高效液相色谱在黄酮类化合物分析中的应用

＊白 娟

（山西省朔州职业技术学院 山西 036002）

高效液相色谱在黄酮类化合物分析中的应用

＊白 娟

（山西省朔州职业技术学院 山西 036002）

利用高效液相色谱，分析黄酮类化合物的分离，是我国比较重要的中药领域知识，对于黄酮类化合物的定量分析，和定性分析，都需要高效液相色谱的支持。黄酮类化合物在植物中是广泛存在的，其药用价值对于平时的医用和药理来说，都是非常实用的，在黄酮类作为天然药物的必要产物时，现代HPLC的分析样品中获得了飞速发展，高效的液相色谱判断方法，在黄酮类的判别过程中，占据着非常重要的角色，而今的色谱条件在优化和定性分析的过程中的一系列研究问题，正是本文需要重点研究的方向。

高效液相；色谱；黄酮类；化合物；分析；应用

前言

按照黄酮类化合物的分析过程看，对于化合物分析的主要类型，都是极性大小对于所用的流动相组进行优化后的实验检测，实验是为了选择最佳的条件，从而找到对于黄酮类化合物来说比较合理的峰形，选择黄酮类化合物的最优属性，就可以得到普遍适用的检测方法。也就是说，对于黄酮类化合物的高效液相色谱分析方法和原理的掌握是比较适用于常见的药品分析工作的。

1.黄酮类化合物的色谱条件优化过程

按照分析化合物的种类和类型，就可以得到极性大小非常合理的柱子，对于流动组的优化和条件选择，就可以判断分析的类型是否得当。一般常用的方法有以下几种情况：

(1)层析柱。在黄酮类化合物的分析过程中，对于C18柱的分析和使用非常普遍，对于分析性比较明显突出的组分，如果出现低极性的特性，就可以利用反相的判断系统，经过预处理后的定石韦、绿原酸等化合物，获得对于基线分离效果的应用。在该类化合物的径向压缩分离系统的界定过程中，可以初步判断黄酮类化合物的存在和成分划分，该实验方法源自radial compression separation system，RCSS。

在对于黄酮类化合物的获取试验中，人们发现了柱内填充粒径研究中对于频率的顺序掌握，从目前对于黄酮类分析的应用领域来看，对于基数为5的应用是所占比率最大的，大约已经占据了约百分之四十以上，而对于基数为10的应用，则是相对次之的，大约占据了应用比例的百分之二十以上。

(2)分析黄酮类化合物的HPLC系统量表。在黄酮类化合物的反相系统过程中，研究表明其固定相的种类是比较多的，大约涉及到了C18柱，C8柱，氯基柱，氨基柱，苯基柱，C1柱，聚苯乙烯，二乙烯苯柱，RCSS系统等，另外，还有可能涉及到硅胶柱。

而在利用高效液相色谱判断流动相的时候，人们发现这些组成部分一般可以分成三个部分来统一实验，第一组分为甲醇、一米、宜春、二氧杂环乙烷、THF、2-丙醇、特-丁醇等，一般会使用离子对试剂，如四烷基溴化铵来进行实验的筛选工作，第一组分中还有可能有正乙烷、异辛烷环己烷、笨、氯仿等。第二组分则包含了乙醇、异丙醇、二氯甲烷、丙醇、乙晴、二乙基醚等，当然第二组分中还需要有蒸馏水的使用。第三组分，就是乙酸、甲酸、磷酸、高氯酸、柠檬酸、磷酸盐、乙酸等。

使用合理的高效液相色谱法对于黄酮类化合物的分析，包含了固定波长UV、可变波长UV等很多实验和检验因素，对于具体方法的筛选现在也是多种多样了。常用的实验手法是荧光检测、电流检测，同时，随着时代的进步，人们还发现并应用了停流扫描、光电二极管技术、阵列检测、化学位移往后的实验方法，对于衍生系统的使用和关注也是不可或缺的。

2.针对黄酮类化合物的分离技术

(1)分离实验的方法设计基础原理应用。使用HPLC方法来分离多种多样的黄酮类化合物种类，上文中已经提到了典型的黄酮类化合物分离的方法和大概成分，对于典型黄酮类化合物在分离的过程中，可以采用低极性的化合物来进行分离研究。比较常用的这类化合物比如有多甲氧基黄酮类化合物，在对于高效液相系统分离实验和研究的时候，可以采用固定相和新的化合物进行参照实验，具体点来说，对于RP-18的固定相设定是比较实用的。人们常用的方法之一，是使用2-丙醇-THF-水的实验建设初步的流动相和反相体系，这样可以很好的鉴定多甲氧基黄酮类的存在，并且有助于丙醇=环醚-水体系的黄酮类浓度洗脱分离中应用，推进其成功过程。

