小鹅瘟病毒卵黄抗体田间试验

2017-05-15藏玉婷王彬宋扬丁国杰

中国动物保健 2017年2期

关键词：小鹅雏鹅日龄

藏玉婷，王彬，宋扬，丁国杰

（哈药集团生物疫苗有限公司研发中心哈尔滨 150069）

小鹅瘟病毒卵黄抗体田间试验

藏玉婷，王彬，宋扬，丁国杰

（哈药集团生物疫苗有限公司研发中心哈尔滨 150069）

在完成小鹅瘟病毒卵黄抗体实验室研究的基础上，于 2015 年中间试制 5 批卵黄抗体，经检验合格后，分别在 3 个鹅场，总计 21 600 只雏鹅进行了田间试验。结果表明，在实验观察期内，未发生小鹅瘟病毒感染，且无任何不良方应，3 个鹅场的免疫组在生产性能方面与非免疫雏鹅均无显著差异；免疫攻毒组雏鹅攻毒保护率为 98%。证明研制的小鹅瘟病毒卵黄抗体安全、有效。

小鹅瘟病毒；卵黄抗体；田间试验

小鹅瘟是由鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）引起的雏鹅急性或亚急性败血性传染病[1]。该病主要侵害出壳后 4～20 日龄的雏鹅，也感染雏鸭，传播速度快，发病率和死亡率高达 90%～100%[2]。早期预防对控制该病十分重要，卵黄抗体用于预防和治疗疫病已取得了很好的效果，同时由于卵黄抗体具有不激活补体、不结合类风湿因子等优点，可避免补体系统的干扰及检测过程中出现假阳性，因此使用卵黄抗体做紧急预防接种有较大的实践意义[3，4]。本产品前期实验室研究结果显示小鹅瘟病毒卵黄抗体具有良好的安全性及效力，为了进一步明确该卵黄抗体在田间应用的安全性和效力，课题组开展了本项研究，旨在为小鹅瘟病毒卵黄抗体的实际应用提供一定的理论依据[5，6]。

1 材料与方法

1.1 材料

1．1．1 小鹅瘟病毒卵黄抗体批号：201501、201502、201503，共计 3 批，瓶装量 100mL，2～8 ℃保存，有效期为 18 个月，琼扩效价均不低于 1∶16。由哈药集团生物疫苗有限公司 GMP卵黄抗体生产线制备、提供。

1．1．2 检验用强毒小鹅瘟病毒（H 株），批号为201501E4，病毒含量 105.38ELD50/0.2mL，由哈药集团生物疫苗有限公司制备、鉴定、保存。

1．1．3 试验动物 1～3 日龄健康易感雏鹅 20 600 只，分别由鹅场 1、鹅场 2、鹅场 3 提供，常规饲养管理。

1.2 方法

1．2．1 安全性试验设计及方法用 3 批小鹅瘟病毒卵黄抗体，批号为 201501、201502 和 201503 进行田间安全性试验，分别在 3 个规模化鹅场进行，采取平行分组设计和随机化分组原则，对 1～3日龄健康易感雏鹅进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。①单剂量接种：1 000 只健康易感雏鹅，0.5 mL/只颈部皮下注射（使用剂量）；②单剂量重复接种：500 只健康易感雏鹅，0.5mL/只颈部皮下注射（使用剂量），24 h 后用相同剂量重复免疫 1 次；③超剂量接种：500 只健康易感雏鹅，1.0 mL/只颈部皮下注射（2 倍使用剂量）。接种后观察14 d，记录临床症状、生长情况，观察注射部位有无红肿、是否出现硬结，结合生命特征检测和健康雏鹅标准，观察注射抗体后的试验鹅是否有全身不良反应。安全性试验设计（见表1）。

表1 田间安全性试验设计

1．2．2 效力试验设计及方法用 3 批小鹅瘟病毒卵黄抗体，批号为 201501、201502 和 201503 进行田间效力试验，分别在 3 个规模化鹅场进行，采取平行分组设计和随机化分组原则，对 1～3日龄健康易感雏鹅进行使用剂量免疫试验、低于使用剂量免疫试验、使用剂量免疫攻毒试验及低于使用剂量免疫攻毒试验。①使用剂量免疫试验：4 000 只健康易感雏鹅，0.5mL/只颈部皮下注射（使用剂量）；②低于使用剂量免疫攻毒试验：1 000 只健康易感雏鹅，0.3 mL/只颈部皮下注射（1/2 使用剂量）；③使用剂量免疫攻毒试验：每个鹅场在使用剂量免疫组中随机选择 50 只使用剂量免疫鹅和 50 只空白对照健康易感雏鹅，在鹅场所在地就近联系具有负压动物房的单位进行攻毒试验，抗体注射后 24 h，各颈部皮下注射小鹅瘟病毒（H 株），每只 0.2m L（含 100LD50）；④低于使用剂量免疫攻毒试验：每个鹅场在低于使用剂量免疫组中随机选择 50只低于使用剂量免疫鹅和 50只空白对照健康易感雏鹅，在鹅场所在地就近联系具有负压动物房的单位进行攻毒试验，抗体注射后 24 h，低于使用剂量免疫组和对照组各颈部皮下注射小鹅瘟病毒（H 株），每只 0.2mL（含100LD50）。接种后观察 10 d。效力试验设计（见表2）。

