Th1/Th2型细胞因子与原因不明复发性流产的相关性研究

王红宇，李明珠

Th1/Th2型细胞因子与原因不明复发性流产的相关性研究

王红宇，李明珠

目的探讨Th1/Th2型细胞因子与原因不明复发性流产（URSA）发病及发病时间、次数的相关性。方法治疗组为150例URSA患者，给予主动免疫疗法治疗。对照组为100例正常早期妊娠要求人工流产妇女。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测治疗组治疗前后及对照组外周血清中IFN-γ、IL-4水平及IFN-γ/IL-4比值。结果治疗组治疗前IFN-γ、IL-4水平与对照组比较，有显著性差异（P＜0.05）。治疗组治疗后IL-4、IFN-γ水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗组治疗后较治疗前IL-4水平升高，IFN-γ水平下降显著，差异有统计学意义（P＜0.05）。URSA妇女反复流产次数与IFN-γ/IL-4水平无关（P＞0.05），流产时间与IFN-γ/IL-4水平有关（P＜0.05）。结论正常妊娠表现为一种特殊的Th2现象，当Th1型细胞因子过度表达，Th2型细胞因子处于抑制状态时，将导致流产的发生。

原因不明复发性流产；Th1/Th2型细胞因子；主动免疫治疗

复发性流产是指连续发生2次或2次以上的自然流产，其发生涵盖遗传、解剖、内分泌、感染、不良生活习惯等因素，但仍有40%～60%患者找不到原因称为原因不明复发性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）［1］。现代免疫学认为正常妊娠中母体对携有1/2父方遗传基因的半同种异体胎儿之所以不发生排异反应，是因为母体免疫系统特殊的免疫容忍机制产生保护性免疫应答。任何因素干扰了母胎免疫耐受平衡则均导致流产的发生。近年来T辅助细胞1、2（Th1、Th2）型细胞因子为免疫学领域研究的热点，其与URSA发生的关联也受到越来越多学者的关注。本研究通过检测外周血IFN-γ及IL-4的水平探讨Th1/Th2型细胞因子与URSA的发生及发生时间、次数的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料治疗组：2012年8月—2015年8月就诊于中国人民解放军第371中心医院门诊的URSA患者150例。纳入标准：连续两次或两次以上自然流产。排除标准：（1）双方染色体核型分析异常；（2）夫妻双方ABO和（或）Rh血型不合；（3）女方内分泌检测异常；（4）女方存在生殖道器质性病变；（5）抗子宫内膜抗体、抗精子抗体、抗心磷脂抗体等自身抗体阳性；（6）经TORCH、衣原体、支原体等检查证实生殖道感染；（7）封闭抗体检测阴性；（8）男方精液常规分析异常；（9）有自身免疫疾病和（或）有神经、精神疾患无法配合者或不愿配合者。

对照组：选择同期正常早期妊娠妇女100例为来笔者所在科要求人工流产者。符合下列要求：（1）以前均有过正常妊娠和分娩史而无死胎、死产、自然流产史；（2）此次妊娠期间无先兆流产的症状和体征，B超检查提示胚胎发育正常；（3）治疗组的全部排除标准。

1.2 治疗组治疗方法治疗组给予外周淋巴细胞主动免疫治疗。方法如下：检查排除供血者传染性疾病病原体（肝炎病毒，梅毒螺旋体，艾滋病病毒）后抽取其肘静脉血30 ml肝素抗凝，在无菌条件下分离提取淋巴细胞，调整淋巴细胞浓度为（3～4）×107个/ml，制备悬液约2 ml，治疗组患者前臂尺侧位点做6～8点皮下注射，每次每点0.2～0.3 ml，1次/周。若已妊娠持续免疫治疗至妊娠12周。

治疗组于停经30 d查血β-HCG提示怀孕则开始治疗，治疗期间发现宫外孕者予以剔除并按异位妊娠治疗，其余病例继续治疗至孕12周，期间胚胎停止发育者则终止治疗，选妊娠成功者结果纳入统计。

1.3 标本采集抽取受试者空腹无菌外周静脉血2 ml，分离血清，置-20℃冰箱冻存待测。其中对照组就诊次日抽血，治疗组于就诊次日及妊娠成功时抽血。

1.4 细胞因子的检测采用酶联免疫吸附双抗体夹心（ELISA）法，测定血清中的IFN-γ及IL-4的水平，检测过程严格按试剂盒说明书进行。

1.5 妊娠成功标准临床妊娠至12周，超声提示胎儿发育正常为妊娠成功。

1.6 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料以（x±s）表示，治疗前后比较用配对样本t检验，运用Spearman秩次相关分析分析其相关性，检验水准α=0.05。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

治疗组150例经主动免疫治疗后妊娠成功132例，宫外孕1例，胚胎停止发育17例。

2.1 各组IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4水平变化治疗组治疗前血清IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组治疗后血清IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4水平与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组治疗后较治疗前血清IFN-γ水平显著下降、IL-4水平明显升高（P<0.05）。见表1。

表1 各组IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4水平（pg/ml）

2.2 治疗组反复流产次数与IFN-γ/IL-4水平的关系治疗组既往流产2次者82例IFN-γ/IL-4水平比流产大于2次者68例略低（2.19±0.37 vs 2.24±0.40），差异无显著性（P>0.05）。

2.3 治疗组流产发生时间与IFN-γ/IL-4水平的关系治疗组发生流产的孕周越早（<9 W的91例，与≥9 W的59例相比），其IFN-γ/IL-4水平越高（2.44±0.37 vs 2.27±0.30），差异有显著性（P<0.05）。

