulent cervicitis，MPC）是指临床表现为肉眼可见的宫颈管内黄色黏液性分泌物、或宫颈管内分泌物镜检多形核白细胞≥10个／1 000倍视野的宫颈炎。目前已知MPC的病原体主要为淋球菌和沙眼衣原体，除外这两种病原体仍有近50%的MPC病因不明[1]。2010年美国疾病控制中心（Centers for Disease Control，CDC）在宫颈炎的诊治指南中强调生殖支原体(Mycoplasma genitalium, Mg)的致病作用，而2015年新版指南中再次指出Mg感染可能会引起宫颈炎，尤其是在持续性或复发性宫颈炎中要被高度怀疑。且有研究[2]发现慢性Mg感染会促进促炎性因子白细胞介素（IL）-1, IL-6以及 IL-8的分泌，而治愈Mg感染的同时炎症也会随之消除。本研究探索了多种Mg检测方法，其中包括分离培养法、血清学方法以及核酸扩增技术（NAAT）等，其敏感性及特异性各异。分离培养法固然是确定Mg感染的金标准，然而实际操作中Mg培养时间长、生长条件苛刻，培养过程中极易出现菌株死亡或被污染的情况，目前全球仅少数实验室能够从临床标本中培养出Mg，因此该法不适合临床应用。血清学检测法包括酶联免疫吸附试验、间接免疫荧光法、共焦点免疫分析法等，但是由于Mg与肺炎支原体（Mycoplasma pneumonia，MP）有广泛的交叉反应易出现假阳性的结果，需要找到对Mg高度特异的抗原才可推广应用。现今实验研究中应用较多的传统聚合酶链反应（PCR）由于需要电泳等复杂步骤，而导致实验过程中极易被污染而出现假阳性的问题。本研究应用的Taqman探针荧光PCR法具有高度的特异性和可靠性，其实验结果稳定，是更适合推广应用的检测技术。本实验应用Taqman MGB荧光PCR检测法对性病门诊确诊的MPC患者和正常人对照组同时进行Mg的检测，分析Mg的感染率和在MPC致病中的作用，研究Mg感染与MPC的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

参照性传播疾病 (STD）宫颈炎诊断指南，从2014年12月—2015年12月在大连市皮肤病医院女性科门诊就诊的患者中筛选出符合条件的患者共74例，对照组为体检中心健康体检者共63例。入选标准：患者组：①年龄19～55岁；②临床有MPC症状，即宫颈口有黏液脓性分泌物或者宫颈脆性增加易出血等，或无明显症状但所取拭子涂片革兰染色多形核白细胞（PMNL）≥10个/1 000倍视野；③拭子淋球菌涂片镜检及培养均阴性，沙眼衣原体抗原检测阴性。对照组：①年龄19～55岁；②现在无黏液脓性宫颈炎临床症状；③拭子淋球菌涂片镜检及培养均阴性，沙眼衣原体抗原检测阴性。两组研究对象征得知情同意后均由研究员填写问卷调查表。

1.2 方法

1.2.1 取材 对于符合条件的入组人员由医生收集宫颈拭子，除需常规检查淋球菌及沙眼衣原体的拭子外，再取一支拭子深入宫颈口并旋转2圈，稍作停留后取出，置于装有1 ml 0.9% NaCl溶液的1.5 ml微量离心管中，-70℃冻存。

1.2.2 试验方法 冻存标本室温解冻，应用Taqman MGB荧光PCR检测法对收集标本进行检测。

1.3 统计学方法

实验结果由实验员整理，结合患者资料进行分析整合，采用SPSS16.0进行数据分析，计数资料用卡方检验。

2 结果

2.1 调查人群特征

患者组74例患者中既往有非婚性接触史者52例，对照组有2例；有尿急、尿痛等尿道炎症状25例，对照组为4例；74例患者中既往有异位妊娠史病者5例；有宫颈炎病史或宫颈炎症状持续超过2周者40例，对照组有12例曾经有过宫颈炎病史，但现在无临床症状；既往半年内应用抗生素治疗过生殖道感染性疾病的患者组和对照组各10例和2例。

2.2 Mg检测结果

患者组Mg阳性率为24.3%，对照组未检测出Mg。Mg阳性与Mg阴性的患者在异位妊娠方面差异无统计学意义（P＞0.05），分析可能是由于所取例数较少有关，其他几项调查因素中包括尿道炎症状、非婚性接触史、复发性持续性宫颈炎病史以及治疗史均有统计学意义（P＜0.01），其Mg阳性率分别为17.6%、52.9%、42.5%、100%。

3 讨论

M.genitalium是近年来性传播疾病中的新星，随着PCR技术的不断改进，其致病性在越来越多的疾病中被认识。2009年欧洲非淋菌性尿道炎（nongonococcal urethritis，NGU）治疗指南已明确认定Mg是NGU的病因之一。2010年美国疾病预防控制中心（CDC）在宫颈炎的诊治指南中也强调Mg的致病作用，此外与Mg相关的疾病还包括盆腔炎性疾病（pelvic inf ammatory disease，PID）、产科并发症、前列腺炎、附睾炎以及包皮龟头炎等。近年来还有研究发现Mg感染可能还与肿瘤及HIV的发生发展相关。

应用Taqman MGB荧光PCR检测法对性病门诊确诊的MPC患者和正常人对照组同时进行Mg的检测，结果显示MPC人群中Mg感染率为24.3%，而正常人群未检测出Mg，两组数据相比，差异有统计学意义（P＜0.01），表明Mg或许是MPC的致病病原体，提示在临床诊断中医生应该考虑到Mg的可能性，加强对其的检测。美国CDC公布的数据称宫颈炎患者Mg感染率在10%～30%，本研究的数据与之相符。其木格等[1]在其研究中发现，MPC人群中Mg的检出率为11.06%。马黎民[3]的研究显示，MPC人群的Mg感染率为14.06%。本文的数据略高于同类研究，分析可能是由于检测方法灵敏度更高或者样本量较小，也或许是研究人群所在地区不同造成的结果。

