宫颈癌患者治疗前检测外周血细胞角蛋白19 mRNA和鳞状细胞癌抗原的临床意义

杨琳琳 王 薇 张红平 杨宏英

(昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)妇瘤科，云南 昆明 650118)

宫颈癌患者治疗前检测外周血细胞角蛋白19 mRNA和鳞状细胞癌抗原的临床意义

杨琳琳 王 薇 张红平 杨宏英

(昆明医科大学第三附属医院(云南省肿瘤医院)妇瘤科，云南 昆明 650118)

目的 通过检测宫颈癌患者治疗前外周血中细胞角蛋白(CK)19 mRNA和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)的表达，探讨其对宫颈癌的诊断意义及与临床病理的相关性。方法 对100例宫颈癌患者行治疗前外周血CK19 mRNA及SCC-Ag检测，以40例健康妇女为对照，分析其作为诊断参考的特异性和敏感性，并对两者与宫颈癌临床病理特征的相关性进行分析。结果 CK19 mRNA、SCC-Ag检测诊断宫颈癌的特异性均为97.5%。CK19 mRNA、SCC-Ag水平升高用于治疗前诊断的敏感性分别为39%和57%，两者差异显著(P<0.05)。CK19 mRNA表达升高与深肌层浸润(P=0.031)、盆腔淋巴结转移(P=0.027)相关。SCC-Ag水平升高与病理类型(P=0.005)、肿瘤大小(P=0.002)、深肌层浸润(P=0.001)、盆腔淋巴结转移(P=0.012)显著相关。结论 外周血CK19 mRNA和SCC-Ag均是宫颈癌微转移有价值的肿瘤标志物；就宫颈鳞癌患者而言，SCC-Ag仍然是目前首选的肿瘤标志物。

宫颈肿瘤；细胞角蛋白(CK)19 mRNA；鳞状细胞癌抗原；外周血

宫颈癌是仅次于乳腺癌的第二种常见的妇科恶性肿瘤，其预后与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等病理因素及治疗方法密切相关。要提高宫颈癌患者疗效、改善预后，判断治疗前有无肿瘤转移及转移的范围显得尤为重要。本研究探讨治疗前检测血清细胞角蛋白(CK)19 mRNA和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)作为宫颈癌组织标志物的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 入组条件：①均在云南省肿瘤医院初次诊治，有完整的随访资料；②经临床诊断和病理确诊为宫颈癌患者；③一般情况良好，无合并其他部位肿瘤；④术前均未经过放化疗，无其他内外科并发症。2013年10月至2015年4月云南省肿瘤医院初次诊治的宫颈癌患者100例(病例组)，年龄31～72岁，中位年龄53岁。按国际妇产科联盟(FIGO)2009年的诊断标准，ⅠA 期10例，ⅠB1期28例，ⅠB2期22例，ⅡA期18例，ⅡB 期12例，ⅢA 期5例，ⅢB期3例，Ⅳ期2例。按照组织学类型分为子宫鳞癌83例，腺癌及鳞腺癌17例。 78例行广泛性子宫切除+双侧盆腔淋巴结清扫术；其余22例行根治性放射治疗。在妇科门诊行妇科肿瘤筛查的健康女性40例作为对照组。术前或治疗前抽血行SCC-Ag水平检测和CK19 mRNA表达检测(后文中深肌层浸润与盆腔淋巴结转移这两项病例数不足100例，阳性例数也不足57例和39例)。

1.2 外周血CK19 mRNA与SCC-Ag检测 病例组和对照组清晨抽取静脉血各两个3 ml，第一管用作SCC-Ag检测，第二管加入含0.8 ml柠檬酸葡萄糖(ACD)的抗凝管〔经0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)处理〕，充分混匀，放入冰盒送至实验室处理。CK19 mRNA检测：用定量即时聚合酶链反应(Q-PCR)检测外周血中CK19 mRNA的表达水平。根据全血样本提取RNA试剂盒操作说明书抽提RNA。按逆转录试剂盒操作说明书合成cDNA，用ABI公司引物设计软件设计CK19引物，在7500实时荧光定量PCR仪(ABI公司)上进行实时荧光定量PCR扩增。用2-△CT 计算mRNA表达水平，计算值大于健康对照组相对表达量95% 的可信区间视为CK19 mRNA阳性。SCC-Ag检测：以微粒子酶免疫分析法检测宫颈癌患者血清SCC-Ag滴度(以≤1.5 μg/L为正常参考值，视为阴性；>1.5 μg/L为升高，视为阳性)。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行χ2检验。

2 结 果

2.1 病例组与对照组CK19 mRNA、SCC-Ag阳性表达的比较 病例组与对照组血CK19 mRNA表达水平分别为1.57±0.38和0.34±0.16。病例组CK19 mRNA阳性表达、SCC-Ag水平升高与对照组差异显著(均P=0.00)。见表1。病例组SCC-Ag水平、CK19 mRNA检测敏感性差异显著(P=0.000)。

