虹鳟鱼免疫灭活疫苗在养殖生产中的应用研究

2017-02-25孙玉芝李征远张岩岩李晓晨孙兆旭

中国水产 2017年2期

文/孙玉芝李征远张岩岩李晓晨孙兆旭

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鲑鳟鱼作为辽宁省水产业的特色养殖鱼类，已经成为本溪地区渔业增效，农村增收，农民致富的重要产业。但是随着产业的发展壮大，随之而来的鱼类病害也时常发生，现已经蔓延至全市的虹鳟鱼养殖场、户，特别是IHN病毒的大面积爆发，已成为目前制约鲑鳟鱼产业发展的瓶颈问题。

一、试验项目背景及本溪地区虹鳟鱼养殖现状

本溪市位于辽东山区，冷泉水、山泉水资源丰富，水量充沛，还有一些山谷型的水库,水库底排水水温常年在20℃以下，均适合鲑鳟鱼类养殖生长。

本溪地区的鲑鳟鱼人工养殖在我国是起步最早的地区之一。从上世纪80年代后期即开始了引种养殖，其产量在全国都占有一定的份额。鲑鳟鱼作为辽宁省水产业的特色养殖鱼类，已经成为本溪地区渔业增效，农村增收，农民致富的重要产业。但是随着产业的发展壮大，随之而来的鱼类病害也时常发生，现已经蔓延至全市的虹鳟鱼养殖场、户，特别是IHN病毒的大面积爆发，已成为目前制约鲑鳟鱼产业发展的瓶颈问题。

2008年春季本溪市南芬区思山岭乡一户虹鳟鱼养殖户，虹鳟鱼种发病，死亡量高达60%左右；2009年疾病开始蔓延到整个思山岭地区的50多个养殖户；2010年病害开始大面积爆发，我市的虹鳟鱼主产区南芬区思山岭乡、下马塘镇，本溪县小市镇久才峪村、草河掌地区的虹鳟鱼养殖场都爆发鱼病，涉及到整个本溪市的虹鳟鱼养殖场、户，是虹鳟鱼养殖损失最严重的一年。

2011年始，由于疫病开始是虹鳟鱼苗大面积发病，养殖户开始购买发病后对病毒有免疫力的鱼种进行成鱼养殖，发展到2013年，成鱼养殖也开始发病，陆续死亡。现在，各虹鳟鱼养殖场从鱼苗、鱼种及成鱼都有发病，死亡率30%～80%不等，有的甚至全军覆没。

经大连海洋大学及中国水产科学研究院黑龙江水产研究所鉴定，病鱼感染的是传染性造血器官坏死病毒，即IHN。病害给渔农造成严重的经济损失，直接影响到我市的鲑鳟鱼养殖产业，致使部分养殖场终止了养殖多年的虹鳟鱼养殖，有的改养鲟鱼、细鱗鱼、哲罗鱼等其它鲑科鱼类，有的停止渔业生产。现在虹鳟鱼养殖户由原来的400多家，仅剩100家左右。

2010年到2013年期间，有的虹鳟养殖场开始进口基因疫苗或采取其它中药预防措施等，疫病得到缓解，但效果都不明显。

2014年，辽宁省水产技术推广总站病害处，在大连口岸检疫局监测IHN病毒期间，用本溪市的病料鱼，同大连口岸检疫局一同研发了虹鳟鱼IHN灭活免疫疫苗，在本溪县小市镇久才峪村进行试验。把注射过疫苗的鱼种混入病鱼养殖池中养殖，没有注射疫苗的鱼种陆续死亡，而注射疫苗的鱼种成活率达到100%,现已养成成鱼出售。由此证明我们研发的免疫灭活疫苗对虹鳟鱼无毒副作用，且免疫有效，可以进行下一步试验。

由于试验表明了疫苗的无毒性和可操作性，2015年辽宁省水产技术推广总站病害处，联合大连口岸检疫局及本溪市渔业管理总站，在辽宁省渔业厅申请立项，正式进行虹鳟鱼疫苗免疫对比项目试验。

二、2015年虹鳟灭活免疫疫苗试验的基本情况

2015年在本溪市京溪虹鳟鱼养殖场进行了疫苗对比试验（试验数据见附表1、附表2），试验组分疫苗的不同浓度，浸泡疫苗和注射疫苗及无注射疫苗的对照组，分九组、五组两个批次进行了对比试验，试验结果除了鱼种注射死亡6%左右外，对照组和实验组的死亡数据均无明显差距。

而2015年同时在下游水域发病渔场进行的疫苗注射试验，同渔池没有注射疫苗的虹鳟鱼死亡率达60%左右，而注射免疫灭活疫苗的虹鳟鱼除注射死亡10%左右外，成活率达100%。同年实验组的一组虹鳟鱼也放入下游的虹鳟鱼养殖场进行感染试验一个月，后期又移回原养殖试验场，亦没有发现死鱼现象。由此证明，灭活疫苗对虹鳟鱼IHN病毒免疫有效。

