Periostin在糖尿病乳鼠心肌组织中表达的改变及缬沙坦对其影响探讨

2017-03-09张艳菊戴红艳邢明清

临床医药文献杂志(电子版) 2017年13期

关键词：乳鼠缬沙坦染色

张艳菊，管军，戴红艳，邢明清

（青岛大学医学院，山东青岛 266000）

・实验研究・

Periostin在糖尿病乳鼠心肌组织中表达的改变及缬沙坦对其影响探讨

张艳菊，管军，戴红艳，邢明清

（青岛大学医学院，山东青岛 266000）

目的对Periostin在糖尿病乳鼠心肌组织中表达的改变及缬沙坦对其所产生的影响进行分析。方法建立糖尿病性心肌病乳鼠模型，将该模型中的样本分为缬沙坦干预组和未治疗组两组，另选Wistar乳鼠作为对照组，稳重心脏标本，并通常Masson三色染色以及HE染色对缬沙坦干预组、DCM模型组以及对照组的心肌细胞状态。结果相比于对照组，DCM模型组细胞核大小不规则、心肌细胞排列紊乱，P＜0．05差异有统计学意义。结论Periostin可能在糖尿病心肌病的心肌间质纤维化与心脏重构方面发挥作用。

缬沙坦；乳鼠心肌组织；Periostin

1 资料与方法

1.1 实验动物

选取60只健康Wistar乳鼠，体重在180 g～220 g之间。

1.2 仪器设备

本次实验所选取的设备包含低温高速离心机、微量移液器、病理切片机、玻片烘干机、架盘药物天平、转移电泳槽以及转移电泳仪等。

1.3 实验试剂

1.3.1 动物模型所用试剂

本次实验所选取的实验试剂包含链脲佐菌素粉剂、柠檬酸缓冲液以及缬沙坦胶囊等。

1.3.2 苏木精-伊红

本次实验所配置的Harris苏木素溶液中包含中性树胶、100%乙醇、90%乙醇以及70%乙醇等。

1.3.3 Masson三色染色试剂

本次实验所需要的Masson三色染色剂包含醋酸水溶液、苯胺蓝染色液、氨水水溶液、三氯化铁水溶液等。

1.4 实验方法

1.4.1 构建DCM乳鼠模型

本次实验所选取的60只研究样本均以标准乳鼠饲料进行喂养，将温度与温度水平调整至适宜的范围内。经过1周的喂养后，将其分为两组，将10只对照组以及50只DCM模型组，经过12 h的禁食处理后一次性腹腔注射STZ溶液60 mg/kg，对照且注射体积相同的柠檬酸缓冲液。乳鼠糖尿病依照以下标准进行确诊：随机血糖达到16.7 mmol/L以上，空腹血糖达到11.1 mmol／L以上。41只造模成功的实验样本则纳入药物干预实验范围，将其中的20只标记为缬沙坦干预组，另外21只标记为DCM模型组，对其进行灌胃处理。以周为时间单位测量两组样本的血糖水平以及体质量，对其尿量变化、进食量以及生长情况等方面进行观察。

1.4.2 取材及处理

在实验研究开展至第16周后对全部研究样本进行麻醉处理，称重样本心脏，再剪掉左右心房，完成冲洗处理后再将水分吸干，测量左心室重量，计算左心系数比，根据计算结果确定心室肥厚水平；利用浓度为10%的甲醛溶液将样本浸泡起来，将剩余的样本材料冷藏起来备用。

1.4.3 病理学检测

取出左心室标本，对其进行脱水处理，用石蜡包块后再切成片状，完成烘干处理后备用。用无水乙醇将切片漂洗5分钟，依次利用浓度为95%，80%，70%的乙醇溶液分别浸泡3分钟，再利用蒸馏水以及PBS缓冲液进行最后的漂洗。

利用Masson三色染色和苏木素-伊红染色对切片样本进行染色处理。

利用光镜对心肌细胞的形态分布、胶原含量以及心肌细胞进行观察。

1.4.4 免疫组化检测

利用二甲苯溶液对石蜡切片进行脱蜡处理；消除样本过氧化物酶活性，将样本于氧化氢酶溶液浸泡，再利用蒸馏水对其进行冲洗；滴加橼酸钠溶液，加热三分钟后再自然冷却，再浸泡于PBS缓冲液中反复3次，每次3 min，进行抗原修复处理；于切片上滴加胎牛血清，孵育20 min，并将其余溶甩出；再将材料进行二甲苯透明以及梯度酒精脱水处理，完成树胶封片处理后再对其进行观察。