三叶因子家族1和细胞周期蛋白 D1在胃癌组织中的表达及意义

王慧慧 金仁顺

(延边肿瘤医院病理科，吉林 延吉 133000)

三叶因子家族1和细胞周期蛋白 D1在胃癌组织中的表达及意义

王慧慧 金仁顺1

(延边肿瘤医院病理科，吉林 延吉 133000)

目的 探讨三叶因子家族(TFF)1和细胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌组织中的表达及意义。方法 收集胃癌标本72例，采用免疫组化SABC染色方法，观察癌旁胃黏膜及胃癌组织中的TFF1和CyclinD1的表达，分析两者与临床病理参数之间的关系及两者的相关性。结果 TFF1在癌旁黏膜及胃癌组织中阳性表达率分别为100.0%和63.3%，CyclinD1分别为69.8%和41.7%，两者差异显著(P<0.01，P<0.05)；TFF1和CyclinD1在有淋巴结转移组分别为76.3%及55.6%，无转移组分别为40.9%和18.5%，两者差异显著(P<0.01)；TFF1的表达与胃癌的分化程度无关，而CyclinD1在低分化和高中分化腺癌中的表达分别为53.5%和24.1%，两者有统计学差异(P<0.05)；TFF1在细胞质中表达阳性的同时在细胞核中也有表达，其阳性率与肿瘤细胞的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关。TFF1和CyclinD1 在胃癌中表达呈正相关。结论 TFF1和CyclinD1表达下调可能在胃癌发生过程中起作用，TFF1在胃癌的不同时期、不同阶段可能起不同作用，TFF1和CyclinD1的低表达可作为胃癌的预后指标。

胃癌；三叶因子家族；细胞周期蛋白D1

三叶因子家族(TFF)是近年研究较多的一种小分子多肽，在正常生理条件下主要表达于胃肠道黏膜，研究认为TFF1不仅对胃肠黏膜起保护修复作用，而在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用，而TFF1在不同肿瘤中其表达意义可能不同〔1,2〕。本研究采用免疫组化方法检测TFF1和细胞周期蛋白(Cyclin)D1在胃癌组织中的表达，分析其与胃癌的临床病理参数间的关系以及两者之间的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 胃癌标本72例，男62例，女10例；年龄34～81(中位年龄63.2)岁,高中分化腺癌29例，低分化腺癌43例；浸润至浆膜层51例，浸润至肌层21例；无淋巴结转移27例，有淋巴结转移45例；贲门癌22例，胃窦癌50例。TFF1检测有效病例癌旁49例，胃癌60例；Cyclin D1检测有效病例癌旁63例，胃癌72例。

1.2 方法 所有标本经10%甲醛溶液固定24～48 h，常规石蜡包埋，进行连续切片，厚度为4 μm，癌旁黏膜作为内对照，分别进行苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化染色，光镜下观察染色结果，免疫组化采用SABC法(TFF1和 CyclinD1及试剂盒购自中彬金桥生物技术有限公司)，二氨基联苯胺(DAB)显色，阴性对照用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。

1.3 结果判断 TFF1在细胞质和(或)核内有棕黄色颗粒为阳性，CyclinD1在细胞核着色为阳性。判断标准：根据阳性细胞数占同类细胞总数的百分比及染色强度进行分级：①无着色为0分；淡黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分；②计数500个细胞，按显色细胞占观察细胞的比例：<5%为0分；6%～50%为1分；>50%为2分。两项结果相加<2分为阴性(-)；2～3分为弱阳性(+)；4～5分为强阳性()。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0统计学软件进行χ2检验，Spearman等级相关分析。

2 结 果

2.1 TFF1和CyclinD1在癌旁组织及胃癌组织中的表达 在49例癌旁黏膜及60例胃癌组织中，TFF1阳性率分别为100%(49/49)和63.3%(38/60)，两者间有统计学差异(χ2=22.51，P<0.01)；CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌组织中阳性率分别为69.8%(44/63)和41.7%(30/72)，两者间有统计学差异(χ2=10.769%，P<0.01)。见图1,图2。

2.2 TFF1表达部位与胃癌的生物学行为关系 38例细胞质表达阳性的胃癌组织中，有14例核同时表达阳性，其中低分化腺癌12例，浸润至浆膜层11例，有淋巴结转移10例。

图1 TFF1在癌旁黏膜及胃癌组织中的表达(DAB,×200)

