溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素的表达水平

刘 黎

溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素的表达水平

刘 黎

目的研究溃疡性结肠炎（UC）患者结肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素的表达水平及其与病变范围、病变程度间的关系，初步探讨UC的发病机制。方法34例UC住院患者作为研究组，29例结肠息肉患者作为对照组，采用实时定量PCR法测定两组结肠黏膜组织中TSLPmRNA表达水平，比较血清CRP及血沉的变化。结果研究组与对照组结肠黏膜TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉存在显著差异（P＜0.01）；UC患者中结肠黏膜TSLPmRNA表达水平、CRP以及血沉在不同病变程度及不同病变部位间存在显著性差异（P＜0.01）；UC患者TSLPmRNA表达水平与CRP、血沉之间存在显著正相关（P＜0.01），TSLPm RNA表达水平与病变程度间存在显著正相关（P＜0.01）。结论与正常人比较，UC患者结肠黏膜中TSLP表达水平明显升高，结肠黏膜TSLP表达水平与UC病变程度和范围存在显著相关性。

溃疡性结肠炎；结肠黏膜；胸腺基质淋巴细胞生成素；病变程度

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）是一种慢性非特异性肠病。近年来，其发病人群明显扩增，且以中青年人多见。目前UC发病机制尚不明确，遗传、环境、免疫等因素共同作用导致此病发生[1]。免疫机制研究发现胸腺基质淋巴细胞生成素（thym ic stromal lymphopoietin,TSLP）对于免疫性疾患体内淋巴细胞，尤其是树突状细胞发育和分化起到调控作用[2]，然而与免疫反应关系密切的UC患者结肠黏膜TSLP表达水平及其与病变程度、范围的关系目前在国内外研究较少[3]。本研究旨在探究UC患者结肠黏膜上皮中TSLP的表达水平，进而初步探讨TSLP与UC病变程度、范围的关系。

资料与方法

一、临床资料

研究对象为2012年1月到2014年3月来我院消化内科住院治疗的UC患者，计34例，完善相关临床、实验室、影像、内镜及病理组织学检查，其中男19例，女15例，平均年龄为（31.26±5.67）岁。应用Mayo评分方法对UC组患者进行病情活动度分级：缓解期3例，轻度活动期15例，中度活动期10例，重度活动期6例；病变范围：直肠炎9例，左半结肠炎13例，广泛结肠炎7例，全结肠炎5例。同时选取在同一时间的结肠息肉患者29例作为对照组，排除存在结肠炎、肿瘤及其他过敏性或炎症性疾病。其中男16例，女13例，平均年龄为（30.56±6.04）岁。两组间具有可比性（P＞0.05）。

二、入选标准

①临床诊断符合2007年中华医学会消化病学分会提出的《对我国炎症性肠病诊断治疗规范的共识意见》[4]；②排除存在心肝肾等器质性病变，恶性肿瘤，免疫缺陷性疾病；③妊娠及哺乳妇女除外，精神障碍不能正常交流患者除外；④患者或家属签订知情同意书，积极配合此次研究；⑤经我院医学伦理委员会审核批准。

三、测量方法

均行结肠镜检查，取两组患者病变严重结肠黏膜组织及对正常结肠黏膜组织各3块，低温冷冻条件下保存，采用实时定量PCR法测定结肠黏膜组织中TSLPmRNA表达水平。结肠黏膜组织完成RNA抽提纯化及cDNA合成后，按照下列序列进行。引物序列为：TSLP上游引物5′-CCCAGGCTATTCGGAAACTCAG-3′，下游引物5′-CGCCACAATCCTTGTAATTGTG-3′；GAPDH上游引物5′-TCCCTCAAGATTGT-CAGCAA-3′，下游引物5′-AGATCCACAAC-GGATACATT-3′；反应体系：2× SYBR Premix Ex TaqTM1μL，模板cDNA 2μL，上下游引物分别为0.5μL，加水总量至20μL。扩增条件：TSLP 94℃-4m in→（94℃-60 s→52℃-30 s→72℃-60 s）×35→72℃-10m in；GAPDH 94℃-5 m in→（94℃-30 s→55℃-30 s→72℃-30 s）×35→72℃-10m in，反应结束后采用比较阈值法定量分析结果。在同一时间清晨空腹抽取静脉血，测定CRP及血沉。

