不同产地松香药材中松香酸的含量测定*

王晓萍，崔小敏，李富贤，石会丽△，刘军锋

1.陕西省中医医院 ( 西安 710003), 2. 陕西省中医药研究院 (西安 710003)

·方药纵横·

不同产地松香药材中松香酸的含量测定*

王晓萍1，崔小敏2，李富贤2，石会丽2△，刘军锋1

1.陕西省中医医院 ( 西安 710003), 2. 陕西省中医药研究院 (西安 710003)

目的：建立高效液相色谱法(HPLC)测定不同产地松香药材中的松香酸含量，为松香药材的质量控制提供依据。方法：采用高效液相色谱法(HPLC)，色谱柱为Akasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-乙腈-0.5%冰乙酸溶液(72∶15∶13)；检测波长为241 nm；流速为1.0 ml/min，柱温30℃，进样量为10 μl。结果：建立了松香中松香酸的提取方法和HPLC含量测定方法。10批松香中松香酸含量范围1.12%～81.35%。结论：市售不同产地松香药材中松香酸量差异较大，提示药材质量参差不齐，亟需质量规范和控制。本研究建立的方法结果准确，稳定性好，简便易行，可用于松香药材的质量控制。

松香，别名松脂、松膏、松胶，为松科植物马尾松Pinusmassonianalamb.或同属数种植物的树脂除去挥发油后，所留存的固体树脂，其味苦、甘，性温，入肝、脾经，能祛风燥湿、排脓拔毒、生肌止痛[1]。《神农本草经》载“主痈疽恶疮，头疡白秃，疥瘙风气，安五脏，除热”且被列为上品，李时珍谓其强筋骨，利耳目，治崩带，临床多用于银屑病、慢性骨髓炎、皮肤疮疡、小儿湿疹等症[2-4]。自从上世纪八十年代，本院就开始使用松香治疗银屑病，以松香为主要药味的银屑平、愈银片等院内制剂在治疗银屑病的过程中更是表现出卓著的临床效果[1]。然而对于药用松香的质量目前还没有统一的控制方法。本文拟建立松香中主要化学成分松香酸[5]的高效液相色谱方法，并对来自不同产地的十批松香药材进行含量测定，从而为松香药材的质量控制和相关制剂的生产选材提供方法和科学依据。

仪器与试药

1 仪 器 岛津LC-2010A型高效液相色谱仪，UV-VIS紫外-可见检测器，LC-Solution化学工作站，超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-100型)、电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司，型号：BT25S, d=0.01 mg ；BS210S,d=0.1 mg)。

2 试 药 松香药材购自于各地药材市场，经陕西省中医药研究院石会丽研究员鉴定为松科植物马尾松Pinus massoniana lamb.或同属植物的干燥树脂，松香酸对照品(实验室自制，纯度为98.4%)，使用前置干燥器中干燥至恒重。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

方法与结果

1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：Akasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-0.5%冰乙酸溶液(72∶15∶13)；检测波长：241 nm；流速：1.0 ml/min。理论塔板数按松香酸峰计算应不低于3000。

2 对照品溶液的制备 精密称取松香酸对照品15.37 mg，置25 ml量瓶中，用无水乙醇稀释制成含松香酸 0.6050 mg/ml的对照品储备液。精密吸取对照品储备液1 ml，置于10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释制成含绿原酸 0.0605 mg/ml的对照品溶液，即得。

3 供试品溶液的制备 取松香药材粉末约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按“色谱条件”项下的测定方法进行测定。其HPLC图见图1。

A.对照品色谱图；B. 供试品色谱图；1.松香酸

5 方法学考察 线性关系考察: 取0.0605 mg/ml对照品溶液，分别精密吸取2 μl、4 μl、8 μl、16 μl、32 μl、40 μl，注入液相色谱仪，在“1”项色谱条件下进样，记录色谱图，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=2 567 783.4×- 662.2(r =1.0)。结果表明，松香酸在0.121～2.42 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

精密度试验: 精密吸取对照品溶液10 μl，在色谱条件下重复进样6次，计算松香酸峰面积的RSD为0.28%，表明仪器精密度良好。

重复性试验: 精密称取松香药材 (编号10)适量，按“3”项方法制备供试品溶液，在“1”项色谱条件下进样分析，以外标法计算松香酸的平均含量为0.5230 g/g，RSD为0.80%(n=6)。结果表明，该方法重复性良好。

稳定性试验: 取同一供试品溶液，室温放置，在“1”项色谱条件下分别在0、2、4、8、12、24h进样分析，计算峰面积的RSD为0.75%。表明供试品溶液室温放置24h稳定。

