地奈德水性凝胶的制备及透皮研究▲

陆富永 吴三强 熊爱民 李赞东 明海霞 尹 仲 邱岗峰

(1 广西壮族自治区南溪山医院，桂林市 541002；2 深圳大学生化中心，广东省深圳市 518057)

地奈德水性凝胶的制备及透皮研究▲

陆富永1吴三强2*熊爱民1李赞东1明海霞1尹 仲1邱岗峰2

(1 广西壮族自治区南溪山医院，桂林市 541002；2 深圳大学生化中心，广东省深圳市 518057)

目的 研制地奈德水性凝胶，建立其质量控制方法并对其体外透皮吸收性能进行观察。方法 以地奈德为主药制备凝胶，考察其稳定性并用高效液相色谱法(HPLC)法测定地奈德的含量。采用改进的Franz扩散池，以家兔离体皮肤为透皮模型，使用HPLC法测定药物在透皮接收液中的浓度及皮肤中药物滞留量。结果 该制剂具有较好的稳定性，凝胶剂中地奈德的平均回收率为98.5%～101.3%。离体条件下，药物皮肤滞留量可达对照乳膏的1.87倍。结论 所制备的地奈德凝胶能显著增加药物在皮肤中的滞留量，有望成为地奈德局部给药的新制剂。

地奈德；凝胶；质量控制；透皮

地奈德(Desonide)是一种合成的非卤化中效糖皮质激素，具有抗感染、抗过敏、止痒及减少渗出的作用,能消除局部非感染性炎症引起的发热、发红及肿胀，从而减轻炎症的表现,并具有抑制细胞免疫反应的作用。目前国内外市售的是乳膏剂、乳液洗剂，在治疗湿疹、神经性皮炎及特应性皮炎中有较好疗效,可用于治疗面部皮炎、婴幼儿面部湿疹[1-2]。糖皮质激素难溶于水，通过胶束增溶技术，把难溶于水的糖皮质激素在水性基质中稳定分散成纳米级别的胶束/微粒的研究目前尚未见文献报道。另外，凝胶剂具有良好的生物相容性,对药物释放具有缓释、控释作用,制备工艺简单,易于涂布使用,局部给药后易吸收、不污染衣物、稳定性较好等特点, 更适合皮肤局部外用。因此我们研制了地奈德水性凝胶(0.05%)，以期提高药物的局部治疗效果。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 高效液相色谱仪(日本岛津公司，LC-10ATVP泵，SPD-10A VP 型紫外检测器)；PHS-3C型pH计(上海雷磁)；BS110S分析天平(Sartorius)； NDJ-1型旋转黏度计(上海上天精密仪器有限公司) ；RYJ-6B药物透皮扩散试验仪 (上海黄海药检仪器销售有限公司)。地奈德对照品(重庆华邦制药有限公司提供，含量99.6%)；地奈德乳膏(重庆华邦制药有限公司，批号2015015 )；卡波姆980NF(诺誉化工，批号 EC863CC625)；其余试剂均为分析纯或药用规格，HPLC试剂为色谱纯。新西兰大白兔，体重1.5～2.0 kg，雌雄不限(广东省实验动物中心提供)

1.2 处方设计及制备

1.2.1 处方 地奈德0.5 g，卡波姆940 6 g ，甘油 80 g，增溶剂X 20 g，稳定剂Y 8 g，三乙醇胺适量，超纯水加至1 000 g。

1.2.2 制备方法 取处方量的地奈德加入增溶剂X，用超声使其溶解，得A液备用；稳定剂Y用适量超纯水溶解，得B液备用，卡波姆940用适量水溶胀，加入甘油，搅拌下 慢慢加入三乙醇胺，调pH至6.5左右，搅拌下慢慢滴加 A液、B液，加超纯水至全量搅匀，即得。灭菌，铝塑管分装，每支10 g，共制备3批。

1.3 质量评价

1.3.2 pH值检查 按照中国药典2010年版二部附录ⅥH的测定方法，取1 g样品用10 mL新沸放冷的超纯水溶解，测得pH值为6.0～7.0,符合《中国药典》凝胶剂项下要求。

1.3.3 黏度 按照黏度测定法《中国药典》附录ⅥG第二法，采用 NDJ-1型旋转式黏度计，4号转子，转速6 r/min，测定样品在25℃的动力黏度。

1.3.4 恒温加速试验 将凝胶灌装于已灭菌的铝塑管中，装量10 g/支，置于恒温箱(40±1)℃、室温(25±1)℃ 及冰箱(4±2)℃中贮存3个月后观察变化。

1.3.5 含量测定 色谱条件[3-4]：色谱柱：Dikma Diamonsil C18(5 μm，200 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-水(75 ∶25)；检测波长：244 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；进样量：20 μL。上述色谱条件下，空白凝胶基质、对照品、地奈德凝胶样品的色谱图见图1。

