复方降脂软胶囊对高脂血症小鼠的药效学和毒理学试验

梁晓炜，李培杉，李

1.杜仲栽培与利用河南省工程实验室，河南 开封 475004；2.河南省中药药效国际联合实验室，河南 开封 475004；3.河南大学 药学院，河南 开封475004

复方降脂软胶囊对高脂血症小鼠的药效学和毒理学试验

1.杜仲栽培与利用河南省工程实验室，河南 开封 475004；2.河南省中药药效国际联合实验室，河南 开封 475004；3.河南大学 药学院，河南 开封475004

〔目的〕研究复方降脂软胶囊对饮食诱导所致高脂血症小鼠的影响。〔方法〕将昆明小鼠60只随机分为6组，分别为：空白对照组、高脂模型对照组、洛伐他汀对照组、软胶囊高剂量组、软胶囊中剂量组、软胶囊低剂量组。高脂模型对照组和各药物剂量组饲喂高脂饲料造小鼠高脂血症模型，造模期2周后空白对照组、高脂模型对照组给予相同体积5 g/L CMC-Na，洛伐他汀对照组灌胃给予洛伐他汀，3个软胶囊剂量组灌胃给予相应剂量的软胶囊内容物。每两天称体重，实验结束后测定小鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平以及肝脏系数。〔结果〕复方降脂软胶囊能显著降低高血脂症小鼠血中TC、TG和LDL-C水平，增高HDL-C水平，并且能够降低高脂血症小鼠的体重和肝脏系数。〔结论〕复方降脂软胶囊具有良好的降血脂作用，并能够控制高脂血症小鼠体重增长和改善由脂质代谢紊乱造成的肝脏系数变化。

降脂软胶囊；高脂血症；小鼠；调节血脂

高脂血症(Hyperlipidemia)是一种常见的代谢紊乱疾病，发病原因是由于脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于或低于正常水平，临床表现为血中总胆固醇(Total cholesterol,TC)或甘油三酯(Triglyceride,TG)升高或者两者兼有。高脂血症最主要的危害是促进动脉粥样硬化的发生和发展，有研究[1]证明高脂血症患者血浆致动脉粥样硬化指数水平与其他一些血栓形成危险因子的相关性明显要高于正常人群，同时高脂血症是高血压、糖尿病形成的重要危险因素，还可能导致脂肪肝、肥胖症等疾病[2]。临床上常采用他汀类和贝特类[3]药物治疗高脂血症，其疗效确切，但是副作用明显[4]，在一定程度上制约了其使用。中医药治疗高脂血症因其疗效好且副作用小，并且中药材来源广泛，因此其相关研究日益增多[5-8]。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级昆明小鼠，雄性，体重18～20g，许可证号：SCXK(豫)2015-0004，由河南省实验动物中心提供。

1.2 实验药物

复方降脂软胶囊：内容物处方由杜仲籽油、亚麻籽油、纳豆冻干粉、蜂蜡与维生素E油组成。实验中将软胶囊内容物与5 g/L CMC-Na按一定比例用涡旋振荡器混匀，然后给实验动物灌胃。洛伐他汀胶囊：扬子江药业集团有限公司(批号：15121642)。

1.3 实验主要材料与试剂

基础饲料由河南省实验动物中心提供；高脂饲料：体积分数58.35%基础饲料，体积分数1.5%胆固醇，体积分数20%脂肪，体积分数10%蔗糖，体积分数10%蛋黄粉，体积分数0.15%胆酸钠；小鼠LDL-C、HDL-C、TG、TC检测试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)；肝素钠注射液(江苏万邦生化医药股份有限公司)。

1.4 实验主要仪器

全波长酶标仪(美国Bio-Tek公司)；电子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；涡旋振荡器(美国Thermo Fisher科技公司)。

2 实验方法

2.1 急性毒性实验

小鼠20只，体重20 g左右，采用最大一次限量法，软胶囊内容物10 g/Kg给小鼠灌胃，观察小鼠有无异常情况，12 d后脱臼处死小鼠并解剖。

2.2 调节血脂实验

2.2.1 小鼠高脂模型的建立 60只小鼠适应性喂养5 d后，称体重并随机分为6组，分别为：空白对照组、洛伐他汀对照组、高脂模型对照组、软胶囊低剂量组、软胶囊中剂量组、软胶囊高剂量组。空白对照组在实验期内饲喂基础饲料，其余5组适应期结束后饲喂高脂饲料，每周称取体质量。

2.2.2 小鼠给药方法 造模期2周后开始对小鼠进行灌胃，每组饲喂饲料及灌胃剂量如下：空白对照组：基础饲料+0.3 mL5 g/L CMC-Na；高脂模型对照组：高脂饲料+0.3 mL5 g/L CMC-Na；洛伐他汀对照组：高脂饲料+洛伐他汀(10 mg/Kg)；软胶囊低剂量组：高脂饲料+软胶囊内容物(167 mg/Kg)；软胶囊中剂量组：高脂饲料+软胶囊内容物(333 mg/Kg)；软胶囊高剂量组：高脂饲料+软胶囊内容物(1 g/Kg)。3个软胶囊低、中、高剂量组剂量分别为人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍。每天灌胃1次，连续灌胃4周，灌胃期间自由饮水和进食，每两天称取体质量。

