TLR4在晚发型新生儿败血症患儿群体中的表达与监测价值

路芳，邬进辉

(荆门市第二人民医院儿科，湖北 荆门 448000)

TLR4在晚发型新生儿败血症患儿群体中的表达与监测价值

路芳，邬进辉

(荆门市第二人民医院儿科，湖北 荆门 448000)

目的 研究Toll样受体4(TLR4)在晚发型新生儿败血症患儿群体中的表达作用与监测价值。方法回顾性分析2015年1月至2016年2月于我院收治的33例晚发型新生儿败血症患者(观察组)的临床资料，另取同期33例健康体检儿作为对照组。观察组患儿根据感染病原体不同分为革兰氏阳性菌感染组(阳性组20例)，革兰氏阴性菌感染组(阴性组13例)。分别对比三组受检者的TLR4 mRNA含量以及C反应蛋白(CRP)水平，并用Spearman法作TLR4 mRNA与CRP的相关性分析。结果观察组新生儿TLR4 mRNA表达为(1.83±0.25)，明显高于对照组的(0.31±0.08)，差异有统计学意义(P＜0.05)；阳性组新生儿TLR4 mRNA表达为(1.74±0.25)，明显低于阴性组的(1.95± 0.26)，差异有统计学意义(P＜0.05)；阳性组和阴性组CRP水平分别为(53.42±23.11)mg/L及(46.87±18.56)mg/L，均明显高于对照组的(2.79±1.94)mg/L，差异均有统计学意义(P＜0.05)；TLR4 mRNA含量与CPR水平呈显著正相关(r= 0.832，P=0.000)。结论临床中通过监测TLR4有利于早期诊断晚发型新生儿败血症，特别是在诊断革兰阴性菌感染所致的败血症中具有更高的临床诊断价值。

Toll样受体4；晚发型；新生儿败血症；表达；监测

临床上，由于新生儿免疫功能相对不成熟，加上自身多种易感因素的存在，易发生细菌感染，而在细菌感染后因为治疗相对困难，从而可能会导致败血症的发生[1-2]。新生儿败血症具有早期临床表现不典型，病情发展快速的特点，是导致新生儿死亡的重要原因之一[3]。因此，寻找一种具有较高敏感性、特异性的治疗对新生儿败血症进行早期有效诊断具有极其重要的临床意义。鉴于此，本文通过研究TLR4在晚发型新生儿败血症患儿群体中的表达作用与监测价值并进行分析，旨在为临床诊断及治疗提供新型监测指标，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月至2016年2月我院收治的晚发型新生儿败血症33例作为观察组，另取同期33例健康体检儿作为对照组。观察组中男性20例，女性13例；胎龄37～42周，平均(39.3±2.6)周；年龄8～28 d，平均(18.7±3.4)d。对观察组患儿另根据感染病原体不同分为革兰氏阳性菌感染组(阳性组，20例)，革兰氏阴性菌感染组(阴性组，13例)。对照组中男性19例，女性14例；胎龄37～42周，平均(39.4±2.6)周；年龄9～28 d，平均(18.9±3.5)d。两组新生儿在年龄、性别、胎龄等基本资料方面比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经我院医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法[4]所有患儿均于清晨空腹收集2 mL静脉血，随后取0.5 mL进行C反应蛋白(CRP)水平检测，选用迈瑞公司生产的BECKMAN生化仪以及免疫投射比浊法进行。剩余1.5 mL静脉血加入Ficoll分离液(购自上海普飞生物技术有限公司)，应用密度梯度离心法，在3 500 r/min下进行离心20 min，成功分离出外周血单个核细胞，然后加入Trizol(MRI公司生产)提取总RNA，置于-70℃冰箱保存。采用RT-PCR技术检测TLR4 mRNA含量，其中PT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司，具体方法严格按照TaKaRa试剂盒说明书进行操作。

1.3 观察指标 比较三组新生儿的TLR4 mRNA含量和CPR水平，并分析TLR4 mRNA与CRP相关性。

1.4 统计学方法 应用SPSS21.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间两两比较采用t检验，多组间的计量数据比较采用单因素方差分析，应用Spearman法分析相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 观察组与对照组新生儿的TLR4 mRNA含量比较 观察组新生儿的TLR4 mRNA表达水平为(1.83±0.25)，显著高于对照组的(0.31±0.08)，差异有显著统计学意义(t=33.265，P＜0.01)。

2.2 阳性组与阴性组新生儿的TLR4 mRNA含量比较 阳性组新生儿TLR4 mRNA表达水平为(1.74±0.25)，明显低于对照组的(1.95±0.26)，差异有统计学意义(t=2.321，P＜0.05)。

2.3 阳性组、阴性组和对照组新生儿的CRP水平比较 阳性组和阴性组CRP水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 阳性组、阴性组和对照组新生儿的CRP水平比较(mg/L，±s)

