一种高效收集蜜蜂血淋巴的新方法

张月月 马振刚

（重庆市媒介昆虫重点实验室 重庆师范大学，重庆401331）

一种高效收集蜜蜂血淋巴的新方法

张月月 马振刚

（重庆市媒介昆虫重点实验室 重庆师范大学，重庆401331）

昆虫血淋巴是血细胞、间质液和血浆的混合物，为昆虫新陈代谢中物质交换与储存的场所，在免疫、创伤愈合、防御等方面有着重要作用。血淋巴已成为昆虫免疫学研究中较为关键的生物材料之一。目前，蜜蜂血淋巴收集方法主要包括背血管取血法、压榨或离心法、穿刺法、切割法、剪开法等，但这些方法往往操作复杂、耗时长、容易收集获得受到污染或带有杂质的血淋巴。

目前，Borsuk等（2017）报道了一种新的高效快速的收集血淋巴的方法，具体操作是先将泡沫聚乙烯苯板、镊子、自动移液管、移液管吸头、棉签、冰浴器瓦斯燃烧器等用紫外灯进行杀菌。研究者用非惯用手的食指和拇指控制住蜜蜂的胸部，将蜜蜂轻轻的按压放置在泡沫聚乙烯苯板的边缘，这样放置以防止蜜蜂叮研究者手指；随后，用惯用手将棉签浸泡在70%的乙醇中，然后用棉签将蜜蜂触须周围区域进行消毒；待乙醇蒸发，用惯用手利用镊子抓住触须尖端，然后从触须根部将两根触须夹除；然后，用非惯用手食指，轻轻压住蜜蜂的腹部以增加血淋巴的压力，这就导致蜜蜂外表出现一滴纯的血淋巴。用自动移液管将这滴血淋巴转移入微量离心管，放置在冰浴中（2~4℃）以防止黑化。

此方法的优点是简化了步骤，操作简单，所需设备常见。不需将蜜蜂的身体刺穿，降低了血淋巴被污染的风险。而且，将血淋巴迅速收集入移液管中，缩短了和空气接触时间，最小化了血淋巴黑化的风险。最重要的是，此法允许测量从一只蜜蜂所取的血淋巴体积，这对生化分析很重要。这一方法最大化了从每只蜜蜂取得的血淋巴的体积，最小化了取得所需血淋巴体积所需要的蜜蜂的数量。取得的血淋巴可以在收集后立刻进行分析或者冻结备用。值得一提的是，此方法还可以用于很多有触须且大小类似蜜蜂或更大的昆虫中。由于该法可以快速获得大量纯的无污染无菌未黑化的血淋巴，且适用于大范围的蜜蜂科学研究中，因此本文对其进行转述报道，为更多的蜜蜂基础研究工作者提供参考。（文献来源 A new method for quick and easy hemolymph collection from apidae adults [J].Plos One, 2017，12(1),doi:10.1371/journal.pone.0170487）