基于高效液相色谱法的荔枝草中鼠尾草酚含量测定

宋 芹， 梁 立， 刘 嵬， 卿根玉， 尹海兵， 苟小军

(成都大学 药食同源植物资源开发四川省高校重点实验室， 四川 成都 610106)

基于高效液相色谱法的荔枝草中鼠尾草酚含量测定

宋 芹， 梁 立， 刘 嵬， 卿根玉， 尹海兵， 苟小军

(成都大学 药食同源植物资源开发四川省高校重点实验室， 四川 成都 610106)

利用高效液相色谱法建立测定荔枝草中鼠尾草酚含量的方法，色谱柱为Inertsil ODS-SP C18色谱柱，以乙腈—0.2%磷酸(50∶50)为流动相，25 ℃柱温，检测波长为285 nm.实验显示，鼠尾草酚在1.248～2.912 μg范围内线性关系良好(r=0.9997)，加样回收率符合要求.结果表明，该方法简便、准确，可作为荔枝草中鼠尾草酚含量测定的一种有效方法.

荔枝草；鼠尾草酚；RP-HPLC

0 引 言

荔枝草，又名蛤蟆草、雪见草，为唇形科鼠尾草属植物，其性凉、味苦、辛，具有清热解毒、凉血止血、利尿等功效[1].药理研究表明，荔枝草具有止咳平喘、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等作用[2-4].在民间，有将荔枝草作为药食同源植物当菜食用的习惯，也有将荔枝草开发成为保健茶的报道[5-6].目前，在中药行业中对荔枝草的质量控制多针对其黄酮类成分的含量进行测定，对其中具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤等活性的二萜酚类成分的质量控制方法还未见报道.对此，本研究拟建立一种采用高效液相色谱法测定荔枝草中二萜酚类成分—鼠尾草酚含量的方法，为该植物的质量控制提供依据；同时，通过比较荔枝草中叶、茎、花萼等植物器官中鼠尾草酚的含量差异，为该植物的合理开发利用提供参考.

1 材料与仪器

1.1 材 料

实验所用材料包括：鼠尾草酚对照品为实验室自制，纯度高于99.9%；荔枝草购于成都中药材市场，经鉴定为唇形科植物荔枝草的地上干燥部分.

1.2 仪 器

实验所用仪器包括：SUMMIT高效液相色谱仪(美国戴安公司)；Sartorius BP211D型十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)；Simplicity SIMS00000超纯水器(美国密理博公司).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

实验的色谱条件为：色谱柱，Inertsil ODS-SP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相，乙腈—0.2%磷酸水溶液(50∶50)；流速1.0 mL/min，检测波长285 nm，进样量10 μL.理论塔板数n大于6 000.

2.2 对照品溶液的配制

精密称取鼠尾草酚对照品适量，加乙醇溶解，定容至25 mL量瓶中，其浓度为0.4160 mg/mL，作为对照品储备液.

2.3 供试品溶液的制备

分别精密称取干燥粉碎后的荔枝草花萼粉末5.0122 g、荔枝草叶5.0066 g，置于圆底烧瓶中，加乙醇50 mL.称定质量，加热回流1 h，冷却，再称定质量，用乙醇补足损失的质量，摇匀，抽滤，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液2 mL自然挥干后，加入1 mL乙醇溶解，作为供试品溶液.

2.4 线性关系考察

精密吸取上述对照品储备液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL，分别加入乙醇定容至10 mL，各进样10 μL，记录色谱图(见图1)，以峰面积A为纵坐标，浓度C(mg/mL)为横坐标，进行线性回归，得鼠尾草酚的标准曲线方程，结果表明，在0.1248～0.2912 mg/mL范围内线性关系良好.

A=119.17C-2.2784，r=0.9997

A.对照品;B.荔枝草花萼;C.荔枝草叶

2.5 精密度

精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次进样量10 μL，记录峰面积，其RSD为0.57%，表明仪器的精密度良好.

2.6 稳定性

分别精密吸取荔枝草花萼、叶的同一供试品溶液，在制备后每间隔5 h进样1次，进样量10 μL，记录峰面积，花萼样品的RSD为3.58%，叶子样品的RSD为2.88%，表明供试品溶液在25 h内稳定.

2.7 重复性

取同一批药材粉末，精密称定6份，按供试品溶液的制备方法制备和测定.花萼样品的RSD为2.35%，叶子样品的RSD为2.96%，表明方法的重现性良好.