A 空白凝胶样品 B 地奈德对照品 C 地奈德凝胶样品

1.4 体外经皮渗透实验

1.4.1 离体皮肤制备 新西兰大白兔注射麻醉，电剃刀除去腹部毛发，颈椎脱臼处死动物。立即剥离腹部皮肤，小心地用蘸有生理盐水的脱脂棉除去皮下脂肪 ，浸于生理盐水溶液，冷藏备用。

1.4.2 渗透实验 采用改良Franz扩散池进行实验, 将皮肤置于接收池和供给池之间，角质层面向上。地奈德凝胶和市售地奈德乳膏各1.0 g分别均匀地涂布于皮肤角质层上。接受池容积7.0 mL，透皮扩散面积2.8 cm2，接受液为含20%乙醇的生理盐水，水浴温度37℃。分别于0 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、6.0 h、8.0 h从接受室中取样500 μL，并立刻补充同体积的新鲜接受液。样品适当处理后进行HPLC分析。药物的累积透过量(Q)计算公式如下所示：

《冶金分析》为月刊，大16开，单期页码为80页，定价30.00元，全年12期，360.00元。全国各地邮局发行，如有漏订的单位和读者，请直接与编辑部联系。

式中，Q：第n次取样时单位面积药物累积透过量(μg/cm2) ；V：接收池体积；Cn：第n次取样点浓度；Vi：第i次取样的体积；Ci：第i次取样药物浓度；A：扩散面积。

1.4.3 地奈德在皮肤各层的分布量 取上述体外经皮渗透实验8 h后的皮肤刮去剩余凝胶，用生理盐水冲洗干净，拭干，剪取有效扩散面积以内的皮肤立即称重后，用胶布剥离角质层(20次)。①将胶布用甲醇分2次超声萃取，每次10 min，合并提取液，蒸发溶剂，剩下的残渣溶于甲醇，再蒸干溶剂，残渣精密加入500 μL甲醇溶解，离心，取上清液HPLC测定含量。②将剥离角质层的皮肤剪碎，加5 mL生理盐水研成匀浆，用甲醇分2次超声萃取，合并提取液，蒸发溶剂，剩下的残渣溶于甲醇，再蒸干溶剂，残渣精密加入500 μL甲醇溶解，离心，取上清液行HPLC测定含量。

2 结 果

2.1 基本状态 凝胶的pH值为6.0～7.0，三批凝胶的平均黏度为41.6 Pa.S，符合《中国药典2010》凝胶剂项下要求。恒温加速试验结果，本品性状、pH值、均匀性、黏度、涂展性无异常。

2.2 含量测定结果

2.2.1 标准曲线 精确称取干燥至恒重的地奈德对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解后稀释至刻度，摇匀作为贮备液；再将上述溶液稀释成1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL。精密吸取上述溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，以样品浓度(C)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线,得回归方程为：y=311.934 2x-64.476 8，r=0.994 722。结果表明，含量测定条件下，在1～100 μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.2.2 专属性试验 空白辅料干扰试验：按处方配比，配制不含地奈德的空白对照制剂，用甲醇 ∶水(75 ∶25) 稀释成相近浓度的不含地奈德的空白溶液，在上述色谱条件下分离测定，结果地奈德峰位置处没有辅料峰或溶剂峰及其他杂质峰干扰(图1) 。

2.2.3 回收率试验 精密称取1.0 g空白凝胶基质三份于三角瓶中，分别精密加入地奈德储备液2 mL、3 mL、4 mL，用甲醇稀释、定容于50 mL容量瓶中，摇匀，离心，各取20 μL三份进样，记录峰面积，测定含量，计算回收率，结果低、中、高浓度地奈德回收率为98.5%～101.3%。

2.2.4 样品含量 精密称取三批地奈德凝胶样品各3份(0.5 g/份)，用甲醇稀释、定容于50 mL容量瓶中，摇匀，离心，每批样品离心液20 μL连续进样3次,记录峰面积，计算样品含量，3批样品标示量分别为98.4%、101.2%、99.7%。

2.3 体外经皮渗透实验 测定每一取样点样品的浓度，计算单位面积累计渗透量(Q)，结果见图2。以稳态时Q对时间t进行回归，计算得渗透系数J，结果见表1。地奈德凝胶的渗透系数为 0.110 799 μg·cm-2·h-1；市售乳膏力言卓的渗透系数为0.104 451 μg·cm-2·h-1。自制品和市售品的累积渗透量无统计学差异(P>0.05)。

2.4 皮肤中的药物滞留量 透皮吸收8 h后地奈德在角质层、其余表皮各层及真皮的分布情况见表2。结果显示角质层中药物含量基本相同，而在除角质层外的表皮各层及真皮中药物滞留量是市售乳膏的1.87倍，明显大于市售乳膏。