加样回收试验: 精密称取已知含量(0.5230 g/g)的松香药材粉末(编号10)共六份，每份约10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，按样品中松香酸含量的100%，分别加入0.6459 mg/ml的松香酸对照品溶液8 ml，按“3”项方法制备供试品溶液，在“1”项色谱条件下进样分析，计算回收率，结果见表1。

表1 松香酸回收率试验结果(n=6)

6 含量测定 取从市场购买的10批松香药材，按前述方法制备供试品溶液，在“1”项色谱条件下进样分析，按外标法计算松香药材中松香酸的百分含量(%)，结果见表2。

表2 不同产地松香药材中松香酸含量测定结果

讨 论

松香酸易溶于乙醇和甲醇，不溶于水。本试验中考察了甲醇和乙醇作为提取溶剂对于松香酸提取效果的影响，结果表明，二者无显著性差异，因此选择安全低毒的乙醇作为提取溶剂。

已有的松香酸含量测定文献报道中，松香酸的色谱峰存在拖尾等不理想的情况[6]。本实验分别考察了甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸、甲醇-3%冰醋酸、甲醇-乙腈-0.1%磷酸以及甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸等溶剂系统[7-8]，发现三元溶剂系统下松香酸的分离效果最佳，峰形最好，因此最终选择流动相为甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸。

松香主要产于广东、广西、福建、湖南、安徽等地。本试验结果显示，不同产地不同来源的松香酸含量差异较大，最低含量1.12%，最高含量达81.35%。所测定的十批松香药材中，松香酸含量以广西、广东相对最高，安徽、福建次之。含量最小的7号松香药材购自于西安万寿路药材市场，产地不明，但其药材外观有一个显著特点，就是色泽较暗，透光性差，且呈棕褐色。仔细将药材色泽与含量测定结果进行对比，发现松香酸含量越高的松香药材，其颜色越浅，透光性越好，呈透明状乳白或浅黄色，推测这种外观与内在含量上的差异可能来源于产地，更可能和药材的炮制处理工艺密切相关，因为报道有称“松香治病，古今医家皆云必须修治，其白如玉，方可入药[1]。”因此，本研究所建立的松香酸含量测定方法可为松香药材质量的优劣提供科学方法和试验依据。

[1] 毕跃峰，郑晓坷，冯卫生，等. 松香的化学研究与临床应用[J].河南中医药学刊，2001,16(2)：21-22.

[2] 韩世荣，李景霞. 松香临床应用与研究进展[J].中医药研究，1988，5：28-29.

[3] 吾 坎，阿尼古丽. 松香临床应用[J].新疆中医药，2003，21(6)：37-39.

[4] 周灿荣，孙均遂. 松香的临床应用举隅[J].浙江中医杂志， 1995，30(5)：230-230.

[5] 宋湛谦，陈振隆，J. P.佩里. 气相色谱法分析松脂[J].林业化学与工业，1988，8(2)：10-12.

[6] 刘伟华. 松香药材中松香酸的含量测定方法[J]. 医药论坛杂志，2011，32(24)：46-50.

[7] 李富贤，米彩峰，石会丽. RP-HPLC测定清毒素胶囊中松香酸的含量[J].中国中药杂志，2008，33(9)：1086-1087.

[8] 王英锋，魏小燕. HPLC测定枫香脂碱提物中脱氢松香酸和松香酸的含量[J].中国中药杂志，2013，38(1)：57-59.

(收稿：2016-10-19)

Determination of abietic acid in rosin from different habitats

Wang Xiaoping, Cui Xiaomin, Li Fuxian, et al.

Shaanxi Province Traditional Chinese Medicine Hospital (Xi'an 710003)

Objective: To establish a HPLC method to determine the content of abietic acid in rosin from different habitats. Methods: The HPLC method was applied. The determination was performed on Akasil-C18 (250mm×4.6mm，5μm) column with mobile phase consisted of methanol-acetonitrile-0.5% Glacial acetic acid(72∶15∶13) at 1.0ml/min. The detection wavelength was set at 241nm, the column temperature was 30℃, and the injection volume was 10μl. Results: The HPLC method to determine the abietic acid content of rosin was established. The ranges of abietic acid content among different samples was 1.12%～81.35%. Conclusion: The abietic acid content of the marketed rosin from different habitats differed obviously, which suggested the quality of commercial rosin is not coincident and needs to be controlled urgently. The established methods are accurate, stable and simple with good feasibility, which suitable for the quality control of rosin.

Colophonium/ Analytical chemistry Place of production (TCD) Chromatography, high pressure liquid

*国家中医药管理局中药特色技术传承人才项目 陕西省科技厅社发攻关项目(2016SF-358)

松香/中药分析化学 中药产地 色谱法, 高压液相

R927.2

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.02.056

△通讯作者