表2 田间效力试验免疫设计

2 结果

2.1 安全性试验结果

从表3可以看出，小鹅瘟病毒卵黄抗体注射雏鹅后，14 d 观察期内雏鹅精神状态良好，行为、采食及饮水均未见异常，并无临床及全身不良反应，注射部位吸收良好，3个鹅场的试验组在生产性方面与非试验鹅群均无显著差异。

表3 田间安全性试验观察结果

2.2 效力试验结果

从表4可以看出，小鹅瘟病毒卵黄抗体注射雏鹅后，10 d 观察期内使用剂量免疫试验、低于使用剂量免疫试验的雏鹅均为发病。从表5可以看出，使用剂量免疫攻毒试验及低于使用剂量免疫攻毒试验的攻毒保护率均在 90%以上。

3 讨论

1）该研究应用 GMP 生产线生产的 3 批小鹅瘟病毒卵黄抗体，进行田间安全性试验。通过在 3 个鹅场对 1～3 日龄健康易感雏鹅进行单剂量接种、单剂量重复接种和超剂量接种安全试验。观察期内雏鹅精神状态良好，行为、采食及饮水均未见异常，并无临床及全身不良反应，注射部位吸收良好，生产性方面与非试验鹅群均无显著差异，试验表明本产品的安全性良好。

2）为了进一步检验小鹅瘟病毒卵黄抗体的免疫效果，在 3 个鹅场对 1～3 日龄健康易感雏鹅进行使用剂量免疫试验、低于使用剂量免疫试验、使用剂量免疫攻毒试验及低于使用剂量免疫攻毒试验。观察期内各组免疫雏鹅无发病。其中，使用剂量免疫攻毒试验及低于使用剂量免疫攻毒试验的攻毒保护率均在 90%以上，试验证明本产品能够有效地预防小鹅瘟。

3）试验统计显示使用剂量免疫攻毒试验中雏鹅的保护率为 100%，而低于使用剂量免疫攻毒试验中雏鹅的保护率为 93.3%，虽然两组试验的保护率均在 90%以上，达到质量标准的要求，但为了现地更好预防小鹅瘟，建议 1～3 日龄雏鹅预防剂量为0.5m L/ 只[7]。

[1]殷震,刘景华主编.动物病毒学二版[M].北京:科学出版社,1997: 294,328,335.

[2]费恩阁,李德昌,丁壮,等.动物疫病学[M].北京:中国农业出版社, 2004,586.

[3]王永坤.如何预防小鹅瘟[J].中国禽业导刊,2004,21(5):31-32.

[4]中国标准出版社第一编辑室编.动物防疫标准汇编[M].北京:中国标准出版社,2004,473-478.

[5] Larsson A,Carlander D．0ral immunotherapy with yolk antibodies to prevent infections in humans and animals[J].Ups JMed Sci, 2003.108(2):129-140.

[6]杜凤林,钟鸿鹏,等.牛病毒性腹泻活疫苗田间试验[J].特产研究. 2012.04:20-25.

[7]王红琳,杨俊,等.禽霍乱一新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究（Ⅳ报）- 疫苗的田间试验[J].安徽农业科学.2009.37(10):4513-4516.

TheClinicalExperimentofGoose ParvovirusYolk Antibodies

Zang Yu ting，Wang Bin，Song Yang，Ding Guo jie
（Harbin PharmaceuticalGroup Co.Ltd.Biological Vaccine,Harbin,150069）

Under the laboratory research of the goose parvovirusyolk antibodies,five groupsof yolk antibodieswere produced in 2015．The yolk antibodieswasexam ined．After the assay wasapproved,the yolk antibodieswasused in three Goose fields(about 20 600 young gooses)．The resultsshowed that the young goosesdid not infect the Goose Parvovirusand no side effectswere observed．Therewasno significant difference in the reproductive function between the treatmentgroup and the controlgroup．The protective rate was98%for vaccinated-challenged young gooses．Thus,the goose parvovirusyolk antibodies could be used safely and effectively．

Goose parvovirus;Yo lk antibodies;C linicalexperiment