2.2.3 小鼠血浆中脂质水平的测定以及肝脏系数测定 末次给药后，禁食不禁水12 h，眼眶静脉丛采血，放置于肝素浸泡过夜并烘干的离心管中，3 000 r/min离心15 min，吸取上清液，尽快测定小鼠血浆中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量，测定方法严格按照相应的测定试剂盒说明书。小鼠取血后，颈椎脱臼处死，打开腹腔分离肝脏，在冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称量湿重并计算肝脏系数。肝脏系数计算公式为：肝脏系数=(肝脏重量/小鼠体重)×100%

2.3 统计分析

实验数据采用SPSS 17.0进行处理，多组均数进行方差齐性检验(Homogenity of variances)，组间比较采用单因素方差(One-Way ANOVA)分析。实验数据结果以s表示。

3 实验结果与分析

3.1 小鼠急性毒性实验

灌胃后喂养12 d，在观察期内动物活动、进食、行为等均正常，未出现中毒症状或不良反应。实验结束后解剖小鼠，肉眼观察小鼠各个脏器均无异常。说明小鼠急性经口的最大耐受量大于10 g/Kg，相当于人推荐用量的300倍，根据急性毒理性分级标准，该样品属无毒级。

3.2 复方降脂软胶囊对小鼠血浆中LDL-C和HDL-C含量的影响(见表1)

由表1可知，高脂模型对照组小鼠血浆中LDL-C含量极显著高于空白对照组(P<0.01)，说明高脂血症小鼠模型造模成功。在LDL-C含量方面，软胶囊中剂量组小鼠血浆中的LDL-C水平显著低于高脂模型对照组(P<0.05)，软胶囊高剂量组小鼠血浆中的LDL-C水平极显著低于高脂模型对照组(P<0.01)，说明软胶囊内容物中、高剂量组可显著降低高脂血症小鼠血浆的LDL-C水平。在HDL-C含量方面，软胶囊低剂量组HDL-C水平显著低于高脂模型对照组(P<0.05)，软胶囊中、高剂量组HDL-C水平均极显著低于高脂模型对照组(P<0.01)，说明软胶囊内容物能显著升高高脂血症小鼠血浆的HDL-C含量。

表1 各组小鼠血浆中LDL-C和HDL-C的含量 (s,mmol·L-1)

注：1.与空白对照组比较，◆◆P<0.01，极显著性差异；◆P<0.05，显著性差异。2.与高脂模型对照组比较，**P<0.01，极显著性差异；*P<0.05，显著性差异。

3.3 复方降脂软胶囊对小鼠血浆中TG和TC含量的影响(见表2)

由表2可知，高脂模型对照组小鼠血浆中TG和TC含量均极显著高于空白对照组(P<0.01)，说明高脂血症小鼠模型造模成功。在TG含量方面，软胶囊低、中、高3个剂量组小鼠血浆中的TG水平均显著低于高脂模型对照组(P<0.05)，说明软胶囊内容物可显著降低高脂血症小鼠血浆的TG水平。在TC含量方面，软胶囊中、高剂量组TC水平显著低于高脂模型对照组(P<0.05)，说明软胶囊内容物中、高剂量能显著升高高脂血症小鼠血浆的HDL-C含量。

表2 各组小鼠血浆中TG与TC的含量(s,mg·dL-1)

注：1.与空白对照组比较，◆◆P<0.01，极显著性差异；◆P<0.05，显著性差异。2.与高脂模型对照组比较，**P<0.01，极显著性差异；*P<0.05，显著性差异。

3.4 复方降脂软胶囊对小鼠体重和肝脏系数的影响(见表3)

由表3可知，连续给药4周后，与空白对照组相比，高脂模型对照组小鼠体重极显著增加，说明长期的高脂饮食会影响体重变化。软胶囊低、中、高3个剂量组在实验期内的增重均极显著低于高脂模型对照组(P<0.01)，说明软胶囊内容物可以控制高脂血症小鼠的体重增长趋势。在小鼠肝脏系数方面，软胶囊低、中、高3个剂量组均显著低于高脂模型对照组(P<0.05)，说明软胶囊内容物能够改善高脂饮食引起的肝脏系数变化。

表3 各组小鼠体重与肝脏系数结果(s)

注：1.与空白对照组比较，◆◆P<0.01，极显著性差异；◆P<0.05，显著性差异。2.与高脂模型对照组比较，**P<0.01，极显著性差异；*P<0.05，显著性差异。