2.8 加样回收

取荔枝草花萼和叶子粉末各约0.25 g，精密称定，分别精密加入对照品溶液适量，按供试品溶液的制备方法处理，测定、计算加样回收率.荔枝草叶样品加样回收率为99.32%，花萼样品加样回收率为99.64%，RSD均小于5%.结果见表1、表2.

表1 荔枝草叶样品的加样回收率测定数据(n=6)

表2 荔枝草花萼样品的加样回收率测定数据(n=6)

2.9 样品测定

按“2.1”项下的色谱条件测定5批样品，进样量为10 μL，由标准曲线计算含量，结果见表3.

表3 荔枝草不同部位中鼠尾草酚的含量

3 结 论

荔枝草为唇形科植物，该科植物大多含有二萜酚类成分，如鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚等，该类成分多具有抗菌、抗氧化、抗癌等活性，是一类与荔枝草功效密切相关的化学成分.为了解鼠尾草酚在荔枝草不同器官中的分布情况，本实验分别对植物的花萼(花易脱落)、叶与茎等不同植物器官中鼠尾草酚的含量进行测定.由测定结果可知，荔枝草中鼠尾草酚的含量高低顺序为：花萼>叶>茎，而荔枝草茎中鼠尾草酚几乎未检出.

实验发现，鼠尾草酚在波长206、235、285 nm下有吸收，在波长206、235 nm附近检测灵敏度较高，但干扰较大，故选用波长285 nm作为鼠尾草酚含量测定的检测波长.由于荔枝草中鼠尾草酚的含量相对较少，并且在波长285 nm下吸收度系数较低，为了提高响应值，降低误差，在样品制备时将样品浓缩一倍浓度后进样，检测.

此外，根据所测成分的溶解性，本实验考察了用甲醇、乙醇、丙酮作为溶媒通过超声和回流对荔枝草中鼠尾草酚进行提取.结果表明，以甲醇、乙醇回流1 h的提取方法，提取物中鼠尾草酚的提取率高，杂质少，考虑到甲醇毒性，故选用乙醇回流1 h的提取方式.在流动相的选择上，乙腈—磷酸的分离效果优于甲醇—磷酸，其中选用0.2%磷酸水溶液可有效解决拖尾的问题.

实验表明，本研究所建立的高效液相色谱法测定荔枝草中鼠尾草酚含量的方法，具有精密度好、回收率符合要求、重复性好的特点，完全可用于荔枝草的质量控制.

[1]中华本草编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999.

[2]卢汝梅,杨长水,韦建华.荔枝草化学成分研究[J].中草药,2011,42(5):859-862.

[3]丁平,田友清.中药荔枝草的研究进展[J].安徽农业科学,2008,36(10):4133-4134.

[4]翁新楚,谷利伟,董新伟,等.荔枝草化学成分的分离和结构鉴定及其抗氧化性能的研究[J].烟台大学学报(自然科学与工程版),1997,10(4):305-312.

[5]荔枝草保健茶的制作工艺研究[J].食品工业科技,2013,34(4):293-299.

[6]肖允贞.一种将蛤蟆草加工成饮用茶的方法:CN1977627A[P].2007-06-13.

Determination of Carnosol Content in Salvia Plebeia by HPLC

SONGQin,LIANGLi,LIUWei,QINGGenyu,YINHaibing,GOUXiaojun

(Key Lab of Medicinal and Edible Plants Resources Development of Sichuan Province, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The paper is going to find the way to determine the content of carnosol in Salvia plebeia.HPLC method is used. Inertsil ODS-SP C18column is used as the Chromatographic column.Acetonitrile-0.2% phosphoric acid(50∶50) is used as mobile phase.The column temperature is maintained at 25 ℃.The detection wavelength is set at 285 nm.The results demonstrate that carnosol shows a good linear relationship within 1.2480～2.9120 μg.The conclusion is drawn that this method is simple,accurate and can be considered as an effective method to determine the content of carnosol in Salvia plebeia．

Salvia plebeia;HPLC;carnosol;RP-HPLC

1004-5422(2017)01-0015-03

宋 芹(1982 — )， 女， 博士， 副教授， 从事药食同源植物资源开发研究.

2016-12-05.

R284.1；O657.7+2

A