水貂阿留申病的诊断与防治

李存美 （山东省潍坊市坊子区九龙兽医站 261202）

水貂阿留申病的诊断与防治

李存美 （山东省潍坊市坊子区九龙兽医站 261202）

本文综述了水貂阿留申病的不同诊断方法，介绍了水貂阿留申病目前常用的防治措施，这有助于该病的诊断及提前预防，提高经济效益。

水貂阿留申病又称浆细胞增多症或高丙球蛋白血症。这种病是由细小病毒科，细小病毒属的阿留申病病毒(ADV)侵染机体引起的，经发展成为一种慢性的持续性衰弱疾病。患病机体常表现为终生病毒血症，持续性感染，单核—巨噬细胞系统受到侵害。其生理特征是浆细胞弥漫性增生、进行性免疫复合物形成、产生多量γ球蛋白，临床主要症状为肾小球肾炎、动脉血管炎和肝炎[1,2]。蓝色和黄色彩貂发病率最高，标准黑貂和其他深色貂也时有发生[3]。阿留申病造成的损失占水貂场总损失的5%～ 50%。该病的发生致使水貂繁殖率降低和毛皮品质低劣，严重者因免疫系统紊乱，抵抗力下降，继发其他细菌和病毒感染而死亡。因此该病给养貂业造成了重大的损失。随着养貂业的发展，阿留申病的诊断与防治工作毋庸置疑成为重中之重，而此病诊断及防治将直接关系到貂养殖业的发展，对于此病的研究不曾止步。

1 诊断

1.1 临床症状

患病动物临床表现分急性和慢性两种。急性患病个体表现为食欲减少或丧失，嗜眠、精神沉郁，逐渐衰竭，死前出现痉挛，病程2～3d[4]。慢性病例主要有如下症状：（1）出血和贫血：病貂出血性素质变化非常明显，主要表现在口腔、齿龈、软腭、硬腭和舌根上有大量出血点和出血斑。内脏器官尤其是消化道出血，排出煤焦油样粪便。由于出血和造血器官受破坏，因此病貂在临床上表现贫血症状，主要表现在口腔黏膜，眼结膜和阴道黏膜苍白，检查脚趾出现明显苍白贫血状态[5]；（2）渐进性消瘦：病貂食欲时好时坏，貂体逐渐消瘦，严重病貂体重急剧下降；（3）渴欲增强：由于肾脏的严重损害，增加了水分消耗，表现为高度口渴，暴饮或精神沉郁[6]；（4）侵害神经系统：表现抽搐、痉挛、共济失调、后躯麻痹等症状，2～3d死亡。血液学检查，血清中γ球蛋白增高，血小板减少，病貂的血氮、血清总氮、麝香草酚浓度、谷草转氨酶等显著增高，而血清钙、白蛋白及球蛋白降低[7]。

1.2 病理变化

特征性的病理学变化主要发生在骨髓、脾、肝和肾部位，尤以肾脏变化最为显著。临床解剖病例中可见肾肿大、充血，呈红色后又转变为灰褐色或淡黄褐色。肾表面有斑点状出血灶，高低不平，肾小球的基膜模糊不清，出现萎缩。慢性病例肾略肿，呈灰黄色，包膜难于剥离，肝、脾、淋巴结肿胀，肝呈土黄色；胸腺体积缩小。肾脏隆起部为土黄色颗粒、暗淡；皮质切面为乳白色小点；浆细胞异常增殖是其组织学的特征性变化，尤其是在脾脏、肾脏、肝脏及淋巴结的血管周围发生明显浆细胞浸润。在浆细胞中出现许多圆形的Russe小体(浆细胞胞质粗面内质网中由于免疫球蛋白堆积出现的、HE染色呈红染、圆形的玻璃样物质)，小体可能由免疫球蛋白组成。在肾小管、肾盂、膀胱、胆管上皮细胞及神经细胞内，有时也可见到小体[8]。

