高效液相色谱法测定左旋四氢巴马汀自微乳中左旋四氢巴马汀含量

梁淑贞，丁少波，钟李青，何瑞荣

（广东省东莞市人民医院药学部，广东东莞 523000）

高效液相色谱法测定左旋四氢巴马汀自微乳中左旋四氢巴马汀含量

梁淑贞，丁少波，钟李青，何瑞荣

（广东省东莞市人民医院药学部，广东东莞 523000）

目的建立测定左旋四氢巴马汀自微乳含量的高效液相色谱法。方法色谱柱采用Phenomenex Desc Gemini－NX 5 C18柱(250 mm×4.6 mm，5 m，110Å)，流动相为0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH至6.32）－甲醇（35∶65），检测波长为280 nm，进样量为10 L，流速为1.0 mL／min，柱温为30℃。结果左旋四氢巴马汀质量浓度在0.1～1.0 g／L范围内与峰面积线性关系良好（r＝0.999 9)；精密度试验RSD为0.38%；稳定性试验RSD为0.96%；重复性试验左旋四氢巴马汀的含量为91.81%，RSD为0.58%；回收试验平均回收率为99.97%，RSD为0.60%（n＝9)。结论该方法简便、灵敏、重复性好，结果准确、可靠，可作为左旋四氢巴马汀自微乳的质量控制方法。

高效液相色谱法；左旋四氢巴马汀自微乳；含量测定

左旋四氢巴马汀是常用的镇静、止痛药，其还对心肌损伤、脑损伤有保护作用，具有抗心律失常的功效。也有研究表明，左旋四氢巴马汀能提高海洛因成瘾者的戒毒率[1－2]。但由于其水溶性极差，口服生物利用度极低，故其口服制剂应用受到限制[3]。自微乳化药物传递系统(self－emulsifying drug delivery system，SEDDS)是一种新型药物传递系统，药物溶解于载体中，口服给药后在胃肠道的蠕动下自发形成O／W型微剂，粒径10～100 nm。SEDDS能提高难溶性药物的溶解度，增加细胞膜的流动性，促进药物淋巴吸收，从而提高药物的生物利用度[4]。为了控制左旋四氢巴马汀自微乳的质量，本研究中建立了左旋四氢巴马汀自微乳的含量测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC－20A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)； SHB－Ⅲ型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司）；SHA－CA型数显水浴恒温振荡器（金坛市易辰仪器制造有限公司）；FA2004型电子分析天平；TDL－5A型高速离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司）；KQ－500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

左旋四氢巴马汀对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100452－200301）；左旋四氢巴马汀原料药（西安开来生物工程有限公司，纯度≥98%，批号为K120105，K120106）；聚乙二醇400(PEG400，西陇化工股份有限公司，批号为130115）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 自微乳制备

称取左旋四氢巴马汀原料药200 mg(主药)，乙酸异丙酯10 g(辅料)，OP乳化剂10 g(辅料)，PEG400 1 g (辅料)，精密称定，置具塞锥形瓶中，于（37±0.5）℃恒温水浴振荡至原料药完全溶解，制成自微乳，称重。平行制备3批左旋四氢巴马汀自微乳。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[5－16]

色谱柱：Phenomenex Desc Gemini－NX 5 μ C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，100Å)；流动相：0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH至6.32）－甲醇（35∶65）；检测波长：280 nm；进样量：10 μL；流速：1.0 mL／min；柱温：30℃。

2.2.2 溶液制备

对照品溶液：取左旋四氢巴马汀对照品50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1 g／L的对照品贮备液。

供试品溶液：取2.1项下左旋四氢巴马汀自微乳2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

空白自微乳溶液：取2.1项下左旋四氢巴马汀自微乳处方量辅料，置具塞锥形瓶，于37℃恒温水浴振荡2 h，取2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2.2项下3种溶液，按拟订色谱条件分别进样测定，色谱图见图1。结果表明，左旋四氢巴马汀自微乳对照品溶液与供试品溶液的保留时间一致，空白自微乳溶液在相应位置无干扰峰出现，同时主峰与其他组分分离完全，拖尾因子在0.95～1.05，分离度大于1.5，理论板数计算不低于3 000。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 g／L的系列对照品溶液。按拟订色谱条件进样测定，以进样质量浓度（X，g／L)为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝436.58X＋0.947 2，r＝0.999 9(n＝6)。结果表明，左旋四氢巴马汀质量浓度在0.1～1.0 g／L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取线性关系考察项下质量浓度为0.4 g／L的对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果峰面积分别为176.7，177.0，176.5，176.1，176.9，178.1，平均176.9，RSD为0.38%（n＝6），表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验：取同一批（批号为160404）左旋四氢巴马汀自微乳，按供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件连续进样测定。结果左旋四氢巴马汀的含量分别为90.97%，91.92%，92.56%，92.11%，91.64%，91.74%，平均91.81%，RSD为0.58%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液于室温放置，分别于0，2，4，6，8，10，12 h时按拟订色谱条件进样测定。结果左旋四氢巴马汀峰面积分别为164.8，166.9，165.9，167.2，168.8，168.9，平均167.1，RSD为0.96%（n＝6），表明供试品溶液在室温下12 h内稳定。

