并联检测抗-HCV和HCV-RNA可提高HCV感染检出率

李乃哲 尹文娇 周文亭 黄昌红 王锋 贾志远 张勇 毕胜利

102206 北京，中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 卫生部医学病毒和病毒病重点实验室(李乃哲、 尹文娇、周文亭、黄昌红、王锋、贾志远、张勇、毕胜利)；475000 开封市疾病预防控制中心(黄昌红)

·短篇论著·

并联检测抗-HCV和HCV-RNA可提高HCV感染检出率

李乃哲 尹文娇 周文亭 黄昌红 王锋 贾志远 张勇 毕胜利

102206 北京，中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 卫生部医学病毒和病毒病重点实验室(李乃哲、 尹文娇、周文亭、黄昌红、王锋、贾志远、张勇、毕胜利)；475000 开封市疾病预防控制中心(黄昌红)

目的 探讨提高HCV感染检出率的方法。方法 利用整群抽样的方法收集河北省某村487份血清样品，使用抗-HCV(ELISA法)及HCV-RNA(荧光定量PCR法)两种检测方法平行检测血清样品，比较两种试验单独使用、并联使用所得结果差异；分析样品HCV-RNA载量与其抗-HCV测量值s/n值相关性。结果 单独使用抗-HCV、HCV-RNA检测法，其检出率分别为22.1%、14.2%，均低于并联使用两种方法的检出率22.8%(χ2=4.0000，P=0.0455；χ2=42.0000，P<0.0001)；样品HCV-RNA载量与抗-HCV测量值s/n值呈正相关，随样品中RNA载量升高，抗-HCV测量值s/n值升高(P<0.0001)。 结论 并联使用抗-HCV与HCV-RNA试验可提高HCV检出率。

在某些工作中，例如献血员的筛检或手术前检查，检测者通常希望获得更高的丙型肝炎病毒(HCV)感染检出率以减少该疾病的传播[1]。并联试验可以提高灵敏度是经典的流行病学理论[2]，而抗-HCV检测和HCV-RNA检测是常见的HCV检测方法，本研究试图通过并联使用上述两种检测方法，达到提高HCV感染检出率的目的，进而提高预防HCV传播的效率。

1 材料与方法

1.1 血标本来源 2014年，我们应用整群抽样的方法，对河北省某村有户籍记录的村民进行基本信息调查和血样采集，所得样本共487份。对每名调查对象采血5 ml，无菌分离血清，-20℃冻存。样品送至本实验室同时检测。

1.2 试剂 抗-HCV检测使用万泰公司丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(ELISA法)，生产批号：国药准字S20010014；提取RNA使用德国Qiagen公司的QIAamp Viral RNA Mini Kit试剂盒；RT-PCR使用日本TakaRa公司的PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2(Dye Plus)试剂盒和Premix Taq (Ex Taq Version 2.0 plus dye)试剂；荧光定量PCR使用德国Qiagen公司careHCV RT-PCR Assay试剂盒。

1.3 仪器 全自动酶标仪为美国Thermo公司 Multiskan Go酶标仪； RT-PCR利用博日科技有限公司LifeTouch Thermal Cycler PCR仪，型号为TC-96/G/H(b)B；实时荧光定量PCR仪为美国ABI公司7500 Real Time PCR仪。

1.4 方法 采用间接法酶联免疫吸附试验原理对所有样本进行抗-HCV检测，将S/N≥1确定为阳性。对抗-HCV阳性样本进行HCV-RNA荧光定量检测；对抗-HCV阴性样本采用巢式PCR方法，对HCV-RNA保守区序列进行扩增，对阳性样本再进行HCV-RNA荧光定量检测。实验操作均严格按照试剂说明书进行。

1.5 统计学方法 采用SAS 9.3统计软件对资料进行统计分析。用配对χ2检验比较不同检测方法差别，认为P<0.05差别具有统计学意义；用Pearson相关分析s/n值与HCV-RNA载量相关性。

2 结果

2.1 抗-HCV和HCV-RNA单独检测结果 共有487份进行了抗-HCV检测，其中阳性108份、阴性379例，阳性率为22.0%。1份样品在检测抗-HCV后没有剩余血清，故对其余486份样品进行HCV-RNA检测，其中阳性69份、阴性417份，阳性率14.2%。抗-HCV的检出率高于HCV-RNA(χ2=31.3913，P<0.0001)。486份同时进行了两项指标检测的结果列于表1。

2.2 抗HCV和HCV-RNA并联检测结果 并联试验检测了486份样本，其中阳性111份，阴性375份，阳性率22.8%，分别在抗-HCV阴性、HCV-RNA阴性样本中检测出4份、42份HCV阳性样本。并联试验与单独检测结果比较分别见表2与表3。统计学分析表明，并联试验的检出率高于任意一种单独检测试验。

表1 HCV-RNA与抗-HCV检测结果比较

Note:χ2Parallel test=31.3913，P<0.0001

表2 单独检测HCV-RNA与并联检测检出率比较

Note:χ2Parallel test=42.0000，P<0.0001

表3 单独检测抗-HCV与并联检测检出率比较

Note:χ2parallel test=4.0000，P=0.0455

2.3 样品抗-HCV测量值s/n与其HCV-RNA载量的相关性分析 使用SAS 9.3对样本s/n值与RNA载量进行Pearson相关分析，统计学分析结果显示，两者的Pearson相关系数为0.4431，P<0.0001，有极显著意义，表明抗-HCV的s/n测量值呈现随HCV RNA载量升高而升高的趋势。

