短时受精提前脱颗粒细胞对胚胎质量及临床结局的影响

曾伟荣

【摘要】 目的：探討短时受精提前脱颗粒细胞对体外受精胚胎质量及临床结局的影响。方法：回顾性分析2015年1月-12月就诊于本中心的1693例患者资料，将这些患者分为短时受精提前脱颗粒细胞后发现第二极体卵子行过夜受精组107例及传统过夜受精组1147例，观察早期脱颗粒细胞对正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率的影响。再将短时受精提前脱颗粒细胞后未发现第二极体卵子行ICSI组13例与传统的ICSI组426例，比较两组的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率。结果：短时受精提前脱颗粒细胞发现第二极体卵子行过夜受精组与传统过夜受精组之间的正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率比较差异均无统计学意义（P<0.05）。并且短时受精提前脱颗粒细胞后未发现第二极体卵子行ICSI组的正常受精率、优质胚胎率、临床妊娠率与传统ICSI组相比，差异均无统计学意义（P<0.05）。结论：短时受精提前脱颗粒细胞与常规过夜IVF组相比并没有提高多PN的受精率，而与传统ICSI组相比多PN受精率没有差异，也没有降低胚胎的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。短时受精提前脱颗粒细胞可获得与常规IVF和ICSI相似的临床结局，短时受精通过提前观察第二极体的排出来判断是否受精，可预防出现传统过夜IVF低受精和完全不受精，降低ICSI的使用率。

【关键词】 短时受精； 提前脱颗粒细胞； 多PN受精率； 临床妊娠率

Short-term Fertilization Degranulation Cell of the Embryo Quality and Clinical Outcome in Advance/ZENG Wei-rong.//Medical Innovation of China，2016，13（31）：120-123

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of early cell degranulation in vitro fertilization and embryo quality and clinical outcomes after short time IVF.Method：1693 patients were retrospectively analyzed from January to December 2015 in the center.They were divided into short-term fertilization early degranulation cell found after the second polar body of eggs for overnight fertilization group of 107 cases and traditional overnight fertilization group of 1147 cases，the rate of early cell degranulation of normal fertilization effect，1PN，3PN， cleavage，high-quality embryo and clinical pregnancy of two groups were observed.The early short time insemination degranulation cells were found after the second polar body for eggs ICSI group of 13 cases and traditional ICSI group of 426 cases，the rate of early cell degranulation of normal fertilization effect，1PN，3PN，cleavage，high-quality embryo and clinical pregnancy of two groups were compared.Result：In vitro fertilization degranulation cell found in advance of the second polar body of eggs for overnight fertilization compared to the normal group and the traditional overnight fertilization rate between the groups，high quality embryo rate，clinical pregnancy rate showed no significant difference （P<0.05）.And in vitro fertilization group degranulation cells were found after the second polar body of eggs for normal fertilization recovery rate of ICSI group， high quality embryo rate， clinical pregnancy rate compared with ICSI group，there were no significant differences （P<0.05）.Conclusion：The early embryonic cell degranulation do not improve the fertilization rate of more than 2PN to compare with the conventional overnight IVF group.Embryos of fertilization rate， cleavage rate，high quality embryo rate and clinical pregnancy rate not significantly reduced compare with the conventional ICSI group.The early embryonic cell can achieve similar clinical pregnancy rate compared to conventional IVF and ICSI cycles，with second polar body detection.It can preventing low fertilization IVF and no fertilization，reduce the percentage of ICSI.

【Key words】 Short time IVF； Early embryonic cell degranulation； PN fertilization rate； Clinical pregnancy rate

First-authors address：The Reproductive Center of Zhuhai Maternal and Child Health Hospital，Zhuhai 519000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.31.035