加样回收试验：取同一批（批号为160404）左旋四氢巴马汀自微乳1 g，共9份，精密称定，置50 mL容量瓶中，并分别精密加入左旋四氢巴马汀对照品6，8，10 mg，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

取3批（批号为160404，160405，160406）左旋四氢巴马汀自微乳，依法制备供试品溶液，进样测定，计算含量。结果见表2。

3 讨论

3.1 流动相选择

左旋四氢巴马汀不溶于水，可溶于甲醇，故用含65%甲醇的流动相溶解，流动相中加入三乙胺可改善主峰的拖尾现象。该制剂是O／W型乳剂，在流动相中溶解性能很好，且不影响左旋四氢巴马汀的含量测定。曾考察甲醇－磷酸盐溶液、甲醇－水溶液、甲醇－磷酸溶液、乙腈－磷酸溶液，有机相占60%以上，大部分用了三乙胺等扫尾剂。甲醇与水的流动相组合预试验发现，峰形不佳；甲醇－磷酸盐流动相系统峰形较好，样品测定也未见有干扰，但流动相对于样品的溶解效果不是很好，需要超声处理；甲醇－磷酸溶液流动相系统未加三乙胺时峰形不好，考虑加入扫尾剂。采用单因素对照试验优选加入三乙胺的量，最终流动相pH为6.3时，峰形最佳，且流动相对供试品的溶解较好。

表1 左旋四氢巴马汀加样回收试验结果（n＝9）

表2 样品含量测定结果(n＝3，%)

3.2 处方筛选

通过溶解度试验筛选油相、乳化剂和助乳化剂，并以乳化时间、色泽和乳化颗粒形态为指标，通过伪三相图的绘制，筛选最佳处方及配比，制备空白自微乳及左旋四氢巴马汀自微乳。

3.3 波长选择

有文献显示，通过全波长扫描试验，结果281 nm波长处有最大吸收峰。故选择280 nm作为检测波长，且无干扰峰出现，方法学考察结果较好。

左旋四氢巴马汀属生物碱类，难溶于水，口服生物利用度较低，受光热极易氧化为巴马汀，故含量测定时对样品的处理不能采用加热溶解的方式。高效液相色谱法测定含量快速、准确，样品的处理经过溶解即可。方法学考察各项指标符合规定，精密度、稳定性、准确度都符合要求，可作为乳剂生产过程的质量控制和检测方法，也可作为自微乳成品的质量标准。

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Content Determination of L－Tetrahydropalmatine in L－Tetrahydaopalmatine Self－Microemulsion by HPLC

Liang Shuzhen,Ding Shaobo,Zhong Liqing,He Ruirong
(Department of Pharmacy,Dongguan People′s Hospital,Dongguan,Guangdong,China523000)

Objective To establish a content determination method of L－tetrahydropalmatine in L－tetrahydaopalmatine Self－Microemulsion by HPLC.MethodsThe column was Phenomenex Desc Gemini－NX 5 μ C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm,110Å);the mobile phase consisted of 0.1%phosphoric acid solution(pH adjusted to 6.32 with triethylamine)and methanol(35∶65);the detection wavelength was set at 280 nm;the injection volume was 10 μL;the flow rate was 1.0 mL／min and the column temperature was 30℃.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.1 to 1.0 g／L(r＝0.999 9);RSD of accuracy was 0.38%,and the RSD of stability was 0.96%.The content of L－tetrahydropalmatine was 91.81%and the RSD was 0.58%in the repeatability test.The recovery rate of L－tetrahydropalmatine was 99.97%and the RSD was 0.60%(n＝9)in the recovery test.ConclusionThe method is simple,sensitive,reproducible,accurate and reliable,which can be used as a quality control method for L－tetrahydropalmatine self－microemulsion.

HPLC;L－tetrahydropalmatine Self－Microemulsion;content determination

R927.2；R971＋.3

A

1006－4931(2017)01－0028－03

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.01.009

2016－10－01；

2016－11－21)

梁淑贞，大学本科，主管药师，主要从事医院药学工作，（电子信箱）120714659＠qq.com。