不同厂家猪瘟疫苗免疫效果比对试验

李安鹏,赵 力,张智鹏,3

(1.汉中市动物卫生监督所,陕西汉中 723000; 2.汉中市动物疾病预防控制中心,陕西汉中 723000; 3.西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌 712100)

不同厂家猪瘟疫苗免疫效果比对试验

李安鹏1,赵 力2,张智鹏2,3

(1.汉中市动物卫生监督所,陕西汉中 723000; 2.汉中市动物疾病预防控制中心,陕西汉中 723000; 3.西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌 712100)

为准确掌握汉中市规模猪场使用量最大的两种猪瘟疫苗在实际应用中的免疫效果，在规模猪场选择4窝体质健康、体重接近的仔猪，随机分成4组，每组10头，分别接种猪瘟脾淋苗和细胞苗，采用IHA 方法检测免疫接种前后抗体效价。结果显示，用标准剂量免疫后，2种疫苗都不能对猪群产生保护作用，用2头份剂量在仔猪30日龄首免，首免后28 d加强免疫，2种疫苗都能对猪群产生很好的保护作用，能满足预防猪瘟疫病的需要，同时猪瘟脾淋苗免疫后刺激机体产生抗体的速度快，可用于紧急免疫接种。广大养殖户可以根据实际情况，科学合理选择使用猪瘟疫苗。

猪瘟；疫苗；免疫效果

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病，主要以急性发病、高稽留热、细小血管壁变性、全身性小点状出血及脾脏边缘梗死为特征[1]。猪瘟给我国养猪业造成了巨大的经济损失，目前仍是养猪生产中首要防控的疫病[2]，世界动物卫生组织(Office International des Epizooties，OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[3]。

在实际调研中发现，部分养殖户在政府免费发放的猪瘟疫苗和经销商宣传的高价疫苗之间不知如何选择，甚至有部分养殖户为了追求高的抗体效价，给1头猪使用4头份～5头份疫苗进行免疫接种，在一定程度上造成了疫苗的浪费和养殖成本的增加。为此，本试验选取了规模养殖场使用量较大的猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞苗进行疫苗的免疫接种试验，比较2种疫苗在实际应用中的免疫效果，为广大养殖户科学合理地选用猪瘟疫苗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用猪 选择基础免疫较好的勉县良种场开展试验研究，选取40头保育仔猪，检测母源抗体合格后于30日龄开始试验，试验猪品种均为杜×长×大商品猪。

1.1.2 试验用疫苗 采用汉中市规模猪场使用量最大的2种猪瘟疫苗进行免疫接种效果对比。分别是政府免费发放的猪瘟脾淋疫苗，由四川某生物制药有限公司生产(以后简称脾淋苗)，每头份脾淋苗不少于组织毒0.01 g，生产批号：2014006-1；另一种是规模场自行采购使用的猪瘟细胞疫苗，由浙江某生物技术有限公司生产(以后简称细胞苗)，每头份猪瘟活病毒含量≥7 500 RID，生产批号：2014005。

1.1.3 试剂 猪瘟正向间接血凝抑制检测试剂盒，中国农业科学院兰州兽医研究所生产，批号2014113005。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 选择4窝体质健康、体重接近的仔猪，随机分成4组，每组10头，具体分组见表1。常规饲养管理，疫苗免疫的其他程序不变(表1)。

1.2.2 免疫注射 4个试验组在30日龄进行首免，首免后28 d进行二免。

1.2.3 样品采集 试验过程中共采血6次，第1次采血在首免当天，主要是监测仔猪的母源抗体情况；后5次采血分别在首免后14、21、28 d和二免后21 d、45 d进行。经前腔静脉逐头采血，按常规方法分离保存血清。

1.2.4 结果判定 采用正向间接血凝试验(indirect hemagglutination test,IHA)检测抗体效价，按农业部标准，正向间接血凝试验(IHA)抗体效价≥1∶32(即51og2)为免疫合格，群体合格率≥70%为合格。

1.2.5 数据处理 采用SPSS软件对试验数据进行统计分析，抗体效价用平均数±标准差表示。

表1 试验分组

2 结果

2.1 检测结果

免疫注射前对各组仔猪的母源抗体水平进行了检测，通过F检验发现，4个试验组仔猪的母源抗体水平差异不显著(P>0.05)，说明4个试验组仔猪的母源抗体水平较一致，对各试验组猪瘟抗体的产生影响不大(表2)。