随着辅助生殖技术的不断发展，体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的临床治疗方案和实验室技术不断完善，但仍然无法避免IVF低受精率和完全受精失败情况发生，因此增加了患者经济和心理上的负担，亦增加了临床医生的压力。短时受精通过提前脱颗粒细胞观察第二极体的排出情况来判断受精与否，并决定是否需要进行早期补救（Intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技术即卵胞浆内单精子注射技术，以此避免低受精率和完全受精失败的几率。但提前脱颗粒细胞对于胚胎受精、胚胎质量、临床结局方面的影响仍然存在争议。因此本文回顾性分析2015年1-12月就诊于本中心的1693例患者资料，研究提前脱颗粒细胞与传统受精相比是否对胚胎质量和临床结局有影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾分析2015年1-12月就诊于本中心的1693例患者资料，将这些患者分为短时受精提前脱颗粒细胞发现第二极体卵子行过夜受精组107例及传统过夜受精组1147例。观察早期脱颗粒细胞对正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率的影响。另外，再将短时受精提前脱颗粒细胞未发现第二极体行ICSI组13例与传统ICSI组426例，比较两组的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率。四组患者的年龄、不孕年限比较差异均无统计学意义（P>0.05），短时受精提前脱颗粒细胞未发现第二极体行ICSI组的获卵数高于其他三组，比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

1.2 方法 临床方案：根据患者的年龄、卵巢的储备功能等进行个性化COH。（1）长方案为降调节于排卵后7 d左右开始短效GnRH-a 0.05 mg或0.1 mg/d皮下注射，或长效GnRH-a 1.500～1.875 mg肌肉注射；14 d后抽血查激素，降调标准为E2<50 pg/mL，LH<5 miu/mL，B超子宫内膜<5 mm。（2）短方案于月经第3天起应用促排卵药物，一般情况下30岁以下Gn启动剂量150 IU，30～35岁225 IU，35岁以上300 IU，用药4 d后阴道超声监测卵泡发育情况，适当调整药物用量。精液处理：手淫法取精至无菌杯，根据精子当天情况用密度梯度离心法（ISOlate）洗涤精子，然后调节精子密度为4×106/mL斜置于培养箱中备用。（4）常规IVF受精取卵后3～4 h将精子放入卵子培养皿受精微滴内，加精后16～20 h观察原核。（5）ICSI受精：取卵后4～6 h对MII卵子行ICSI注射。（6）短时受精在加精后4～6 h脱颗粒细胞，于倒置显微镜下观察，有明显第二极体的卵子可认为已受精，如果未观察到第二极体的卵子，则行早期补救ICSI术。（7）胚胎及囊胚评分、胚胎移植、冷冻胚胎的按常规方法选择。（8）妊娠判定：胚胎移植后14D查尿或血HCG，若阳性则在4～6周行B超检查，见孕囊判断为临床妊娠。

1.3 观察指标 （1）短时受精与常规IVF计算方式：正常受精率=该方法2PN的总和/该方法成熟与未成熟卵子总和×100%；优质胚胎率=该方法所获得的优质胚胎数/该方法2PN的总和×100%；临床妊娠率=取得临床妊娠数总和/该方法的移植周期总数×100%。（2）短时受精行ICSI注射与传统ICSI计算方式：正常受精率=该方法2PN的总和/该方法成熟卵子MII总和×100%；优质胚胎率=该方法所获得的优质胚胎数/该方法2PN的总和×100%；临床妊娠率=取得临床妊娠数总和/该方法的移植周期总数×100%。

1.4 统计学处理 使用SPASS 19.0统计软件进行处理，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

四组的正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率方面比较差异均无统计学意义（P>0.05），见表2、3。

3 讨论

在辅助生殖技术中，受精是极为重要的环节。它经历精子的获能、精子的顶体反应、精子与透明带的结合、卵母细胞的激活、雌雄原核的形成等极其复杂的过程，受精中的任何一个环节出现问题均可能导致体外受精（IVF）低受精率和完全受精失败。此类患者在受精后16～18 h后再进行补救ICSI，所得的临床结局并不理想，因此寻求避免IVF低受精率和完全受精失败的方法尤其重要。

2003年，Chen等[1]国外学者首次提出在受精6 h后脱颗粒细胞后观察是否有第二极体的排出，对没有第二极体排出的卵子行补救ICSI，并得到良好的受精率和妊娠率，这个方法使得卵子在老化前进行及时的ICSI，是预防低受精率和受精失败的有效方法[2]，也可避免很多不必要的ICSI。有报道称，短时受精可以提高胚胎质量和妊娠率[3-4]。但也有学者提出，提前脱颗粒细胞可能会可能使得卵子的透明带受到损伤，脱离了卵细胞周围的微环境，从而导致3PN率的增加。而且外界的过早的刺激，提前去除颗粒细胞对于已受精胚胎的安全性及遗传后代方面尚不确定，观察提前脱颗粒细胞对于胚胎质量和临床结局的影响显得尤为重要[5]。

