肺炎支原体药敏检测培养与胶体金法联合应用的临床价值

王 军，王 艳，孙 云，李 磊

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肺炎支原体药敏检测培养与胶体金法联合应用的临床价值

王 军，王 艳，孙 云，李 磊

目的 对比肺炎支原体(MP)药敏检测培养法与胶体金法(GIA)在MP感染儿童检测中的差异，探讨其对早期诊断的价值。方法 对2 000例MP药敏检测培养、GIA检测结果及治疗效果进行比较。结果 MP药敏检测培养阳性率(33.6%)较GIA(23.4%)高(P<0.05)。MP药敏检测培养+GIA灵敏度85.21%、特异度99.84%、阳性似然比532.56%、阳性预测值99.54%、阴性预测值94.2%、一致率95.54%及正确指数0.851均高于单一检测，同时阴性似然比0.15% 低于单一检测。联合检测组10 d临床治愈率、单药治疗有效率较GIA组高(P<0.05)，不良事件发生率较GIA组低(P<0.05)。结论 两种方法联合检测MP更加灵敏、准确，是诊断MP感染的极好指标，其联合检测的应用明显缩短了病程，减少了广谱抗生素使用及不良事件的发生，改善了预后。

肺炎支原体；支原体药敏培养；胶体金法；临床价值

肺炎支原体(MP)分布广泛，主要由呼吸道飞沫传播，有MP感染非流行年和流行年之别，呈现季节高峰(冬季为多)及年龄分布(学龄儿童为多)等特征，平时散发，在3～7年地区性流行一次[1]。MP感染偶可出现暴发流行，超过50%的易感人群被感染，多无症状或仅有轻度临床症状，流行期内可有高达40%及以上的社区获得性肺炎(CAP)由MP感染所致[2]。近年来婴幼儿及儿童感染发病率呈逐年递增趋势，并可引起多系统损害。MP感染性肺炎的检测方向尚无明确的目标。本文采用MP药敏检测培养法与胶体法(GIA)对我院400例下呼吸道感染患儿进行联合检测，并对检测结果进行简要分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2012年8月-2015年11月在我院普儿科住院治疗的下呼吸道感染患儿，符合MP感染症状、体征，起病至入院时间平均3 d(1～5 d)，共5 509例。在其中采用分层(就诊年份及患儿年龄)随机抽样法抽取2 000例，3月龄～12岁，中位年龄4.87岁，于入院当天采集咽喉部分泌物行MP药敏检测培养，给予大环内酯类(MP药敏检测培养阳性)或其他类(MP药敏检测培养阴性)药物治疗，并于病程第7～10天对MP药敏检测培养阳性的患儿采集静脉血行GIA检测；检测阳性者继续大环内酯类抗生素治疗4～6周，阴性且前期大环内酯类治疗有效者继续治疗4～6周，阴性且前期大环内酯类治疗无效者停用，给予其他药物治疗至痊愈。对MP药敏检测培养阴性的患儿，于病程第7～10天行GIA检测，阳性者给予大环内酯类抗生素治疗4～6周，阴性者排除MP感染，继续其他类药物治疗直至痊愈。采用上述抽样法抽取2 000例，年龄3月龄～12岁，中位年龄4.6岁作为对照组。入院后未行MP药敏检测培养法检测MP，直接给予头孢类/青霉素类抗生素治疗，效果欠佳者，于病程7～10 d行GIA检测，阳性者换用或联合使用大环内酯类抗生素治疗至痊愈。

1.2 MP肺炎诊断标准：①持续剧烈咳嗽，X线所见远较体征为显著；②白细胞数大多正常或稍增高，血沉多增快，Commbs试验阳性；③青、链霉素及磺胺药无效；④血清冷凝集素(属IgM)大多滴度上升至1∶32或更高，阳性率50%～75%，病情越重阳性率越高；⑤.血清特异性抗体测定阳性等[1]。

1.3 不良事件：除呼吸系统外的其他系统损害，如Stevens-Johnson综合征、溶血性贫血、肝功能损害、弥散性血管内凝血(DIC)、神经系统损害及心血管系统损害等。

1.4 方法：MP药敏检测培养，MP药敏检测培养基由陕西瑞凯生物科技有限公司生产提供。无菌采集患儿咽拭子标本，置37.0 ℃孵育箱中培养24 h观察结果，培养基颜色由原来的红色变成黄色判别为阳性，培养基颜色保持不变为阴性。GIA试剂盒由潍坊市康华生物技术有限公司生产提供。采集患儿静脉血2～3 mL于试管内(未抗凝处理)，置于37.0 ℃水浴箱中孵育15～20 min，离心3 000 r/min，5～15 min，分离血清(有溶血、黄疸、高脂血的血清标本均为不合格标本)，按使用说明书严格操作。反应板孔C端及T端均现红色圆斑，即MP抗体阳性；反应板孔C端现红色圆斑，而T端不现则为MP抗体阴性；C端或两端均不现红色圆斑则提示试剂盒失效。