对4个试验组仔猪免疫注射后不同时间的抗体检测结果进行F检验，发现首免后14、21、28 d，4个组的免疫抗体水平差异不显著(P>0.05)；在二免后21 d，4个组的免疫抗体水平差异显著(P<0.05)，其中脾淋苗A组和脾淋苗B组的抗体水平差异显著(P<0.05)，细胞苗C组和细胞苗D组的免疫抗体水平差异不显著(P>0.05)，脾淋苗B组和细胞苗D组的免疫抗体水平差异不显著(P>0.05)；二免后45 d，4个组的免疫抗体水平差异极显著(P<0.01) ，其中脾淋苗A组和脾淋苗B组的免疫抗体水平差异极显著(P<0.01)，细胞苗C组和细胞苗D组的免疫抗体水平差异极显著(P<0.01)，脾淋苗B组和细胞苗D组的免疫抗体水平差异不显著(P>0.05) (表2)。

表2 各组免疫抗体检测结果

注：同列肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，相同或无肩标表示差异不显著(P>0.05)。

Note:Values with different small letters in same column indicate significant difference(P<0.05),with different capital letters indicate extremely significant difference(P<0.01),and with same letters or no letter indicate no significant difference (P>0.05).

2.2 免疫抗体合格率

2.2.1 同种疫苗对比 免疫抗体检测结果见表3。由表3可知，脾淋苗A组和脾淋苗B组比较，在首免后14、21、28 d，加大免疫剂量的脾淋苗B组免疫抗体合格率均稍高于脾淋苗A组，但都未达到70%的保护标准；在二免后21 d和45 d，脾淋苗B组免疫抗体合格率均为100%，而脾淋苗A组免疫抗体合格率为70%和60%。细胞苗C组和细胞苗D组相比，在首免后14、21、28 d，两组的免疫抗体合格率差异不明显，且均未达到70%的保护标准；在二免后21 d，标准剂量的细胞苗C组免疫抗体合格率为60%，加倍剂量的细胞苗D组免疫抗体合格率为80%，相差20个百分点；二免后45 d，标准剂量的细胞苗C组免疫抗体合格率为50%，加倍剂量的细胞苗D组免疫抗体合格率为90%，相差40个百分点。

2.2.2 不同种疫苗对比 免疫抗体检测结果见表3。脾淋苗A组和细胞苗C组比较，在首免后14、21、28 d，两组的免疫抗体合格率均未达到70%的保护标准；在二免后21 d，脾淋苗A组的免疫抗体合格率为70%，细胞苗C组的免疫抗体合格率为60%；在二免后45 d，脾淋苗A组的免疫抗体合格率已经下降到60%，细胞苗C组的免疫抗体合格率为50%；脾淋苗B组和细胞苗D组相比，在首免后14、21、28 d，两组的免疫抗体合格率差异不大，在二免后21 d和二免后45 d，脾淋苗B组的免疫抗体合格率均为100%，细胞苗D组的免疫抗体合格率分别为80%和90%。

表3 各组免疫抗体合格率统计表

3 讨论

在试验开始前，对免疫注射前仔猪进行了母源抗体水平检测，挑选出母源抗体一致且效价处于在4 log2～6 log2之间的仔猪，消除了母源抗体的干扰因素，又回避了仔猪免疫空白期，对试验的顺利开展是十分必要的。据文献报道[4-8]，当母源抗体中和效价大于6 log2时再进行疫苗接种，会明显抑制机体诱导的细胞免疫和体液免疫，延长排毒时间。因此，规模化猪场必须对基础母猪群的免疫状态进行监测，确定母源抗体对新生仔猪的保护程度，以便制定与实施对仔猪的免疫程序。

免疫试验结果表明，2种疫苗标准剂量免疫后，都不能对猪群产生保护作用。加倍剂量免疫后，在首免后14、21、28 d，免疫抗体合格率均未达到70%，在二免后21 d和45 d，猪瘟脾淋苗和细胞苗的免疫抗体合格率在分别为100%、100%和80%、90%，可见2种疫苗都能对猪群产生很好的保护作用。相关研究表明[9-12]，仔猪通过吃初乳获得母源抗体来抵抗CSFV，随着日龄增加，母源抗体逐步降低，其保护力也下降。对有母源抗体的仔猪攻毒，能导致CSFV复制，母源抗体越高，其抑制机体的主动免疫能力越强，但母源中和抗体高低与保护率无直接关系，增大免疫剂量可降低这种抑制作用，或进行第2次接种，抗体滴度会升高。所以，为了获得较好的猪瘟免疫效果，对猪群进行加强免疫非常有必要。