1.3 血清学诊断

1.3.1 血清电泳 该方法是根据阿留申病血清γ球蛋白增高的事实建立的，经实验证实与器官病变符合率高达90%以上，但由于操作复杂并且存在非特异性，至今尚未被生产所采用。

1.3.2 IAT检测 1962年Henson等[9]最先用碘凝集试验(IAT)进行水貂阿留申病(AD)的诊断。该方法是根据病貂血清中γ球蛋白增多,遇到碘试剂发生凝集反应的结果建立的。通常水貂在感染后25～50d即出现碘凝集阳性反应，慢性和隐性感染貂的阳性反应可持续几个月，最长的达1年以上。在急性病例中，往往呈阴性反应，早期出现死亡。我国的实践表明，每年采用IAT法进行定期的群体检疫，并且淘汰阳性貂，能有效控制疫病的蔓延和减少经济的损失，但该法不是特异性方法，凡是能引起血清C-球蛋白增高的各种疾病(如结核病、肺病、肾病等)都有误诊为阿留申病的可能，因此始终未能在国内普及[10]。

1.3.3 间接免疫荧光试验 l969年应用该方法检测AD，人工感染水貂9d后检出阿留申病血清抗体，但由于该方法的复杂性，所以尚未用于实践。

1.3.4 补体结合试验 1971年应用该法检测AD，在人工感染水貂20d后可在感染貂血清中检出补体结合抗体。但由于该方法操作过于复杂，因此尚未用于生产。

1.3.5 对流免疫电泳(CIEP) 1972～1974年Cho等[11]在加拿大首次应用对流免疫电泳方法(CIEP)诊断AD。该方法是利用被检水貂血清中抗体和从病貂组织中提取的特异性阿留申病毒抗原在电场作用下进行反应，在缓冲液中抗原由阴极向阳极迁移，而抗体则反向运动，在琼脂凝胶中抗原和抗体结合成清晰的灰白色沉淀线。此法在特异性和敏感性上均超过以往任何方法，且简便易行[12]，很快被加拿大、丹麦、美国和前苏联等国广泛采用，成为世界上公认的检测方法，我国于80年代初已全面掌握此技术。1990年吴威等[13]应用阿留申CIEP左细胞抗原检疫水貂进行AD诊断，证明左细胞抗原已达到美国细胞抗原的标准，与美国脏器抗原等的对比试验证明，符合率达到100%。此法在我国现场检疫中仍被广泛采用[14]。

1.3.6 淋巴细胞酯酶标记 林学岷等[15]采用ANHE染色法对健康貂和患病貂做了T、B淋巴细胞的测定试验。结果表明，AD水貂的T、B淋巴细胞与健康水貂的T、B淋巴细胞值差异明显，T淋巴细胞数量明显降低。据B.Aasted等[16]报道，B淋巴细胞呈ADV的最初靶细胞，使ADV复制进入转化阶段，致使感染的B淋巴细胞大量分化和增殖。因此，淋巴细胞酯酶标记可作为水貂的ADV早期诊断的可靠方法。

1.3.7 酶标斑点纸条法 该方法于1990年刘润珍等[17]提出。其原理是：根据有些酶类有高度特异性和强大的催化性的两种属性，在不破坏免疫球蛋白活性和酶活性的前提下，用过碘酸钠化学交联法，将酶分子联结到水貂ADV的免疫球蛋白分子上。这种比较稳定的酶结合物就可以与底物(3，3-二氨联苯二胺)作用生成肉眼可见的结果。阳性为褐色，阴性为无色。此法是一种新发展起来的免疫学新技术。

1.3.8 PPA-ELISA 1993吴威等[18]用水貂阿留申病毒G株(ADV-G)感染CRFK细胞，建立了检测水貂阿留申病毒抗体的PPA-ELISA方法。这种方法有较高的敏感性，但由于操作复杂而未用于实践。

1.3.9 免疫复合物(CIC)检测 根据水貂阿留申病的抗原抗体复合物测定结果，1997年赵元楷等[19]建立应用聚乙二醇沉淀比浊法检测阿留申血清中免疫复合物的新方法，并应用于生产实践当中。

