土家药白头婆成分及含量研究△

龚星军 温 晓 魏媛媛 田 兰 张元忠* 谷利民 胡 杰

(1.湖南张家界市人民医院，湖南 张家界 427000；2．吉首大学林产化工工程湖南省重点实验室，湖南 张家界 427000；3.湖南湘西州民族医药研究所，湖南 吉首 426000)

方药纵横

土家药白头婆成分及含量研究△

龚星军1温 晓2魏媛媛2田 兰3张元忠1*谷利民1胡 杰1

(1.湖南张家界市人民医院，湖南 张家界 427000；2．吉首大学林产化工工程湖南省重点实验室，湖南 张家界 427000；3.湖南湘西州民族医药研究所，湖南 吉首 426000)

本文对湖南产的土家药白头婆进行初步研究，结果显示，白头婆含有丰富的黄酮类、蛋白质与Ca类化合物，Pb、Cd、Hg等元素未检出。

土家族药；白头婆；成分分析；检测

白头婆Eupatorium japonicum Thunb.被子植物门 Magnoliophyta双子叶植物纲 Magnoliopsida 菊目 Asterales 菊科 Asteraceae 泽兰属Eupatorium，为多年生草本植物，卵圆形或披针形叶子对生，边缘有粗齿，下面有柔毛和腺点；秋季开白色管状花，头状花序多数，在枝端排列成伞房状；瘦果有柔毛和腺点。主要分布于我省及武陵山脉周边等高山盆地，尤常见于密疏林下、灌丛中、山坡草地、水湿地和河岸水旁，目前尚未由人工引种栽培。白头婆原载昆明植物研究所中国高等植物数据库全库、中国科学院微生物研究所。全国第四次中药资源普查武陵山区均有分布，民间药用常呼别名为山兰、孩儿菊、神仙草、不老草等。

本品全草入药，味苦、辛，性平，祛暑发表、化湿和中、理气活血、化瘀、行水消肿，主治夏伤暑湿、发热头痛、胸闷腹胀、消化不良、月经不调、跌打损伤、痈肿、虫蛇咬伤。土家民间用于伤科，是著名的强盗药；其花泡制的药酒还有抗衰老、延年益寿等功能。目前对白头婆的研究从药物成分和临床资料均缺乏，有较大研究价值。本文对其基本成分、营养物质、矿物质元素等进行了检测，以期为其开发打下良好基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料：白头婆采自湖南省龙山县，经鉴定为菊科泽兰属植物白头婆(Eupatorium japonicum Thunb.)带花的全草，干燥后粉碎，过100目筛，装瓶备用。

1.2 化学试剂：芦丁对照品购于中国生物制品检定所，甲醇美国Tedia公司，牛血清蛋白国药集团化学试剂有限公司，葡萄糖陇西化工股份有限公司，L-谷氨酸购自中国生物制品检定所，水合茚三酮天津市光复精细化工研究所，没食子酸国药集团化学试剂有限公司，考马斯亮蓝G-250上海沃凯公司，蒽酮国药集团化学试剂有限公司，硫酸、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、福林酚、三氯化铝、氯化钾、氯化钠、碳酸钙、纯镁、铁粉、铅粉、镉粉、金属铜均为光谱纯；铅标准储备液购自国家标准物质研究中心，盐酸、氢氧化钠为优级纯，维生素C、硅藻土、甲醇、无水乙醇、重铬酸钾、2-(N-吗啉代)乙烷磺酸(MES)、三羟基甲基氨基甲烷(TRIS)、石油醚(沸程30℃～60℃)、丙酮、盐酸、硼酸、草酸、硝酸、柠檬酸、硫脲、氧化镧、硫酸铜、硫酸钾、氢氧化钠、活性炭、2，4-二硝基苯肼、酚酞、甲基红、溴甲酚绿、亚甲基蓝均为分析纯。