表1 阳性组、阴性组和对照组新生儿的CRP水平比较(mg/L，±s)

注：与对照组比较，aP＜0.05。

组别阳性组阴性组对照组CRP 53.42±23.11a46.87±18.56a2.79±1.94例数20 13 33 F值P值12.483 0.000

2.4 TLR4 mRNA与CRP相关性 TLR4 mRNA含量与CPR水平呈显著正相关(r=0.832，P=0.000)。

3 讨 论

新生儿败血症发病早期无典型临床表现，患儿多表现为不哭、不动、嗜睡、反应力较低等，较易增加临床及时诊断的难度。传统的血培养是临床上确诊败血症的金标准，但此法的阳性率较低，且至少在2 d后才能得到结果，通常无法进行早期诊断[5-6]。因此，寻找一种准确而又快速的诊断新生儿败血症的实验室指标成为了临床医师所关注的问题。CRP是目前临床上应用较为广泛的新生儿败血症经典指标之一，可在新生儿发生感染后6 h内迅速增加，48 h内达峰，且高峰值是正常值的100～1 000倍[7]。但其在肿瘤、其他免疫性疾病中亦会迅速升高，因此具有特异性偏低的缺点。此外，有研究报道表明，CPR的表达在革兰氏阳性菌感染与革兰氏阴性菌感染之间无明显差异，这可能会导致我们在临床区分病原菌感染以及抗生素的选择中造成一定困难[8]。

本文通过研究后发现，观察组新生儿TLR4 mRNA含量显著高于对照组。这提示了TLR4在新生儿败血症中具有较高的表达，可能可作为临床早期诊断新生儿败血症的指标之一。分析原因，TLR4属于天然免疫与获得性免疫连接的桥梁，可通过与病原识别模式分子结合，同时经由介导细胞信号转导而使炎症因子释放，从而有效识别病原微生物，并启动相应的炎症应答[9-10]。此外，阳性组新生儿TLR4 mRNA含量显著低于阴性组，且阳性组以及阴性组CRP水平均显著高于对照组。这充分说明了TLR4可作为诊断新生儿败血症的指标[11-12]。究其原因，笔者认为其主要机制可能与TLR4具有识别脂多糖等革兰氏阴性菌细胞壁成分有关，这一结果同时也提示了在对可疑新生儿败血症患儿进行早期检测CRP的同时，测定TLR4水平可作为判断败血症感染的指标，且对革兰氏阴性菌感染的诊断价值更高[13-15]。此外，本文结果还显示了TLR4 mRNA含量与CPR水平呈显著正相关。这也再次证实了在败血症新生儿的检测中，TLR4可作为CRP的补充指标[16]。

综上所述，TLR4可作为临床上早期诊断晚发型新生儿败血症的新指标，特别是对识别革兰阴性菌感染具有更高的价值。临床可通过研究TLR4信号传导途径，进一步探讨是否可通过抑制其活化，从而达到有效控制炎症瀑布反应的发生，最终为临床治疗新生儿败血症带来新的思路以及理论依据。

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Expression and monitoring value of TLR4 in the group of children with late-onset neonatal sepsis.

LU Fang,WU Jin-hui.Department of Pediatrics,Jingmen Second People's Hospital,Jingmen 448000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo study the expression of Toll like receptor 4(TLR4)in children with late-onset neonatal sepsis.MethodsA retrospective analysis was performed in 33 cases of late-onset neonatal septicemia(the observation group)and 33 cases of healthy children(the control group)from January 2015 to February 2016 in our hospital.The children of the observation group were further divided into leather of Gram-positive bacteria infection group(positive group,20 cases)and Gram-negative bacteria infection group(negative group,13 cases)according to different pathogens. The levels of TLR4 mRNA and C reactive protein(CRP)were compared among the three groups,and correlation between TLR4 mRNA and CRP was analyzed with Spearman's rank correlation.ResultsThe TLR4 mRNA levels in the observation group was(1.83±0.25),which was significantly higher than(0.31±0.08)in the control group,P＜0.05.The TLR4 mRNA levels in positive group was(1.74±0.25),significantly lower than(1.95±0.26)in the negative group,P＜0.05.CRP level was(53.42±23.11)mg/L in positive group and(46.87±18.56)mg/L in negative group,which were significantly higher than(2.79±1.94)mg/L in the control group,with statistically significant differences(P＜0.05).TLR4 mRNA and CPR level were positively correlated(r=0.832,P=0.000).ConclusionClinical monitoring of TLR4 is beneficial to the diagnosis of late-onset neonatal sepsis,especially in the diagnosis of sepsis with Gram-negative bacteria infection.

Toll like receptor 4;Late-onset;Neonatal sepsis;Expression;Monitoring

R722.13+1

A

1003—6350（2017）03—0421—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.025

2016-08-24)

湖北省荆门市科技局科技引导计划项目（编号：2009YDS35）

路芳。E-mail：15908660622@139.com