四、统计学分析

所有统计数据均统一整理，采用SPSS 17.0软件包处理，符合正态分布的计量资料采用x±s表示，两组间TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉对比采用t检验，多组间TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉水平对比采用单因素方差分析，采用LSD法；计数资料以%表示，采用χ2检验，UC患者TSLP mRNA表达水平与CRP、血沉水平、病变程度间相关性采用Spearson相关分析。P＜0.05差异具有统计学意义。

结 果

一、两组黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉水平对比

研究组与对照组黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉水平存在显著差异（P＜0.01），见表1。

表1 两组黏膜中TSLPm RNA表达水平及CRP、血沉对比

表1 两组黏膜中TSLPm RNA表达水平及CRP、血沉对比

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二、不同病变程度间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉对比

UC患者不同病变程度间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉存在显著差异（P＜0.01），在TSLPmRNA表达水平上，重度活动期＞中度活动期、轻度活动期＞缓解期；CRP依次为：重度活动期＞中度活动期＞轻度活动期、缓解期；血沉依次为：重度活动期＞中度活动期＞轻度活动期＞缓解期，见表2。

表2 不同病变程度间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉对比

表2 不同病变程度间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉对比

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三、不同病变部位间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉水平对比

UC患者不同病变部位间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉水平存在显著差异（P＜0.01），在TSLPmRNA表达水平上，全结肠炎＞广泛结肠炎＞左半结肠炎＞直肠炎；CRP依次为：全结肠炎＞广泛结肠炎、左半结肠炎＞直肠炎；ESR依次为：全结肠炎＞广泛结肠炎＞左半结肠炎＞直肠炎，见表3。

表3 不同病变部位间黏膜中TSLPm RNA表达水平及CRP、血沉对比

表3 不同病变部位间黏膜中TSLPm RNA表达水平及CRP、血沉对比

组别n TSLPmRNA表达水平血清CRP（mg/L）ESR（mm/h）直肠炎左半结肠炎24.13±3.14 28.37±3.26广泛结肠炎全结肠炎9 13 49.27±3.56 52.64±3.97 5.84±1.17 9.28±1.34 7 5 56.75±4.13 60.23±3.82 10.09±1.44 12.37±1.51 35.73±3.60 38.94±3.21 F值-15.59 14.78 18.81 P值-0.00 0.00 0.00

四、TSLPmRNA表达水平、CRP、血沉与病变程度的关系

UC患者TSLPmRNA表达水平与CRP、血沉存在显著正相关（P＜0.01），TSLPmRNA表达水平与病变程度间存在显著正相关（P＜0.01），见表4。

表4 TSLPmRNA表达水平与与CRP、血沉、病变程度的关系

讨 论

UC发病与免疫异常密切相关，其具体机制现在仍不完全清楚[5]。目前临床研究共识是辅助性T细胞（Th细胞）在UC免疫及病情进展过程中起关键作用，并且UC发病高危因素与Th2细胞免疫反应关系密切。研究表明结肠黏膜上皮细胞具有广泛的生物学功能，不仅组成黏膜免疫屏障，参与防御保护及自身修复，还可通过信号传递来维持内环境平衡[6]。TSLP是一种新发现的细胞因子，对于淋巴细胞增殖，尤其是树突状细胞（dentritic cells,DC）的发育和分化起着重要的调控作用，是DC最特异及最强的活化因子，通过促进淋巴细胞生成，并诱导DC形成Th2型微环境，从而促进肠道免疫耐受，维持肠道内环境稳态。近年来，TSLP已成为慢性免疫炎症疾患的研究重点。在慢性免疫性疾病患者的心、肝、肠黏膜中发现高水平表达的TSLP基因[7]，因此推断TSLP在某些炎性免疫性疾病中发挥重要作用。而UC作为一种与免疫反应密切相关的炎症性疾病，有学者将小鼠TSLP基因敲除来建立炎性肠病动物模型，发现肠道炎症反应更严重[8-9]，提示TSLP可能参与肠道炎症的发生。然而，现阶段UC患者与TSLP之间的联系在国内外研究不多，动物模型不具太大说服力，其结论也不确切。本实验应用免疫荧光和免疫印迹法定性及半定量确定了二者之间存在的联系。