3 讨论

不明原因是发病机制尚未明了而不是没有原因。近年来，许多学者对URSA的体液免疫、细胞免疫、子宫免疫防护等各种免疫学因素进行了探讨。有研究发现在细胞免疫中，Th1细胞主要分泌干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）和肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-ɑ）等，与炎症和组织损伤有关。Th2细胞主要分泌白细胞介素-4、6、10（IL-4、IL-6、IL-10）等，抑制免疫炎症，促使抗体形成，防止过度损伤。Th1型与Th2型免疫应答之间相互抑制，彼此制约调节正常的免疫平衡。正常妊娠中存在Th1、Th2型细胞应答生理性失衡，母体Th2型细胞占优势，进而发挥免疫保护作用维持妊娠。而URSA表现为一种特殊的Th1现象，Th1型细胞因子分泌增多，免疫损伤作用增强，损害妊娠，导致流产［2］。本研究比较了复发性流产患者、正常早孕者血清中IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4因子水平得知Th1、Th2细胞因子在妊娠的免疫调节中起重要作用，决定妊娠发展的方向，优势Th1细胞因子表达可能是妊娠失败的免疫学因素。王越等［3］对16例正常妊娠6～12周的孕妇外周血分离淋巴细胞。检查其培养液中Th1型细胞因子IFN-γ及Th2型细胞因子IL-4的含量，结果妊娠妇女IFN-γ水平显著低于对照组，而IL-4水平高于对照组近3倍。李昭荣等［4］对54例URSA患者血清及蜕膜组织中IL-2、IFN-γ的含量进行测定，结果表明URSA患者血清及蜕膜组织中IL-2、IFN-γ的水平均高于正常对照组。

近年来认为淋巴细胞主动免疫治疗可以调节母胎免疫平衡，其应用于临床取得了较高的妊娠率［5，6］。卫爱武［7］在其主动免疫疗法对原因不明复发性流产的防治及妊娠结局的影响中发现，淋巴细胞主动免疫疗法为URSA的有效治疗手段。在本临床研究中，URSA患者经主动免疫治疗后可明显提高Th2型细胞因子并下调Th1型细胞因子，纠正母体免疫紊乱状态，助妊娠成功。此外，笔者发现复发性流产患者流产次数与IFN-γ/IL-4水平无关，而流产时间与IFN-γ/IL-4水平密切关联。鉴于外周IL-4、IFN-γ水平与URSA妇女流产关系密切，因此临床上对URSA患者尤其流产时间较早者应进行免疫功能的检测，以便及时采取相应治疗措施，防止流产反复发生。

［1］Toth B，Jeschke U，Rogenhofer N，et al.Recurrent miscarriage：current concepts in diagnosis and treatment［J］．Reprod Immunol，2010，85（1）：25-32.

［2］邱丽华，林其德.免疫性复发性流产的发病机制及诊断和治疗［J］.上海交通大学学报：医学版，2009，29（11）：1275-1278.

［3］王越，屈野，毛利群，等.Th1型/Th2型细胞因子对人孕早期蜕膜的免疫调节作用［J］.现代妇产科进展，2009，12（1）：46.

［4］李昭荣，韩香，吕海侠，等.Th1/Th2型细胞因子与反复自然流产的关系［J］.西安交通大学学报：医学版，2003，24（3）：255-257．

［5］张翠红，孙玉红，陈传英.淋巴细胞免疫治疗原因不明性习惯性流产28例临床分析［J］.中国实用妇科与产科杂志，2008，17（10）：598-599.

［6］孔剑辉.主动免疫疗法治疗原因不明复发性流产112例疗效分析［J］.中国实用医学，2013，8（5）：114-115.

［7］卫爱武.主动免疫疗法对原因不明复发性流产的防治及妊娠结局的影响［J］.中医学报，2013，28（6）：878.

［2016－08－25收稿，2016－09－22修回］［本文编辑：宋敏］

Relativity study on Th1/Th2 type cytokines and unexplained recurrent spontaneous abortion

WANG Hong-yu，LI Ming-zhu.Dept.of Obstetrics and Gynecology，No.371 Hospital of PLA，Xinxiang，Henan 453000，China

ObjectiveTo explore the relativity of Type Th1/Th2 cytokines and unexplained recurrent spontaneous abortion（URSA），onset time and the number.MethodsThe 150 patients with unexplained recurrent miscarriage admitted in No.371 hospital were enrolled in study，and subject to active immune therapy as research group.The 100 cases of normal early pregnancy require induced abortion were control group.Double antibody Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect before and after treatment the peripheral blood's IFN-gamma，IL-4 levels and IFN-gamma/IL-4 ratio.ResultsResearch group's IFN-gamma，IL-4 level before treatment compared with control group，had significant difference（P<0.05）；while after treatment compared with the control group difference was statistically significant（P>0.05）.After treatment than before treatment IL-4 levels，IFN-gamma levels drop significantly，the difference was statistically significant（P<0.05）.URSA women abortion times repeatedly had nothing to do with IFN-gamma/IL-4 levels（P>0.05）；abortion time was associated with IFN-gamma/IL-4 levels（P<0.05）.ConclusionNormal pregnancy is a special kind of Th2 phenomenon，excessive expression of cytokines as Th1 type Th2 type cytokines are in a state of suppression which will lead to the occurrence of abortion.

Unexplained recurrent spontaneous abortion；Th1/Th2 type cytokines；Active immunotherapy

R714.21

A

10.14172/j.issn1671-4008.2017.03.008

453000河南新乡，解放军371医院妇产科（王红宇，李明珠）