多联袋手工法快速制备冰冻去甘油红细胞的应用

2017-02-27杨建波王红娜赵志弟马素芬尚艳坤

临床输血与检验 2017年1期

杨建波王红娜赵志弟马素芬尚艳坤

杨建波王红娜赵志弟马素芬尚艳坤

手工法快速解冻红细胞

冰冻红细胞在国内外已普遍投入临床使用，为稀有血型患者输血提供了方便，争取了抢救时间，冰冻红细胞还可用于特殊患者的自身输血和部分调节血液供求不平衡现象，冰冻血是其他制剂所不能代替的血液制品[1]。冰冻红细胞使用前要进行解冻去甘油，一种简便、快速、质量稳定的解冻去甘油方法是保证患者输血及时有效的关键，现将一种手工快速制备冰冻解冻去甘油红细胞的方法及质量检测结果报告如下。

材料与方法

1 主要仪器与试剂 0.9%联袋盐水（山东威海高分子），复方甘油（北京博德桑特），9%盐水（北京博德桑特），甘油三酯试剂盒（浙江东瓯），游离血红蛋白试剂盒（北京瑞尔达）；大容量低温离心机（SIGMA 8K），分光光度计（CANY 723C），血细胞计数仪（希森美康K-21N）

2 制备方法

2.1 改良方法：抽取2011～2015年制备的冰冻红细胞10袋。冰冻红细胞甘油浓度为40%，－65℃以下保存。冰冻红细胞37℃～40℃水浴融化，融化过程中轻缓摇动血袋。向解冻的红细胞中加入9%盐水80 ml/U，混匀后将1 U红细胞转移至1 000 ml大转移袋中，如为2 U则平均分装于2个1 000 ml大转移袋中，见图1，与联袋0.9%盐水无菌连接。加完9%盐水20 min后，将2袋500 ml盐水加入到大转移袋中与红细胞混和，加盐水时要快速混匀，不需控制流速。将混合好的红细胞悬液平均转移至2个空盐水袋中，相对离心力3 000 g、温度2℃～6℃条件下离心8 min，放出大部分上清液，每袋内保留红细胞及上清液约100 ml，将2袋红细胞混入1袋。向红细胞中加入0.9%盐水300 ml，加盐水时快速混匀，不需控制流速，以同样条件离心，充分去除上清液，加入0.9%盐水500 ml混匀后，同样条件离心充分去除上清液，将红细胞中加入适量0.9%盐水，使其容量符合质量标准。

2.2 对照方法：按2.1的方法，解冻红细胞中加入9%盐水80 ml/U ，以滴速60滴/min加入羟乙基淀粉100 ml，静置5 min后，相对离心力1 880 g、温度2℃～6℃条件下离心8 min，去上清后以同样速度加入羟乙基淀粉100 ml，0.9%盐水100 ml，同样条件离心去上清，100滴/min加入生理盐水200 ml，重复洗涤3次。

3 质量检测对制备的冰冻解冻红细胞进行甘油残留量、游离血红蛋白浓度、血红蛋白量检测，由于采用的原料血均为去白细胞悬浮红细胞，故未进行白细胞残留量的检测。

4 统计学处理所得数据以x±s表示，应用SPSS13.0软件采用t检验。

结果

多联袋文字图见图1。各项质量检测结果见表1。

图1 多联袋示意图

讨论

改良的制备方法大大地增加了盐水用量，加入9%盐水后放置20 min，红细胞在高渗环境下变成皱缩状态，细胞内更多的甘油也释放到细胞外，使甘油去除更充分。皱缩红细胞能耐受更大的细胞内的渗透压差变化，加入盐水时快速混匀和洗涤程序的调整，使红细胞内外渗透压变化更好地控制在红细胞可耐受范围内，明显减少了洗涤过程中造成的红细胞破裂溶血。改良方法制备冰冻解冻去甘油红细胞的各项质量检测指标均符合国家标准[2]，且优于传统手工制备方法，产品质量稳定，整个制备过程不超过2h，可批量制备冰冻解冻去甘油红细胞。一般手工制备冰冻解冻去甘油红细胞需用时5 h左右[3]，全自动细胞处理系统制备时间较短，但设备、耗材昂贵且每台设备每次只能制备一袋解冻红细胞，无法满足大量输血患者的抢救用血。改良后的制备方法与之比较具有一定的优势。