表1 病例组与对照组SCC-Ag水平、 CK19 mRNA阳性表达的比较〔n(%)〕

2.2 治疗前CK19 mRNA和SCC-Ag表达水平与宫颈癌临床病理因素的关系 治疗前CK19 mRNA阳性表达与深肌层浸润、盆腔淋巴结转移差异显著(P<0.05)，而与年龄、病理类型、肿瘤大小、临床分期无显著差异(P>0.05)。SCC-Ag水平升高与病理类型、肿瘤大小、深肌层浸润、盆腔淋巴结转移显著相关(P<0.05)，而与年龄、临床分期差异无显著性(P>0.05)。见表2。

表2 治疗前SCC-Ag和CK19 mRNA表达水平与 宫颈癌临床病理因素的关系(n=100)

3 讨 论

宫颈癌浸润和转移是其治疗不彻底的重要原因，其中淋巴结转移被公认为是影响预后的重要因素之一，但即使是术后病理检查无淋巴结转移的宫颈癌患者，仍有10%～15%出现复发和转移。 而血循环中微转移的存在,提示肿瘤已不再局限于原发灶,有发展为远处转移的可能。早期诊断外周血中的微转移，理论上有助于更有针对性地制定个体化的术后辅助治疗，减少复发和转移，提高患者的生存率和生活质量。CK是一类单纤丝蛋白，是表皮和某些上皮组织细胞支架复合物的组成部分。CK19存在于单层上皮及其起源的肿瘤细胞中，几乎可在所有上皮类肿瘤及部分非上皮类肿瘤中检出，而正常间叶组织(如外周血、淋巴结)中无CK19的表达。如果在正常外周血、淋巴结中检出CK19 mRNA的表达可认为有微转移的存在，这是其成为肿瘤标志物的机制。CK19 mRNA检测具有高敏感性和特异性，被广泛应用于乳腺癌、肝癌、食管癌、口腔癌、甲状腺癌等与微转移、预后有关的研究中〔1～5〕。

有文献报道，血清CK19 mRNA升高见于14.89%～36%的早期宫颈癌患者(Ⅰ～ⅡA)〔6～8〕；这与各报道中病例数、年龄、期别、病理类型构成、检测方法等的差异有关。本研究结果显示，外周血中CK19 mRNA诊断敏感性为39%，高于相关文献报道，可能与本研究有较多ⅡB期及以后病例入组和检测技术有关。本文结果提示SCC-Ag在作为宫颈癌指标时，临床诊断价值优于CK19 mRNA。

与血CK19 mRNA升高相关的临床病理因素比较肯定的有淋巴结转移，而与期别、年龄、病理类型等因素不相关〔6～8〕。由于各研究对样本选择、实验方法的差异，血CK19 mRNA与肿瘤大小、肌层浸润等影响因素的报道并不一致。本研究显示，血CK19 mRNA升高可作为宫颈癌有复发高危因素的一个指标。李群等〔9〕研究认为，SCC-Ag检测值在以>1.95 μg/L为标准时，其阳性表达率与宫颈癌临床分期、肿瘤大小密切相关，与病理分级和淋巴结转移无关。但在晚期宫颈癌患者，马瑞兰等〔10〕经单因素与多因素分析认为，在治疗1个月后，SCC-Ag检测值在以>1.5 μg/L为阳性标准时，SCC-Ag水平与盆腔淋巴结转移和远处转移显著相关。由于研究对象的异质性和血SCC-Ag检测参考值的差异，各研究对宫颈癌SCC-Ag升高与临床病理因素的关系也不尽相同。但总体来看，宫颈癌SCC-Ag升高与病理类型、肿瘤大小显著相关，提示该指标可反映患者肿瘤负荷。因SCC-Ag升高更特异性地见于宫颈鳞癌，而CK19 mRNA升高在宫颈鳞癌与非鳞癌间无显著差别，提示对于SCC-Ag检测正常的临床晚期的宫颈非鳞癌患者，CK19 mRNA检测能更好地为宫颈癌患者的疗效、预后提供参考信息。

综上，外周血CK19 mRNA和SCC-Ag是宫颈癌微转移有价值的标志物。肿瘤的转移和复发是宫颈癌患者致死的一个重要原因，对于检测出有微转移的患者，一些研究给予后继化疗进行干预，理论基础是化疗可以消灭微转移灶，减少复发或转移的可能性，提高生存率，改善生活质量。

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9 李 群，刘淑玉，刘红丽，等.血清鳞状细胞癌抗原水平变化在诊断子宫颈鳞癌复发中的临床意义〔J〕.中华妇产科杂志，2015；50(2)：131-6.

10 马瑞兰，张海琛，邹丽娟，等.中晚期子宫颈鳞癌患者同步放化疗的疗效及远处转移的影响因素分析〔J〕.中华妇产科杂志，2015；50(2)：125-30.

〔2016-06-29修回〕

(编辑 王一涵/张 慧)

云南省应用基础研究项目(2013FB168)

杨宏英(1966-)，女，硕士，主任医师，硕士生导师，主要从事妇科肿瘤研究。

杨琳琳(1975-)，女，硕士，副教授，硕士生导师，主要从事妇科肿瘤研究。

R737.33

A

1005-9202(2017)08-1940-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.08.051