本文结果显示：短时受精组和过夜受精组在正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。提前脱颗粒细胞优势在于减少了胚胎在颗粒细胞和精子代谢产生的活性氧化物（ROS）的时间，Gianaroli等[6]研究表明，长时间的共培养会产生大量ROS，从而使得胚胎透明带硬化，损害胚胎的潜能。还有国内学者认为，精子在体外3 h就已经有78.3%完成与卵母细胞结合并且相互激活[7-8]，刺激卵母细胞排出第二极体，到了6 h第二極体的排出率为92.9%[9]，提前脱颗粒细胞将胚胎放入新的培养环境，更符合胚胎受精后的微环境。而多PN的受精更可能是由于卵子方面的原因所引起，比如卵子的不成熟、卵子的老化、透明带的异常等。短时受精组脱颗粒细胞后未发现双极体卵子行ICSI组与传统的ICSI组在正常受精率、1PN率、3PN率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率比较也没有统计学的差异，短时受精早期补救ICSI组虽然3PN率高过传统ICSI组，但比较差异并无统计学意义（P>0.05），其3PN的形成可能是注射了已经受精的卵子，此3PN可通过延长第二极体的观察时间，透明带上的粘附和穿透精子加以判断，减少此类3PN的发生。辛才林等[10]需要根据脱颗粒细胞后卵母细胞的状态、卵龄、失败原因和患者意见等综合考虑是否进行补救ICSI。

综上所述，短时受精提前脱颗粒细胞与常规过夜IVF组相比并没有提高多PN的受精率，而与传统ICSI组相比多PN受精率没有差异，也没有降低胚胎的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。短时受精提前脱颗粒细胞可获得与常规IVF和ICSI相似的临床结局，短时受精通过提前观察第二极体的排出来判断是否受精，可预防出现传统过夜IVF低受精和完全不受精，降低ICSI的使用率。

参考文献

[1] Chen C，Kattera S.Rescure ICSI of oocytes that failed to extrude the second polar body 6h post-insemination in conventional IVF[J].Human Reprod，2003，18（18）：2118-2121.

[2]金海霞，孙莹璞，戴善军，等.短时受精与长时受精对体外受精及临床妊娠结局的影响[J].现代妇产科进展，2012，21（2）：133-135.

[3]汪翔，方丛，贾磊.短时受精后早剥卵对胚胎质量及妊娠结局的影响[J].中山大学学报（医学科学版），2014，35（3）：391-395.

[4]刁英，杨智敏，谭兵兵，等.短时受精在体外受精-胚胎移植治疗周期中的应用价值[J].中国妇幼保健，2010，25（15）：2104-2106.

[5]马学工.常规体外受精短时受精后6 h行卵胞浆内精子注射治疗受精失败34例[J].实用医学杂志，2010，26（6）：986-987.

[6] Gianaroli L，Cristina Magli M，Ferraretti A P，et al.Reducing the time of sperm-oocyte interaction in human in-vitro fertilization improves the improves the implantation rate[J].Hum Reprod，1996，11（1）：166-171.

[7]韩树标，韩伟，黄国宁，短时受精结合早期补救ICSI技术的临床应用[J].生殖医学杂志，2014，21（3）：211-213.

[8]彭良玉，杨箐，尹太郎，不同脱颗粒细胞时间对体外受精-胚胎移植治疗周期的影响[J].中华临床医师杂志（电子版）2012，6（8）：2224-2225.

[9]黄国宁，孙海翔，体外受精-胚胎移植实验室技术[M].北京：人民衛生出版社，2012：95-115，163-175.

[10]辛才林，唐亮，赵琰，等.常规体外受精失败行补救ICSI治疗试管婴儿成功分娩一例[J].实用临床医学，2009，10（1）：73.

（收稿日期：2016-08-04） （本文编辑：周亚杰）