瓶栽北虫草的复壮技术

张 萌 王丽萍 马 力 荣世敏 李海波

（长春市农业科学院 130111）

瓶栽北虫草的复壮技术

张 萌 王丽萍 马 力 荣世敏 李海波

（长春市农业科学院 130111）

北虫草是富含生物活性物质的食药用真菌，菌种老化衰退是北虫草人工栽培的关键问题，极易造成产量下降和品质不合格，为了避免菌种退化，在生产过程中就要经常对菌种进行提纯复壮，使菌种保持原有的种性和活力。

北虫草 菌种 复壮

天然北虫草是真菌侵染昆虫虫体或蛹形成的子实体，其食药用价值可与冬虫夏草媲美，其含有的虫草素、多糖、氨基酸、超氧化物歧化酶、微量元素硒等成分具有抗菌、抗病毒，降压、降糖，增强免疫力，抗衰老，抗肿瘤等功效[1]。又由于其与冬虫夏草相比具有生长较快，容易人工培育出子实体的优点，被广泛用于人工栽培[2]。目前，北虫草已实现大规模工厂化的生产[3]。但不论生产规模如何，在培育过程中都会频繁出现菌种退化的问题，导致畸形草、不长草或长草少，严重影响北虫草的品质和产量。因此，根据自身栽培条件采用合理方法复壮退化菌种就尤为重要了。

1 固体培养基的制备

取200g马铃薯，洗净后去皮，切成段状，加水1L煮20min左右，用4层纱布将煮液过滤装入烧杯，加20g葡萄糖，5g蛋白胨，2g磷酸二氢钾，1g硫酸镁，1g柠檬酸铵，12g琼脂粉，50mg维生素B1搅拌均匀，定容到1L后分装到3个500ml三角瓶中，用胶塞封口置于121℃高压灭菌锅灭菌30min。待培养液稍微冷却后，在超净工作台中将其分装到灭好菌的直径9cm的培养皿中。静置30min后，培养液凝固即可备用。

2 液体菌种的制备

培养液配制方法同上，不加琼脂粉。灭菌后待温度低于25℃后，在点燃酒精灯的超净工作台中，每瓶培养液接入30块面积约为0.5mm×0.5mm的菌饼，包好封口膜，在黑暗、25℃条件下静置培养一天后130r/min震荡培养，待菌液中形成大小均一、形状一致的菌粒，且菌液澄清后方可使用。

3 复壮方法

3.1 组织分离法

在无菌环境下，选取长势健壮，形态良好的子实体长约2~ 4cm的北虫草菌株，用75%酒精或0.1%升汞溶液进行表面消毒约15秒并用蒸馏水冲洗后，用尖头镊子将子实体顶部1cm处的外皮去除，轻轻夹取一小块里面的淡黄色组织置于固体平板培养基表面，用封口膜将培养皿封好，置于恒温22℃黑暗条件下倒置培养7~15天左右。此方法成活率高、污染率低且操作简便。

3.2 孢子分离法

选取子实体颜色深且表面有小突起的成熟菌株，在无菌条件下将菌株悬挂于装有固体培养基的培养瓶中，在20℃自然光照条件下培养，弹落在培养基上的子囊孢子经一周左右的时间会形成菌落，分别将不同菌落的菌丝接于固体培养基上单独培养。

3.3 蚕蛹回接法

选取个体较大且健康的活体柞蚕蛹，先用酒精棉消毒蚕蛹表面，再用消过毒的一次性注射器抽取液体菌悬液，针头倾斜刺入蛹壁，将菌悬液摄入至有液体流出为宜。接种后将蚕蛹单独放入灭菌的三角瓶中，于15~18℃无光照条件下培养。待蛹体僵硬并在气门长出菌丝后对蚕蛹体内菌丝分离培养。

3.4 活体蚕蛹法

在无菌条件下将液体菌悬液接入蚕蛹体内，置于22℃的培养箱中避光培养，虫体僵硬后进行出草管理，待子实体长到2～3cm时做组织分离。

[1]胡学生,张美双,田淋淋,等.北虫草的化学成分及药理作用[J].吉林中医药,2016,(03)：281-283.

[2]董彩虹，李文佳，李增智，等.我国虫草产业发展现状、问题及展望[J].菌物学报,2016,35(1)：1-15 .

[3]高凌飞,王义祥,翁伯琦.蛹虫草工厂化栽培与系列加工技术研究进展[J].中国农学通报,2014,(13)：93-101.

10.16627 /j.cnki.cn22-1215/s.2017.05.024