3 讨论

在某些场合如筛选献血员时或手术前，设法提高HCV感染的检出率是必要的。从献血员采集来的血液是要输给医院里需要输血的患者，或是制成血液制品给更多患者使用，保证献血员不携带HCV十分重要[3]；而医院手术前对患者的筛选则是保护医生不发生医源性感染的重要前提[4]。然而，由于国际通用的“金标准”RIBA及NAT试验存在着对仪器和技术要求较高、普适性不好的缺点，为节省时间或经费，许多医疗机构采用抗-HCV检测阳性后再对样本进行HCV-RNA检测的方法。在此前提下，本研究探讨了并联检测抗-HCV和HCV-RNA与单独试验结果差别。

所谓并联试验又称平行试验，即全部筛检试验中，任何一项筛检试验结果阳性就可定为阳性，通过并联使用诊断试验提高危险因子的检出率是经典的流行病学理论[2]。研究中采用的两种检测方法是常见的HCV检测方法[5]，由于二者的检测对象分别是蛋白质和核酸两种物质，又由于任何一个诊断实验都有一定的漏诊率和误诊率[6]，并联使用两种诊断实验存在提高疑似阳性检出率的可能。本研究结果表明，并联检测抗-HCV和HCV-RNA较单独检测某一指标可提高HCV的检出率，避免HCV阳性的漏检。

本研究中测定了样品HCV RNA载量，并探讨其与抗-HCV测量值s/n的关系，意在说明具有何种特征的样品特别需要并联检测。结果表明，HCV-RNA载量与抗-HCV s/n值呈正相关，这也提示着我们抗-HCV的s/n测量值很高或很低的时候，其阳性或阴性检测结果的可信度是高的，而那些测量值处于从阳转阴的“灰区”范围的样品，尤其需要并联检测。

本研究结果表明，并联使用抗-HCV和HCV-RNA两种检测方法，有利于提高疑似HCV感染的检出率，可以提高诸如对献血员的筛选、手术前HCV感染的筛查等环节预防HCV传播的效果。根据HCV-RNA载量与抗-HCV抗体s/n测量值呈正相关关系的事实，在实际工作中尤其要重视对s/n测量值处于“灰区”范围的样品施行多种检测方法的检测。

[1] World Health Organization. Guidelines for the screening care and treatment of persons with chronic hepatitis C infection (Updated Version)[M]. Geneva: WHO Document Production Services, 2016:43-47.

[2] 詹思延.流行病学[M].北京：人民卫生出版社, 2012:139.

[3] Prince AM, Scheffel JW, Moore B. A search for hepatitis C virus polymerase chain reaction-positive but seronegative subjects among blood donors with elevated alanine aminotransferase[J]. Transfusion, 1997, 37(1):211-214. doi: 10. 1046/j. 1537- 2995. 1997. 37297203526. x.

[4] Henderson DK. Managing occupational risks for hepatitis C transmission in the health care setting[J]. Clin Microbiol Rev, 2003, 16(3):546-568. doi: 10. 1128/cmr. 16. 3. 546- 568. 2003.

[5] Gretch DR. Diagnostic tests for hepatitis C[J]. Hepatology, 1997, 26(3 Suppl 1):43S-47S. doi: 10. 1002/hep. 510260708.

[6] 赵亚双，王滨有. 诊断试验的评价[J].哈尔滨医科大学学报, 2003, 37(2):182-184.

(本文编辑：陈培莉)

Parallel test of anti-HCV and HCV-RNA can enhance the ability to detect HCV infection

LiNaizhe,YinYenjiao,ZhouWenting,HuangChanghong,WangFeng,JiaZhiyuan,ZhangYong,BiShengli

KeyLaboratoryforMedicalVirology,MinstryofHealth,NationalInstituteforViralDiseaseControlandPrevention,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China(LiNZ,YinWJ,ZhouWT,WangF,JiaZY,ZhangY,BiSL);KaifengCenterforDiseaseControlandPrevention,Kaifeng475000,China(HuangCH)

ZhangYong,Email:zycdchp@sina.com

Objective To explore the method of enhancing the ability to detect HCV infection and to provide the advice for practical work. Methods A total of 487 samples from a village in Hebei Province were selected by cluster sampling. Serum samples were detected by anti-HCV and HCV-RNA assays. The results were compared between the two tests. The correlation of HCV-RNA quantification and its anti-HCV s/n value was analyzed. Results The positive values of anti-HCV and HCV-RNA were 22.1% and 14.2%, respectively, which were lower than that of the parallel test (χ2=4.0000,P=0.0455,χ2=42.0000,P<0.0001). The HCV-RNA quantification of the samples was positively correlated with the anti-HCV s/n value, which means anti-HCV s/n value increased with HCV-RNA quantification. Conclusion The parallel test of anti-HCV and HCV-RNA can enhance the ability to detect HCV infection.

Hepatitis C; Polymerase chain reaction; Screening

张勇，Email:zycdchp@sina.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.02.010

肝炎，丙型；聚合酶链反应；筛查

2016-11-17)