本研究结果发现UC患者结肠黏膜中TSLP的表达显著高于健康对照组，提示TSLP在炎症肠道黏膜中存在异常表达，UC患者不同病变程度、部位间黏膜中TSLPmRNA表达水平及CRP、血沉存在显著差异（P均＜0.01）；说明TSLP水平变化在不同病变程度、范围内存在显著差异。TSLP的高表达与CRP、血沉及疾病活动度呈正相关，提示TSLP参与了UC的发生与发展，而且与既往炎症反应指标（CRP、血沉）关系密切。所以深入研究TSLP在UC发病中的作用，可能为UC提供新的治疗靶点[10]。

综上所述，UC患者肠上皮黏膜中TSLP表达水平明显升高，结果证实TSLP表达与UC病变程度、病变范围存在显著相关性。然而对于TSLP水平高表达的原因及其作用机制尚需进一步探索，TSLP可能成为UC患者细胞因子治疗的新靶标。

[1]Reardon C,Lechmann M,Brüstle A,et al.Thym ic stromal lymphopoetin-induced expression of the endogenous inhibitory enzyme SLPImediates recovery from colonic inflammation[J].Immunity,2011,35(2)∶223-235.

[2]林艳,林连捷,崔月,等.胸腺基质淋巴细胞生成素在UC患者结肠黏膜组织中的表达[J].世界华人消化杂志,2013,21(25)∶2606-2610.

[3]徐雪,薛愉,吕玲,等.胸腺基质淋巴细胞生成素与各类免疫细胞关系的研究进展[J].现代免疫学,2011,31(4)∶348-351.

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[5]张丽霞,曾波,王倩,等.胸腺基质淋巴细胞生成素在特应性皮炎小鼠模型中的作用[J].中国皮肤性病学杂志,2013,27(10)∶996-999.

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[8]Wu G,Li L,Sung GH,etal.Inhibition of 2,4dinitrofluorobenzene induced atopic dermatitis by topical application of the butanol extract of Cordyceps bassiana in NC/Nga m ice[J].Journal of Ethnopharmacology,2011,134(2)∶504-509.

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Exp ression of thym ic stromalcells in colonicmucosa ofpatientswith ulcerative colitis

LIU Li.Department ofGastroenterology,Guang′an Peop le′s Hospital,Guang′an,Sichuan 638500

ObjectiveTo explore the expression level of thym ic stromal lymphopoietin(TSLP)in colonicmucosa and its relationship with theextentand degreeof the lesions in patientsw ith ulcerative colitis.M ethodsA total of 34 patientsw ith ulcerative colitis were selected as the research group,29 patientsw ith colonic polypswere selected as the controlgroup.Real-time quantitative PCRwasused for the determ ination of TSLPmRNA expression levelof colonmucosa.The differentdegreeofC reactive protein(CRP)and the change of erythrocyte sedimentation rate(ESR)w ere com pared.The correlation of TSLPm RNA expression level,CRPand ESR in patientsw ith ulcerative colitiswas analyzed.ResultsThe TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRP,and ESR betw een the research group and controlgroup had significantdifference(P<0.01).In UC patients,TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRPand ESR among different lesion degree and lesion distribution had significantdifference(P<0.01).TSLPmRNA expression levelof colonicmucosa,CRPand ESR in UC patientshad significantpositive correlation(P<0.01).TSLPmRNA expression levels and the extentof lesions had a significant positive correlation(P<0.01).ConclusionsComparedwith normalpersons,theexpression of TSLPof colonmucosa in UC patientswassignificantly increased, and theexpression levelof TSLPwassignificantly correlatedwith the lesion degreeand lesion distribution.

Ulcerative colitis;Colonicmucosa;Thymic stromal cells;Lesionextent

2016-03-16）

（本文编辑：熊婧）

10.3969/j.issn.1672-2159.2016.05.002

638500广安市人民医院消化内科