1.5 检测指标：评价真实性的指标，包括灵敏度(Sen)、特异度(Spe) 、阳性似然比(+LR)、阴性似然比(-LR)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、正确指数及一致率共8项。

1.6 统计学方法：采用SPSS 18.0统计软件，计数资料的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测结果比较：2 000例患儿MP药敏检测培养阳性率33.6%(672/2 000)，GIA检测阳性率23.4%(468/2 000)。MP药敏检测培养的阳性率高于GIA，差异有统计学意义(χ2=51.06，P<0.05)，见表1。

表1 两种检验方法检验结果的比较[n(%)]

2.2 两种MP检测方法的检测结果评价比较：MP药敏检测培养优于GIA，联合检测优于单一检测，且其串联实验的灵敏度63.25%、特异度99.85%，并联实验的灵敏度89.02%、特异度92.56%，见表2。

表2 血清学检测方法评价指标的比较(%)

2.3 治疗结果：MP药敏检测培养联合GIA检测诊断支原体感染患儿434例，大环内酯类抗生素治疗4～6周治愈427例(98.4%)，联合其他类抗生素治愈7例(1.6%)，10 d临床治愈408例(94.0%)，不良事件发生1例(0.2%)。对照组资料采用GIA法诊断MP感染患儿750例，大环内酯类抗生素治疗4～6周治愈232例(30.9%)，联合其他类抗生素治愈87例(11.6%)，10 d临床治愈411例(62.0%)，不良事件发生47例(6.3%)。联合检测组治疗效果优于GIA组，单药治疗有效率较GIA组高，不良事件发生率较GIA组低，见表3。

表3 2组治疗结果的比较[n(%)]

3 讨论

MP为无细胞壁的原核生物，是引起社区获得性肺炎的主要病原体[3-5]，同时也是原发性非典型肺炎与其他呼吸道感染的共同病原体[6-7]，它可以引起一系列呼吸道症状，如阵发性刺激性咳嗽，咽喉痛，痰液黏稠与(或)脓痰和各种并发症，如支气管哮喘、急性呼吸窘迫综合征、格林-巴利综合征、多发性关节炎、冠状动脉疾病、心肌炎、心包炎、脑膜炎、关节炎、肾炎等[8-10]，以此，早期灵敏、特异的检测诊断尤为重要。目前常见检测MP的几种方法，包括药敏培养、血清学检测及实时荧光定量PCR技术[11-13]。陆权[14]等的研究结果显示，MP感染是继细菌、病毒之后儿童呼吸道感染的又一重要致病原，在儿童中的感染率为18.5%[5]。MP-IgM在患者感染MP后3 d升高，病后2周消失76.5%[15]，因其在较长时间内均可检出，故MP-IgM的血清学检验较为常用。本检测结果显示，呼吸道感染患儿MP药敏检测培养阳性检出率为33.6%，较宋世军等[16]的研究检出率43.6%低；GIA检测的阳性检出率为23.4%，较国内研究者[17]的研究检出率25.8%低，考虑结果受样本采集地区自然(气候、地理等)及社会(卫生习惯、医疗卫生状况)因素等多种因素的影响。但无论如何，如此高的感染率应引起重视。

MP感染在临床较常见，对2 000例符合支原体感染相关临床特点的患儿进行MP药敏检测培养和GIA联合检测，结果显示MP药敏检测培养的阳性率高于GIA；评价真实性的指标对比表明，联合试验(检测)Sen、Spe 、+ LR、PPV、NPV、一致率及正确指数均高于MP药敏检测培养及GIA单一检测，同时-LR低于单一检测。联合检测优于单一检测，MP药敏检测培养优于GIA，串联试验进一步提高了检查的特异度(99.85%)，并联试验提高了敏感度(89.02%)，从而增加了收益(收获量)，使得更多的患者在早期得到明确诊断；及时给予大环内酯类抗生素单药治疗4～6周，治愈率(98.4%)较GIA组(30.9%)高，不良事件发生率(0.2%)较GIA组(6.3%)低。因此，我们认为MP药敏检测培养与GIA联合应用明显缩短病程，减少了抗生素使用及不良事件的发生，从而改善了预后。MP药敏检测培养与GIA检测联合应用对于MP的检测敏感、快速、特异，对于早期诊断具有明显优势，在临床的优越性高于任意其一，如条件有限可单用MP药敏检测培养或GIA检测，仍可达到较为准确的检测结果。因此，此两者均是MP感染早期诊断的重要手段，且易于广泛推广。

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宁夏银川市妇幼保健院普儿科，宁夏 银川 750001

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2016-08-19 [责任编辑]李 洁