4 结论

我们研究以脂质代谢紊乱的高脂血症小鼠作为实验对象，通过灌胃给予复方降脂软胶囊内容物，考察其是否具有调节血脂的功效。上述结果表明，软胶囊内容物3种不同剂量灌胃小鼠后都能不同程度地改善小鼠的血脂水平，降低其血浆中TC、TG、LDL-C含量，并能显著提高血浆中HDL-C的含量。分析其原因，可能与复方降脂软胶囊中含有丰富的不饱和脂肪酸、大豆异黄酮、纳豆激酶和木酚素等有关，可能与调节血脂[9]、抗氧化[10]、降低血浆纤维蛋白原[11]等综合作用的结果。我们研究结果还显示复方降脂软胶囊能够控制高脂血症小鼠体重增长，改善由脂质代谢紊乱引起的肝脏系数变化，但是其作用机理有待进一步研究。小鼠急性毒性实验证明，小鼠急性毒性实验测不出LD50，最大耐受量为10g/Kg，相当于人推荐用量的300倍，说明复方降脂软胶囊属于无毒级。

[1] 周筱琼，于小妹，叶雄伟，等. 高脂血症患者血浆致动脉粥样硬化指数与血栓形成危险因子的相关性[J].中国动脉硬化杂志,2010,18(10):799-802.

[2] 崔兰玲. 浅谈高血脂症的危害及中医预防[J].西部中医药,2012,25(12):101-102.

[3]JunM,FooteC,LvJ,etal.Effectsoffibratesoncardiovascularoutcomes:asystematicreviewandmeta-analysis[J].Lancet,2010,375(9729):1875-1884.

[4] 孙吉叶，蔡旭东，康秀娟，等. 治疗高脂血症的新药研究进展[J].现代药物与临床,2012,27(5):435:441.

[5] 杨孝华.参芪五子降脂汤治疗高脂血症120例临床疗效分析[J].临床和实验医学杂志,2015,14(15):1272-1275.

[6]HuangYL,ChowCJ,TsaiYH.Composition,characteristics,andin-vitrophysiologicaleffsctsofthewater-solublepolysaccharidesfromCassiaseed[J].FoodChem,2012,134(4):1967-1972.

[7] 梁伟伟，严瑾，吴利花，等. 山楂叶总黄酮对高脂血症大鼠脂代谢的影响[J].健康研究,2010,30(1):8-11.

[8] 王启春，江显萍，吴大鸿.阿托伐他汀联合丹田降脂丸治疗高领高血脂症临床观察[J].现代中西医结合杂志,2012,21(36):4047-4048.

[9] 叶湘漓，刘东波，雷立芳. 毛葡萄籽油的化学成分分析及其对高脂血症大鼠血脂的影响[J].食品科技,2011(11):72-75.

[10]RuferCE,KullingSE.Antioxidantactivityofisoflavonesandtheirmajormetabolitesusingdifferentinvitroassays[J].JAgricChem,2006,54(8):2926-2931.

[11]HsiaCH,ShenMC,LinJS,etal.Nattokinasedecreasesplasmalevelsoffibrinogen,factorⅦ,andfactorⅧinhumansubjects[J].NutritionResearch,2009,29(3):190-196.

[责任编辑 李武营]

Pharmacodynamic and Toxicological Tests of Soft Capsule on Blood Lipids Regulation of Mice with Hyperlipemia

1. Eucommia ulmoides Cultivation and Utilization of Henan Engineering Laboratory，Kaifeng 475004, China; 2. Henan International Joint Laboratory of traditional Chinese Medicine，Kaifeng 475004, China; 3.pharmaceutical of College of Henan University，Kaifeng 475004, China

〔Objective〕To investigate the effect of compound lipid lowering soft capsule in diet-induced hyperlipemia mice.〔Methods〕Sixty Kunming male mice were randomly divided into 6 groups:normol control group (NC), high fat model control group(MC), lovastatin control group,soft capsule high dose group, soft capsule medium group, soft capsule low dose group. The hyperlipemia model was established by feeding the mice of high-fat model control group and the drug dose group with high-Nfat diet.With different feed continuous feeding for two weeks,the mice of NC and MC were treated with 0.5% CMC-Na.Mice of lovastatin control group were treated with lovastatin by gavage,and mice of the three soft capsule dose were treated with corresponding dose of soft capsule contents.Weighed every two days.The plasma total cholesterol(TC),triglyceride(TG),low density lipoprotein cholesterol(LDL-C), high density lipoprotein cholesterol (HDL-C)levels and liver coefficient were evaluated after four weeks.〔Results〕Compound lipid-lowering soft capsule could significantly reduced hyperglycemia mice plasma TC, TG, LDL-C level.The HDL-C could also increased.Furthermore, the weight and liver coefficient of hyperlipemia mice were reduced.〔Conclusion〕Compound lipid lowering soft capsule had a good hypolipidemic effect and it could controlled the weight gain in mice and improved the liver coefficient change that caused by lipid metabolic disorder.

lipid lowering soft capsule; hyperlipemia; mice; regulation of blood lipids

1672-7606(2017)01-0019-04

2016-08-10

河南省教育厅科学技术研究重点项目(16B360001)；国家中药标准化项目(ZYBZH-Y-HEN-19)

梁晓炜(1991-)，女，河南安阳人，硕士研究生，从事中药活性成分和质量控制研究工作。

李钦(1965-)，男，河南郑州人，博士，教授，硕士生导师，从事中药质量评价及新药研究工作。

R285.5

A