A 地奈德凝胶 B 市售地奈德乳膏

时段地奈德凝胶地奈德乳膏1h0．165±0．0210．161±0．0282h0．296±0．0170．278±0．0184h0．502±0．0720．467±0．1136h0．775±0．1400．734±0．1768h0．926±0．1360．875±0．121Q⁃t方程y=0．110799x+0．067445y=0．104451x+0．064305r0．9964160．996138J0．1107990．104451

表2 透皮渗透实验8 h后地奈德在皮肤各层的含量 (μg/g，n=6)

注：与乳膏比较，*P>0.05 ；#P<0.01。

3 讨 论

局部给药制剂要求药物能分布到或透过皮肤的角质层到达病灶部位, 而全身吸收及积累很少。在制剂设计时，要求活性成分尽量少地透过皮肤进入大循环[5]。因此，本实验处方设计时避免使用氮酮、二甲基亚砜、高浓度乙醇之类的透皮吸收剂。

地奈德凝胶处方中的增溶剂X是复配的乳化剂，该增溶剂可形成高分子胶束，完成对难溶药物的增溶和包裹，加入稳定剂Y后，在水性介质中比较稳定。使用该技术将地奈德在水性基质中的溶解度增溶至治疗有效治疗浓度的5～10倍，避免使用了二甲基亚砜、高浓度乙醇、丙二醇等有机溶剂，降低这类溶剂导致的不良反应；而且，稳定剂Y也是一种较好的保湿剂，与人体皮肤相容性极好，对干燥性皮损和瘙痒具有较好的辅助作用。经稳定性研究，该凝胶稳定性良好。

本实验制备的地奈德凝胶，制备工艺简单，质量控制方法步骤简单、准确、可靠，制剂质量符合2010年版《中国药典》(二部)的要求。

体外经皮渗透试验结果表明，该凝胶经皮渗透系数与市售地奈德乳膏基本一致，经皮吸收后在角质层中的药物含量基本相同，说明角质层对药物的储留有饱和现象；而在皮肤角质层以外的皮肤各层中的药物浓度高于市售乳膏，说明增溶剂X与稳定剂Y的复配使用，可作为糖皮质激素的渗透促进剂，在皮肤局部形成药物蓄积效应，增加药物在皮肤中的滞留，有助于使活性物质在病灶部位保持较高浓度，利于发挥药效，降低不良反应，有望开发成为地奈德新型局部给药制剂。

[1] 孙建方,郑志忠,顾 军,等.0.05%地奈德乳膏治疗湿疹的多中心随机双盲、对照研究[J].中华皮肤科杂志,2006,39(1):26-28.

[2] 程 颖.0.05%地奈德乳膏治疗婴幼儿湿疹的疗效观察[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2012,11(6):370-371.

[3] Sandra B.Lopes，J.M. Sarraguca, J.A.V.Prior,et al. Development of an HPLC Assay Methodology for a Desonide Cream with Chemometrics Assisted Optimization[J]. Analytical Letters,2012,45(7):1390-1400.

[4] 高效液相色谱法.中国药典二部[S].2010:附录VD.

[5] 张星一. 透皮吸收促进剂在经皮给药系统中的质控和评价方法[J].中国新药杂志,2010,19(4):273-276.

Study on preparation and percutaneous penetration of Desonide aqueous gel

LUFuyong1，WUSanqing2，XIONGAimin1，LIZandong1，MINGHaixia1,YINZhong1，QIUGangfeng2

(1NanxishanHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Guilin,Guangxi541002,China; 2BiochemicalCenterofShenzhenUniversity,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Objective To develop the Desonide aqueous gel, and establish its quality control method, then observe the in vitro percutaneous absorption properties. Methods The gel was prepared, using Desonide as the main drug. The gel's stability was observed, and the content of Desonide was detected by High performance liquid chromatography (HPLC). Using improved Franz diffusion cell, and isolated rabbit skin as transdermal model, HPLC was chose to detect the concentration of Desonide in percutaneous absorption liquid and Desonide retained in the skin. Results The preparation has good stability, the average recovery rate of Desonide in the gel is 98.5%-101.3%. Under the condition of in vitro, the amount of drug retention were 1.87 times that of the control emulsifiable paste. Conclusion The preparation of Desonide gel can significantly increase the retention of the drug in the skin, is expected to become the Desonide local to the new preparation.

Desonide；Gel；Quality control；Transdermal

广西壮族自治区卫生厅科研课题(编号：Z2014186)

R 914.2

A

1673-6575(2017)02-0183-04

10.11864/j.issn.1673.2017.02.07

2016-12-29

2017-02-26)

*通信作者