(2)反相系统分离的极性优化检测。很多色谱实验人员，在使用高效的液相色谱分析方法，进行二极管陈列的紫外检测技术应用时，会考虑到检测峰值的纯度。这种检测技术会采用极性较大的组分进行分离，比如说对于C18或者C8柱的反相系统分离技术，就是已经相对比较成熟的分离技术之一了。不过，在进行该实验的过程中，对于含有较多组分的复杂黄酮类化合物的分离，如果单纯的采用这种简单的分离方法，可能未必能达到理想的效果。研究者VOGT等人，经过长线的研究和试验，发明了更加实用的低压柱分离技术，在对于该组分进行预分离纯化的过程中，将试验所提取的黄酮类负责化合物，在反相HPLC上进行分析，就可以判断利用甲醇-水和乙晴-水的多种洗脱体系中，如果选择优化检测的具体条件和手段，这种实验需要一种可以分离所有这些黄酮的混合溶剂，但是目前并未取得突破性进展。

3.针对黄酮类化合物的定量分析

按照HPLC的定量分析，可以使用最低的检测极限，也就是说，使用NG级和PG级的检测值，检验出下限，比如说，下限数值为1.3-5ng。对于黄酮类化合物的定量分析，在实验设计之初就是利用HPLC的方法，对于某些稳定存在的黄酮类化合物进行定量分析，这样有利于在进行中药类化学组分和质量控制的时候，将含量控制的更加精确。虽然这种定量分析需要的标准品品质相对比较苛刻，但是分析工作也不是不可能的，尤其是对于高效液相色谱对于黄酮类标准品的制备，可以大大促进定量分析的发展。

4.针对黄酮类化合物的定性分析

对于HPLC的定性分析系统，对于黄酮类的分析分离和定量分析都起到了总结性的作用，目前对于黄酮类化合物分离的定性应用是不多的，常规的做法是，利用HPLC的方法，使用保留值来进行定性待测标准品的混合色谱分析。应用高效液相色谱来进行化合物的稳定定性提取，可以采用与HPLC联合使用的紫外光谱技术作为补充，紫外光谱是可以有效对照样品和标准品的方法，对于提高鉴定的可靠性和品级都有很好的作用。

结束语

对于高效液相色谱的检测和实验，是建立在大量黄酮类化合物的鉴定基础之上发展起来的，目前在新时期的检测技术不断在细节上进步，通过提升分离效果和定量分析的技术改进，通过计算机辅助优化设计方法，在一定程度上加快了新柱子和流动相的研究进展。对于丙醇-环醚-水体系的推动，运用了传统的甲醇分离链条所不能达到的效果，促进了新时期HPLC在黄酮类化合物分析的综合进步。

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[2]邓永利,周光明,陈军华,高意,廖安辉．离子液体辅助超声萃取-高效液相色谱同时测定半边莲中6种黄酮类化合物[J]．食品科学,2016,(20):37-41．

[3]张维冰,王智聪,张凌怡．超高效液相色谱-二极管阵列检测-串联质谱法测定菊花中的10种咖啡酰基奎宁酸和22种黄酮类化合物[J]．分析化学,2013,(12):1851-1861．

[4]池玉梅,李瑶,张瑜,王琴霞,崔小兵．超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱分析黄酮类化合物及小毛茛茎叶的成分[J]．色谱,2013,(09):838-844．

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(责任编辑 王跃梅)

Application of High Performance Liquid Chromatography in the Analysis of Flavonoids Compounds

Bai Juan
(Shuozhou Vocational Technology College of Shanxi Province, Shanxi, 036002)

Using high performance liquid chromatography to analyze the separation of fl avonoids compounds is the important knowledge of Chinese medicine, besides, the quantitative and qualitative analysis of fl avonoids compounds requires the support of HPLC. Flavonoids compounds are widely used in plants and their medicinal value is very practical for medical and pharmacological purposes. In the case of fl avonoids as the essential products of natural medicine, modern HPLC analysis samples have got rapid development. High performance liquid chromatography (HPLC) method is very important in the identi fication process of fl avonoids, and a series of research problems in the optimization and qualitative analysis process of chromatographic conditions are exactly the research orientation in this paper.

high performance liquid；chromatography； fl avonoids；compounds；analysis；application

T

A

白娟（1986～），女，山西省朔州职业技术学院；研究方向：色谱。