在复发性宫颈炎中Mg阳性率更高，这与Mg感染的NGU多与持续性或复发性NGU相类似。而在应用过抗生素治疗的10例患者中，全部出现了阳性结果。现在临床上对于MPC的治疗首选为阿奇霉素1 g顿服，但是对于治疗Mg阳性的患者其治愈率仅为85%，最近的数据则更低为40%[4]。有研究发现，在一些地区Mg感染者中约50%感染的为阿奇霉素耐药菌株[5]，且在应用阿奇霉素治疗后更易导致耐药菌株的出现[6]。有文献报道对于Mg感染患者阿奇霉素长疗程治疗要优于单剂量顿服[6]，而在治疗失败的情况下莫西沙星是较为有效的药物，其有效率达到100%[7]。这表明临床上急需一种快捷、有效的检测手段，对于复发性MPC患者尤其是治疗失败的患者及时进行Mg的检测，以便医生能够选择最佳治疗方案。Manhart等[8]在其研究中也指出，对于持续性复发性宫颈炎患者应该进行Mg的检测，并且检测尽量在用药之前，以防止耐药菌株的出现。笔者认为黏液脓性宫颈炎与Mg感染存在相关性；Mg的检测在指导复发性持续性宫颈炎的治疗中有更为重要的意义。

[1] 其木格, 蒋法兴, 王千秋, 等. 生殖支原体与黏液脓性宫颈炎相关性的研究 [J]. 中华皮肤科杂志, 2008, 41(5):292-295.

[2] Dehon PM, Hagensee ME, Sutton KJ, et al. Histological evidence of chronic Mycoplasma genitalium-induced cervicitis in HIV-infected women: a retrospective cohort study [J]. J Infect Dis, 2016, 213(11):1828-1835.

[3] 马黎民. 支原体感染与女性相关性疾病的临床分析 [J]. 中国医师进修杂志, 2012, 35(9):16-17.

[4] Manhart LE, Gillespie CW, Lowens MS, et al. Standard treatmentregimens for nongonococcal urethritis have similar but declining curerates: a randomized controlled trial [J]. Clin Infect Dis, 2013, 56(7):934-942.

[5] Totten PA, Jensen NL, Khosropour CM, et al. Azithromycin anddoxycycline resistance profiles of recent clinical isolates of Mycoplasma genitalium. STI & AIDS World Congress Joint Meeting of the 20th International Society of Sexually Transmitted Disease Research, July 14-17, 2013 [C]. Vienna, Austria, c2013.

[6] Björnelius E, Anagrius C, Bojs G, et al. Antibiotic treatment of symptomatic Mycoplasma genitalium infection in Scandinavia: a controlled clinical trial [J]. Sex Transm Infect, 2008, 84(1):72-76.

[7] Bradshaw CS, Chen MY, Fairley CK. Persistence of Mycoplasma genitalium following azithromycin therapy [J]. PLoS One, 2008, 3: e3618.

[8] Manhart LE, Broad JM, Golden MR. Mycoplasma genitalium: shouldwe treat and how? [J]. Clin Infect Dis, 2011, 53(Suppl 3): S129-142.

Study on the relationship between Mycoplasma genitalium infection and female mucopurulent cervicitis

LI Bing-lei，ZHAN Cheng
Department of Dermatology, Dalian Dermatology Hospital, Dalian 116021, China

ObjectiveTo establish Taqman MGB real time fluorescence-based PCR assay for the detection of Mycoplasma genitalium(M.genitalium), and apply the method to evaluate the infection rate of M.genitalium in STD clinic patients who were suffering from cervicitis in our hospital, so as to find the correlation between M.genitalium infection and mucopurulent cervicitis(MPC).MethodsOne kind of Taqman MGB real time PCR assay was established for the detection of M.genitalium referring to the studies. A total of 74 patients with non-gonococcal, non-chlamydial MPC and 63 healthy female volunteers were recruited in our study. Cervical samples were collected and M.genitalium was detected by Taqman MGB real time PCR assay.ResultsThe results indicated that the Taqman MGB real time PCR had good linear range, great repeatability and High sensitivity, the lowest detectable limit was 5 copies. The positive rates of M.genitalium in the MPC patients was 24.3% while none M.genitalium was found in the control group. Signif cant difference was found in the both two groups(P＜0.001). In addition to infertility, several other factors including urethritis symptoms, sexual contact history, recurrent cervicitis and treatment history were associated with mycoplasma infection(P＜0.001), and the positive rate of M.genitalium was 17.6%, 52.9%, 42.5% and 100% respectively.ConculsionThe Taqman MGB real time f uorescence based PCR is a rapid and sensitive method for the quantitative and qualitative detection of M.genitalium. The prevalence of M.genitalium infection is higher in patients with non-gonococcal, non-chlamydial mucopurulent cervicitis attending STD clinic than that in normal population. Detection of M.genitalium has a great signif cance in guiding the treatment of recurrent cervicitis.

Cervicitis，mucuspurulent；M.genitalium；PCR

R711.74

A

1674-1293(2017)02-0083-02

2016-10-27

2016-12-10）

（本文编辑 耿建丽）

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20170206

116021大连，大连市皮肤病医院（李冰蕾，占城）

李冰蕾，硕士，主要从事皮肤病的临床诊疗工作，E-mail: 18741120331@163.com

占城，E-mail: dlpfzhanch@126.com