1.3 仪器设备：FA224B万分之一天平(上海佑科仪器公司)，HH型数显电热恒温水浴锅(江苏金坛金城国胜实验仪器厂)，SB-25-12DT超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，LD5-2A离心机(北京医用离心机厂)，U-3900H型紫外可见分光光度计(日本Hitachi公司)，Agilent1260 高效液相色谱仪(美国Agilent 公司)，AA-680火焰原子吸收(日本SHIMADZU公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 水分：参考GB 5009.3—2010采用直接干燥法。

1.4.2 灰分：参考GB 5009.4—2010。

1.4.3 总黄酮的测定[1]：称取0.010g芦丁，用30%乙醇溶解并定容至100mL的容量瓶中，制成0.1mg/mL的芦丁标准溶液。分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL置于6个50mL的容量瓶中，依次编号0～5，用65%乙醇补至10mL后，加入5%的NaNO21mL摇匀，静置6min，再加入10%的硝酸铝1mL摇匀，静置6min，加入10mL的4%的氢氧化钠，并用65%乙醇定容至50mL，摇匀15min后显色置于510nm处分光光度计测吸光度。 [标准曲线测得：A=0.0217C 0.0053 r=0.9996]。

样品测定：准确称取白头婆样品1.0000g粉末1.0g，置于索氏提取器中，用65%的乙醇提取3次，每次提取2h, 每次加入60mL，后经蒸馏回收乙醇，浓缩后，用65%的乙醇定容至 50mL容量瓶中，取1mL置于50mL的容量瓶中用65%乙醇补至10mL后，加入5%的NaNO21mL摇匀，静置6min，再加入10%的硝酸铝1mL，摇匀，静置6min，加入4%的氢氧化钠10mL，并用65%乙醇定容至50mL，摇匀15min后显色置于510nm处分光光度计测吸光度。测黄酮的吸光度，标准曲线上，读出黄酮含量。

1.4.4 总生物碱的测定[2]：称取 5.0 mg干燥的盐酸小檗碱标准品，用蒸馏水溶解置 50 mL容量瓶中，稀释至容量瓶的刻度线，摇匀备用。用移液管从中精密吸取5.0 mL该溶液于 25 mL的容量瓶中，加入 0.1 mol/L的盐酸溶液并稀释至容量瓶的刻度线，制备0.02 mg/m l的液体作为盐酸小檗碱对照品母液。分别吸取 0.02 mg/mL 的盐酸小檗碱对照母液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于 10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L 的盐酸溶液定容，摇匀备用，作为实验组，在波长为 345 nm下测定其吸光值A)。选择等体积的 0.1 mol/L 的盐酸溶液，作为空白对照组，在相同的条件下测定其吸光值(A)，以横坐标为浓度 C，纵坐标为吸光值(A)，得出标准曲线：A=0.35+1.1832C(r=0.9995)。

样品测定：称取白头婆样品粉末 200 g，采用超声辅助法提取，功率 60 W，提取时间 30 min/次，提取 2 次，料液比(g∶mL)1∶9，提取温度 70℃，提取剂 70%乙醇 ，合并滤液，经石油醚去除色素，用氯仿萃取 2 次，取下层液体水浴蒸发浓缩至褐色浸膏。称取浸膏 5.0 g 置于烧杯中，用蒸馏水溶解，置于250 mL的容量瓶中，加蒸馏水定容，制成 0.02 g/mL的液体混合均匀备用；精密吸取5.0 mL提取物溶液至 10 mL容量瓶中，加入 0.1 mol/L盐酸溶液定容，混合均匀备用；采用二倍稀释法得到5 mg/mL溶液，再次用紫外 - 可见分光光度法于345 nm 波长下测定其吸光值(A)，通过标准曲线方程计算总生物碱含量。

1.4.5 蛋白质：参考GB/T 5009.5-2008采用凯氏定氮法进行测定。

1.4.6 脂肪：参考GB 5413.3-2010 与GB/T 5009.6-2003采用石油醚索式提取法进行测定。

1.4.7 矿质元素含量的测定[3-4]：火焰原子吸收法(GB5413.21-2010)与(GB 5413.22-2010、GB/T5009.12-2003、GB/T5009.15-2003。)