2.3 TFF1和CyclinD1蛋白表达与临床病理特征的关系 TFF1在胃癌中的表达与有无淋巴结转移有关(P<0.01)，但与

患者的性别、年龄、分化程度和浸润深度均无相关。另外，TFF1在贲门癌中的表达率高于胃窦癌(P<0.01)。CyclinD1在胃癌中的表达与组织类型和淋巴结转移有关(P<0.05，P<0.01)，但与患者的性别、年龄、浸润深度及胃癌的发生部位均无相关(P>0.05)。见表1。

2.4 TFF1和CyclinD1在胃癌组织中表达的相关性 TFF1与CyclinD1表达呈正相关性(r=0.272，P=0.035)。

图2 CyclinD1在癌旁黏膜及胃癌组织中的表达(DAB,×200)表1 TFF1、CychinD1表达与临床病理特征的关系〔n(%)〕

病理因素TFF1(n=60)nn(%)χ2值P值CyclinD1(n=72)nn(%)χ2值P值性别男5132(62.7)0.0510.8226227(43.5)0.6500.420女96(66.7)103(30.0)年龄(岁)<603020(66.7)0.2870.5923212(37.5)0.4110.521≥603018(60.0)4018(45.0)分化程度高中分化1910(52.6)1.3710.242297(24.1)6.1380.013低分化4128(68.3)4323(53.5)淋巴结转移有3829(76.3)7.5220.0064525(55.6)9.5240.002无229(40.9)275(18.5)浸润深度至浆膜4729(61.7)0.2490.6185125(49.0)3.8900.049至肌层139(69.2)215(23.8)部位贲门癌2017(85.0)6.9100.0092210(45.5)0.1870.665胃窦癌4020(50.0)5020(40.0)

3 讨 论

众多恶性肿瘤过表达TFF，但其表达是肿瘤形成后的下游因素还是促进肿瘤形成的上游因素尚不明确。胃肠道是TFFs的主要合成部位，其中TFF1主要表达在胃黏膜表面上皮，目前认为TFF1具有抗增殖抗凋亡双重作用，其作用可能与靶细胞、细胞内外环境不同及其受体变化有关〔3〕。

在正常生理条件下，TFF1对正常胃黏膜具有保护作用，但胃黏膜发生病变后其表达下降可能失去正常保护作用，而TFF1蛋白表达缺失又可能导致胃黏膜过度增生和缺乏分化，从而造成异型增生，导致肿瘤的发生，认为TFF1对胃肿瘤的发生可能起抑制作用〔4,5〕。研究发现在弥漫型进展期胃癌中TFF1蛋白的表达水平高于肠型胃癌，浸润胃壁全层者高于仅侵及肌层者〔6〕，认为TFF1蛋白可能通过旁分泌或自分泌对靶细胞起到刺激作用从而促进肿瘤生长作用，还可能作用于肿瘤细胞本身，使肿瘤细胞增殖、黏附力下降或产生分解酶作用于基质，或通过其生长因子作用使肿瘤细胞运动能力增强〔7〕，从而影响肿瘤细胞的侵袭能力和转移，这一观点说明了TFF1与胃癌转移之间存在着一定的关系，证明了TFF1有促进肿瘤细胞浸润作用。本实验结果提示TFF1蛋白不仅与肿瘤的浸润有关，还与肿瘤的转移有关，可作为胃癌预后不良的指标。在本实验中，我们还发现TFF1在贲门癌中的表达率高于胃窦癌，在不同部位胃癌中其表达率不同，其原因尚不清楚，有待于进一步研究。

在本研究结果中，有14例胃癌细胞质和核同时表达TFF1，这种现象与肿瘤的生物学行为有关，即胃癌的恶性度越高、浸润深度越深及有淋巴结转移者其核表达率越高，因此，认为TFF1在胃癌的后期可能促进肿瘤细胞的增殖，起促癌作用，TFF1核表达可作为胃癌的预后不良的重要指标。目前，TFF1在核内表达机制尚不很清楚，有文献报道TFF1表达部位从细胞质逐渐向核周聚集时，丧失对胃黏膜上皮细胞的保护功能，从而造成胃黏膜的异型增生，最终导致胃癌的发生〔8〕。