1.4 分子生物学诊断

1.4.1 聚合酶链式反应(PCR) PCR技术是利用特异性的引物对靶DNA进行体外扩增的一种方法，这种技术从理论上可对极微量(最少可为一个核酸拷贝)的靶DNA进行扩增，其病毒检测的特异性和准确性远超过CIEP方法。由于很难获得血清样品及可能存在的其它一些干扰因素，在实验室诊断中不能使用CIEP进行ADV抗体检测，但PCR方法可以完成这一检测工作[20]。由于PCR的检测成本较高及各种因素的限制，若用于ADV感染情况检测的样本数不够大，那么检测的结果并不一定能够十分准确地反映一个地区养殖水貂ADV感染的实际情况，这种不准确的数据仅可以对国内水貂ADV感染情况的严重性给以一定的参考[21]。

1.4.2 基因检测芯片 基因检测芯片是在现有的探针反相杂交技术的基础上，融合了核酸分子碱基互补配对的原则和基因芯片的基本原理，制作成的。结果表明，基因芯片的检出率比ELISA方法高17%。该方法有很多的优越性，其敏感性高且不需要制备新鲜血清；可在机体产生抗体之前及早准确地检测出病原，这对预防和控制水貂阿留申病疫情的蔓延十分有利；由于在每份检测样品中都设立了阴性对照和阳性对照，可有效地避免PCR被污染。因此，基因芯片方法成为鉴别水貂阿留申病的一种新途径[22]。

2 防治

该病暂无有效的疫苗，因此以预防为主。

2.1 加强水貂管理

2.1.1 日粮管理 水貂用动物饲料来源不清或贮存不当，极易腐败变质，这样会造成水貂拒食或食入后造成下痢、流产、死胎、烂胎和大批死亡等严重后果。日粮搭配不合理，营养不全，易引起食欲不振、拒食及代谢病等疾病。因此，必须根据水貂的消化特点，在水貂不同的生物学时期，为其合理提供各种优质饲料，尤其要注意日粮中蛋白质的比重。一定要保证饲料营养全价、新鲜，不喂变质料，饮水要清洁。

2.1.2 貂舍管理 保持貂舍的干净清洁可以有效地降低发病率。当天气炎热，舍内潮湿时，各种微生物便容易滋生。所以必须搞好产窝内的卫生，勤换垫草。要及时清除粪便，湿草，剩饲料等污物。

2.1.3 环境控制 （1）适宜光照，提供适宜的光照环境不仅可以提高水貂毛皮质量还可以增强水貂对疾病的抵抗力。（2）温度，貂舍保暖不好，如果遇到恶劣天气，舍内温度过低，这会导致发病率升高，尤其是仔貂。

2.2 完善兽医卫生防疫制度

（1）对新引进的貂进行严格的检查，至少观察3周以上或经过必要的检疫，确认健康方可进行混群饲养。（2）从场外购入饲料时，必须严格检疫。必要时经无害化处理后再饲喂。（3）在貂场主要道路和饲料加工室、库房门口设置消毒槽。（4）尽量避免外人参观，必要时参观人员需经严格消毒后方可入场。（5）貂场每季度至少消毒1次。仔貂分窝前应清扫旧笼舍。所用器具及环境，都要经过严格的消毒。饲料加工室用具、食盆等可每周煮沸消毒1次。（6）严防其他动物闯入场内，病貂尸体必须深埋、焚毁，作无害化处理。（7）平时要保持笼舍干净，无积粪，地面清洁干燥，每栋貂舍的饲养用具必须固定使用，不可随意调换。建立定期检疫隔离和淘汰制度是净化貂群，消灭阿留申病的最好途径[23]。

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