1.4.8 可溶性总糖：葡萄糖标准曲线的制作：称取105℃真空干燥至恒重的葡萄糖100mg，配成0.5mg/mL葡萄糖溶液。分别取该溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于5个50 mL容量瓶中,用蒸馏水定容。各取以上5组溶液2mL于锥形瓶，在每支试管中立即加入蒽酮试剂8.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以多糖浓度为横坐标X(mg / mL)，以吸光度为纵坐标Y。[标准曲线测得：Y =0.1012X + 0.0083，r= 0.9991]

白头婆中总糖的提取与测定：精确称取0.500 g，置于50 mL三角瓶中，加水15 m1，盐酸10 mL，沸水浴20 min，定容至100mL，得提取液。取5 mL滤液定容至50 mL。吸取2 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量(μg)。

1.4.9 总氨基酸： 总氨基酸标准曲线绘制：取7个25mL容量瓶，吸取标液0、0.5、1.0 、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于7个25 mL容量瓶，加水补充至容积为4 mL，然后加茚三酮和缓冲液各1 mL，于水浴加热15 min，冷却后定容25 mL，静置15 min，在570 nm下测消光值，绘制标准曲线。[标准曲线测得：Y =33.21X + 0.045，r= 0.9995]

样品测定：准确称取白头婆样品1.0000g，置于50mL锥形瓶中，加沸蒸馏水30mL，立即置于沸水浴中，浸提45 min，期间每隔10 min摇动一次，45 min以后趁热真空过滤，残渣用少量沸水洗涤2～3次，滤液转入50 mL容量瓶中，待冷却后加水至刻度备用。吸取滤液1 mL，置于25 mL容量瓶中，再加0.5mL缓冲液(pH=8)，加茚三酮显色剂0.5 mL，在沸水浴中加热15 min，待冷却后加水定容至25 mL，放置10 min后，用波长570 nm测定吸光度。

2 结果

白头婆分析结果见表1。

表1 白头婆分析结果

3 讨论

3.1 从结果可以看出，白头婆中含有较为丰富的总黄酮和生物碱等具较强生物活性的有效成分，其中总生物碱为1.20%，总黄酮达到了3.85%，为白头婆临床疗效提供了理论基础，其具体成分和作用有待进一步研究。

3.2 白头婆的其他成分中蛋白质的含量达到了11.31%，脂肪含量不高仅为2.6%，蛋白质含量是脂肪的4.35倍。碳水化合物含量高达53.12%。矿物质元素中Ca的含量达27.5%，分别是Cu的2291倍、Fe的85.9倍、Na的21倍；K、Mg含量也超过5%。提示白头婆除了药理作用外，还有综合利用的前景。

3.3 白头婆中Pb、Cd、Hg等重金属元素未检出。提示本品应用安全。

[1]李桂兰，刘计权,等.山西产金莲花总黄酮及3种黄酮苷含量的测定[J].中华中医药杂志，2016.31(1): 275-278.

[2] 刘燕,刘艳,马宇颖,等.鸡骨草叶总生物碱的含量测定及其体外抗氧化活性研究[J].中国医药导报，2016.13(28):25-27、55.

[3]刘岭,贺浪冲,梁晓聪,等.5种药食同源中药中重金属元素铅与镉的测定[J].陕西中药，2010.31(7):897-899.

[4]GB 5009.3-2010、GB 5009.4-2010、GB 5009.4-2010、GB 5413.3-2010、GB/T 5009.6-2003、GB5413.21-2010、GB 5413.22-2010、GB/T5009.12-2003、GB/T5009.15-2003。

2017年1月6日收稿

湖南张家界市科技项目2015YB007

龚星军，男，副主任药师。联系方式：13974450858

R297.3

A

1006-6810(2017)03-0031-03

*通讯作者