试验结果不明显只是因为，试验渔场由于虹鳟鱼疫病已停虹鳟鱼养殖数年，且暴晒了数年，且为源头水源，上游没有污染，已无虹鳟鱼IHN病毒感染。

三、2016年虹鳟鱼灭活免疫疫苗试验的基本情况

2016年虹鳟免疫灭活疫苗试验数据见附表3。

借鉴2015年的试验经验，2016年我们在本溪地区选择了一家IHN疫病感染比较严重的本溪县文华虹鳟鱼养殖场进行虹鳟鱼灭活免疫疫苗的对比试验。

试验鱼池为山泉水流水水泥池，长18.5m，宽5.3m，一般水深保持在0.6m左右。用1cm网眼的硬塑隔断成6个虹鳟养殖区，用于疫苗对比试验。

试验用的鱼种为虹鳟和金鳟的鱼种，金鳟每尾30g左右；治疗性疫苗用的虹鳟，每尾150g左右。2016年10月中旬，虹鳟长至750g左右，金鳟长至500g左右，可能是放养密度较小，长势优于其它养殖场的虹鳟、金鳟养殖。

我们还对正在发病的虹鳟鱼种进行了治疗性疫苗的注射试验，从目前的对比数据观察结果看，试验效果理想。试验注射治疗性疫苗的虹鳟种鱼长势良好，没发现死鱼现象，而没注射治疗性疫苗的同批虹鳟鱼种，死亡明显，死亡率达50%。

因进口药剂研制的灭活疫苗每尾注射成本在1元钱左右，国产药剂制作的灭活疫苗注射成本每尾鱼在0.1元左右，所以2016年试验，部分用的是国产药剂制作的灭活疫苗，以利以后试验结果在虹鳟鱼养殖生产上的推广应用。

2016年的试验，同样对照组、实验组的死亡率区别不明显，我们推测是放养密度的关系。试验鱼放养密度仅为平时鱼户养殖虹鳟鱼放养密度的四分之一。由于生长环境的优越，溶氧充足，导致死亡率下降。对此我们也呼吁虹鳟鱼养殖户降低养殖密度。

四、虹鳟亲鱼注射虹鳟鱼免疫灭活疫苗试验

2016年7月中旬，在虹鳟种鱼增加营养育卵之前，我们在本溪县王经纶虹鳟鱼孵化场，对虹鳟种鱼进行灭活免疫疫苗注射对比试验，试验灭活疫苗是否在虹鳟第二代鱼苗体内产生抗体。

本溪市渔业管理总站今年在本溪县王经纶虹鳟鱼孵化场，为虹鳟种鱼注射了进口1:10免疫灭活疫苗的试验，每尾注射0.2mL。注射4kg左右的虹鳟种鱼14尾，1.5kg左右虹鳟雄鱼4尾。注射疫苗的种鱼同其它种鱼一样进行了光控育卵培育。从目前虹鳟种鱼的怀卵量、受精率、上浮率的情况来看，虹鳟免疫灭活疫苗的注射对虹鳟种鱼的正常培育、育卵、稚鱼的发育（没有畸形的稚鱼）都没有任何影响，可以进行大批量的试验。

由于处于试验阶段，我们并没有进行大批量的虹鳟种鱼的疫苗注射，所以，14条亲鱼雌鱼，分3批成熟了11条，3条没有成熟产卵。

第一批只有1条雌性虹鳟种鱼和1条雄性虹鳟种鱼达到了性成熟，能够进行产卵孵化。受精卵量为7000粒左右，卵粒发育正常，成活率比其它虹鳟鱼卵要高，只捡出死卵100粒。分析是因为受精时，用了两条虹鳟雄鱼进行受精（1条注射了疫苗，1条没有注射），导致成活率偏高。鱼卵发眼率98%，上浮率95%，现培育稚鱼5000尾。

第二批有2条虹鳟雌鱼成熟，由于人工受精操作原因，发眼卵8500粒，发眼率95%，上浮率65%，现处于卵黄囊吸收阶段，以以往孵化效果估计得上浮稚鱼5000尾左右。

第三批其余8条雌鱼全部成熟，现鱼卵已发眼，发眼率95%，没有破膜，得发眼卵40000粒左右。

本溪县王经纶虹鳟鱼孵化场源头水温9℃，PH7.6，氨氮0.0mg/L，溶解6mg/L～9 mg/L（试剂盒数据范围比较大），符合虹鳟鱼养殖水体标准。

四、虹鳟免疫灭活疫苗推广情况

虽然我们的虹鳟免疫灭活疫苗试验数据不太理想，但通过两年多的试验，得到了周边养殖户的认可。我们亦本着边试验边推广、缩短疫苗在虹鳟鱼生产应用上的时间的目的，本着自愿的原则，为周边养殖户进行了虹鳟免疫灭活疫苗的注射。

2015年10月，本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，注射了进口虹鳟免疫灭活疫苗800尾40g左右的虹鳟鱼种，每尾注射0.1mL，放入了40g左右没有注射疫苗的4500尾金鳟鱼养殖池中，进行试验养殖。由于放养密度偏大，虹鳟、金鳟长至350g～750g不等。虹鳟鱼死亡70尾，死亡率8.75%，金鳟鱼死亡1400尾，死亡率31.1%。

2016年9月14日，本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，又注射了25g左右的虹鳟鱼种850尾（国产疫苗），25g左右的金鳟鱼种4500尾（进口疫苗），2016年11月，虹鳟养殖水温开始下降，为虹鳟鱼IHN高发季节，虹鳟、金鳟成活率均为95%，照比同期养殖的虹鳟鱼成活率提高40%，面前长势良好。

本溪县金宥利虹鳟鱼养殖场，测量水温9℃，氨氮0.1mg/L，PH 8，溶解氧6hg/L～9hg/L，符合虹鳟鱼养殖水体标准。