CyclinD1是细胞周期调控中的重要分子，在肿瘤的发生、发展过程中起着正性调控作用，影响着肿瘤的生物学行为〔9,10〕。本结果说明CyclinD1的表达与胃癌形成有关，提示在正常胃黏膜中CyclinD1表达水平较高，但达到一定水平后，在CyclinD1的刺激下，黏膜上皮细胞过度生长、分裂及增殖，最终向恶性转化，如一旦发生恶变其表达水平随之下降，因此认为CyclinD1不仅参与胃癌的发生，而且在胃癌发生的早期阶段起作用。另外，在本实验中CyclinD1与肿瘤的分化程度及淋巴结转移有关，即在低分化腺癌和有淋巴结转移的癌组织中阳性表达率高于高中分化腺癌和无淋巴结转移，可见CyclinD1在肿瘤形成之前其表达量增加，但胃黏膜发生恶变后随之下降，之后随着肿瘤细胞的恶性度增高及肿瘤的转移其表达量又开始上升，即非肿瘤↑→恶变↓→高分化↓→低分化及转移↑，说明CyclinD1的表达与胃癌的不同时期、不同发展阶段及预后有密切相关,认为检测CyclinD1蛋白的表达，对判断胃癌的恶性程度、转移以及评估预后也具有重要意义。

目前的研究认为，在细胞周期过程中，TFF1介导细胞周期蛋白依赖的激酶抑制剂p16及p21的水平增加，抑制CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)4复合体的活性发挥作用〔3〕。本研究中TFF1和CyclinD1在癌旁黏膜中的表达均高于胃癌组织，两者的表达与淋巴结转移有关，并在分化差的腺癌中有较高的表达水平，另外，CyclinD1强表达组织中TFF1也呈强表达，提示了在胃癌发生和进展过程中两者有一定的相关性，两者可能协同促进胃癌的发生、发展。

1 蔡稼燕，任建林，张 靖.三叶因子的研究与进展〔J〕.世界华人消化杂志，2007；15(21)：2273-8.

2 Im S,Yoo C,Jung JH,etal. Reduced expression of TFF1 and increased expression of TFF3 in gastric cancer:correlation with clinicopathological parameters and prognosis〔J〕.Int J Med Sci,2013;10(2):133-40.

3 程晓丽，陈自平.三叶因子1与胃癌〔J〕.国际肿瘤学杂志，2009;36(12)：938-40.

4 杨 俊，历朝喜，戴一扬，等.三叶因子1蛋白与血清胃蛋白酶原在胃溃疡中的表达及其意义〔J〕.中华医学杂志，2012;92(22):1540-3.

5 Shi SQ,Cai JT,Yang JM.Expression of trefoil factors 1 and 2 in precancerous condition and gastric cancer〔J〕.World J Gastroenterol,2006;12(19):3119-22.

6 陆 岽,陈玉丽，刘豫瑞.PS2表达与胃癌发生、发展及其淋巴结转移的关系〔J〕.福建医药杂志,2005;27(2):40-3.

7 王元杰，肖 蔚，郭 玲.大肠癌组织中ER和PR及pS2表达的临床意义〔J〕.肿瘤防治杂志，2005;12(24):1881-3.

8 顾 玮,李 健,张叶丽，等.pS2/TFFl蛋白在胃癌及其癌前病变组织中表达的研究〔J〕.胃肠病学，2010;15(12):725-8.

9 Liang S,Mu K,Wang Y,etal. CyclinD1,a prominent prognostic marker for endometrial diseases〔J〕.Diagn Pathol,2013;15(8):138.

10 Srivastava V,Patel B,Kumar M,etal. Cyclin D1,retinoblastoma and p16 protein expression in carcinoma of the gallbladder〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2013;14(5):2711-5.

〔2015-04-18修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

吉林省教育厅项目〔吉教科合字2012第6号〕

金仁顺(1964-)，女，主任医师，博士，硕士生导师，主要从事肿瘤病理学研究。

王慧慧(1981-)，女，硕士，主治医师，主要从事肿瘤病理学研究。

R735.2

A

1005-9202(2017)03-0660-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.061

1 延边大学附属医院病理科