空气中污染物对药品包装材料热原检测影响的探讨

刘兴辰+高静贤+刘茜

摘要：药品包装材料上市前需要做风险管理过程中的评价，评价中包括对其生物学安全性的评定。热原属于生物学评价中的一个重要检测项目。本文以需要高温灭菌处理的几种药品包装材料为样品，对清洗和未清洗的两组样品灭菌后进行兔热原试验以及细菌内毒素试验。结果表明，未清洗样品会对热原产生影响。

关键词：热原；细菌内毒素

1 热原检查法（兔热原法）

1.1实验准备

1.1.1样品来源 ①注射用冷冻干燥用覆聚四氟乙烯乙烯膜氯化丁基橡胶塞，批号：M150331122-78（江苏华兰药用新材料股份有限公司）；②药用合成聚异戊二烯垫片，批号：150353515-16（江苏华兰药用新材料股份有限公司）。

1.1.2动物来源 南京市江宁区青龙山动物繁殖场（许可证号SCXK（苏）2012-0008）、合格证号：201505970、201506377、201506729，颗粒饲料，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供。

1.1.3器具除热原 与供试品接触的所有玻璃器皿置电热干燥箱内250℃干烤30 min（实验前1 d）。

1.1.4实验分组 注射用冷冻干燥用覆聚四氟乙烯乙烯膜氯化丁基橡胶塞（下面简称橡胶塞）、药用合成聚异戊二烯垫片（下面简称垫片）拆开包装，用纯化水清洗后，暴露在空气中（普通环境）3 d。①橡胶塞未再洗；②橡胶塞经纯化水水洗；③垫片未再洗；④垫片经纯化水水洗。

1.1.5浸提介质（浸提液） 氯化钠注射液（安徽双鹤药业有限责任公司），规格：500 ml，批号：150129 5T。

1.1.6供试品浸提液制作方法 橡胶塞：将供试品用纯化水冲洗干净后，用滤纸吸干，置浸提容器内。供试品置压力蒸汽灭菌器内，115℃灭菌30 min后，按0.2 g/ml比例加入浸提液，使液体浸没供试品。浸提条件37℃，24 h。

垫片：将供试品用纯化水冲洗干净后，用滤纸吸干，切成0.5 mm×3 cm条状，置浸提容器内。供试品置压力蒸汽灭菌器内，115℃灭菌30 min后，按规定量加入浸提液，使液体浸没供试品。浸提条件37℃，24 h。

1.1.7供试用家兔及实验室环境 供试用的家兔应健康合格，体重1.7 kg以上，雌兔应无孕。预测体温前7 d即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。家兔之前均未曾用于热原检查，经过预测体温，挑选合格供试用家兔。在热原检查前2 d内，供试用家兔处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差1℃以内，温度均在（21±1）℃。

1.2实验方法 取适用的家兔3只，测定其正常体温符合要求后15 min以内，自耳静脉缓缓注入温热至约38℃的供试品溶液，注射剂量为10 ml//kg。然后每隔30 min按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔的升高温度（℃）。如3只家兔中有1只温度升高0.6℃或高于0.6℃，或3只家兔体温升高的总和达1.3℃或高于1.3℃，应另取5只家兔复试。检查方法同上。

1.3结果 在初试的3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或低于3.5℃，均判定供试品的热原检查符合规定。在初试的3只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或高于0.6℃的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃，均判定供试品的热原检查不符合规定。当家兔升温为负值时，均以0计。

2 细菌内毒素检查法

2.1实验准备

2.1.1样品来源 聚丙烯输液瓶（由江苏苏中药业集团股份有限公司提供），规格均为250 ml，批号为14081424、14081518、14081609。

2.1.2实验仪器 混和器（天津药典标准仪器厂）ZH-2，细菌内毒素凝胶法测定仪（天津市天大天发科技有限公司）ET-96，洁净工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）SW-CJ-2F，隔水式电热恒温培养箱（天津市泰斯特仪器有限公司）规格：GH6000，电热恒温鼓风干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）DHG-143BS-III。

2.1.3器具除热原 与供试品接触的所有玻璃器皿置电热干燥箱内250℃干烤30 mim（实验前1 d）。

2.1.4供试品浸提液制作方法：取输液容器剪成0.5 cm×3 cm小条，按内表面积（cm2）与水（6：1）混合，经（121±2）℃，60 min灭菌，放冷，备用，作为试验液，并用同批水作为空白液。

2.1.5供试品细菌内毒限值 每1 ml供试液中含内毒素不得过0.25EU。

2.2实验方法 凝胶法-通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。

按表1制备溶液A、B、C和D。使用稀释倍数不超过MVD（确定最大有效稀释倍数）并且已经排除干扰的供試品溶液来制备溶液A和B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。

2.3实验结果，见图1。

2.4结果判断 保温（60±2）min后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定，否则判定供试品不符合规定。

3 讨论

常用的三种热原检测方法，限于设备、试剂等条件，我们只能进行其中两种-热原检查法（兔热原法）、细菌内毒素检测法进行热原检测。

虽然我们不能说未清洗就灭菌的热原检测就一定不合格，一定会给使用者带来各种热原反应的后果，但祸生于懈慢，药品包装材料的好坏直接关系到使用者的生命安危，防微杜渐，我们需要做的更多。

参考文献：

[1]周德庆.微生物学教程[M].第3版.北京：高等教育出版社，2011：241.

[2]陈延京，张林，黄金星，等.复合膜过滤法采样检测空气中的微生物[J].中国环境监测，2005，21（4）：14-17.

[3]郭丽霞，石晓霞.对注射剂中热原污染的探讨[J].海峡药学，2005，17 （5）：27-29.

编辑/蔡睿琳