从免疫抗体水平和合格率分析来看，在二免后21 d，脾淋苗B组的平均抗体效价为7.5 log2，免疫抗体合格率为100%；细胞苗D组的平均抗体效价为6.2 log2，免疫抗体合格率达到80%。在二免后45 d，脾淋苗B组的平均抗体效价为8.4 log2，免疫抗体合格率仍维持在100%；细胞苗D的平均抗体效价为7.3 log2，合格率上升到90%。结果表明，猪瘟脾淋苗在刺激机体产生免疫抗体的速度明显优于细胞苗。分析原因，主要是因为猪瘟脾淋苗中含有某些免疫增强因子，所以刺激机体产生抗体速度比较快，免疫效果也比较确实。相关资料表明[13]，猪瘟兔化弱毒脾淋苗免疫猪具有高比例的CD3+和CD4+T淋巴细胞亚群，高而稳定的CD4+/CD8+T淋巴细胞比值，高活力的淋巴细胞和高水平的IFN-γ和IL-3，这些免疫增强因子在抗病毒和抗感染免疫中起着重要作用，这也是猪瘟脾淋苗广泛用于紧急预防接种的理论依据。

猪瘟脾淋苗是用兔化弱毒株接种家兔，收获感染家兔的脾脏和淋巴结组织，制成乳剂，冷冻真空干燥而制成，按照每头份脾淋苗不少于组织毒0.01 g的标准，平均1只家兔仅能制出300头份～400头份猪瘟脾淋疫苗，制苗产量小，生产成本高，且含毒量不统一。猪瘟细胞苗是猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞培养，收获细胞培养物而制成，生产成本低，且可以在短时间内大批量生产。按照目前国内的生猪存栏量来看，选用猪瘟脾淋疫苗来免疫，所需家兔的养殖量巨大。因此，在全民建设资源节约型和环境友好型社会的大背景下，建议广大养殖户合理选用疫苗。

综合分析认为，猪瘟脾淋苗和细胞苗，用标准剂量免疫后，都不能对猪群产生保护作用。用2头份剂量在仔猪30日龄首免，首免后28 d加强免疫，2种疫苗都能对猪群产生很好的保护作用，能满足预防猪瘟的需要，同时猪瘟脾淋苗免疫后刺激机体产生抗体的速度快，可用于紧急免疫接种。另外规模化猪场必须对基础母猪群的免疫状态进行监测，确定母源抗体对新生仔猪的保护程度，以便制定与实施仔猪的免疫程序。

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Comparative Experiments of Immune Effects of Classical Swine Fever Vaccine from Different Manufacturers

LI An-peng1,ZHAO Li2,ZHANG Zhi-peng2,3

(1.HanzhongAnimalHygienieSupervisionInstitute,Hanzhong,Shaanxi,723000,China; 2.HanzhongAnimalDiseasePreventionandControlCenter,Hanzhong,Shaanxi,723000,China; 3.CollegeofAnimalScienceandTechnology,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi,712100,China)

To accurately grasp the immune effects of two kinds of classical swine fever vaccine that were most used in large-scale pig farms in practice,we chose 4 healthy litters of piglets with similar weight.Then,the piglets,divided into 4 groups randomly,10 pigs in each group,were inoculated with the spleen-lymphocyte vaccine and cell vaccine respectively.Before and after immunization,the indirect hemagglutination test (IHA) method was used to detect the antibody titer.The results showed that after immunization,neither vaccine had protective effects on swine with standard dose.However,two vaccines both had good protective effects on swine when the first immunization of each piglet was on 30 day-age with 2 doses and a booster was on 28 d after first immunization,which can satisfy the prevention of classical swine fever.In addition, the spleen vaccine,stimulating organism to produce antibodies quickly,can be used for emergency vaccination.The farmers can choose classical swine fever vaccine scientifically and reasonably according to the actual situation.

Classical swine fever;vaccine; immune effect

2016-10-21

汉中市农业倍增工程项目(201450)

李安鹏(1980-)，男，陕西城固人，高级兽医师，主要从事动物疫病防控及动物卫生监督执法工作。

S852.5

B

1007-5038(2017)01-0132-04