新生仔猪腹泻的体外抑菌治疗的研究

和驿明

（云南省怒江州兰坪县中排乡农业综合服务中心，云南兰坪 671404）

新生仔猪腹泻的体外抑菌治疗的研究

和驿明

（云南省怒江州兰坪县中排乡农业综合服务中心，云南兰坪 671404）

文章以“新生仔猪腹泻的体外抑菌治疗”为主要研究对象，在对其进行概述的基础上，通过实验的方式进行深入、细致的研究与分析，希望能够就其抑制作用得出有效结论。

新生仔猪 腹泻 体外抑菌治疗

1 前言

大肠杆菌的致病原因就是致病性大肠埃细菌所引起的，一旦患病，往往会有腹泻以及败血症等相关症状，如果患病的是仔猪的话，往往会导致严重的经济损失。另外，在治疗和预防的方面，由于在预防和治疗方面，由于致病性血清型有比较大的差异，而如果一直使用抗生素进行治疗的话，就很容易产生耐药性，最终导致疫苗和抗生素的使用效果受到限制。为了尽快解决上述问题，在临床上开始尝试使用一些重要和具有特异性的抗体进行治疗，效果还是比较理想的。这也正是文章的研究所在，希望能够从体外抑制大肠杆菌的吸附出发，针对其对于致病性大肠杆菌导致仔猪患病的治疗作用展开研究与分析。

2 新生仔猪腹泻体外抑菌治疗的实验研究

2.1 关于实验的材料

该实验主要用到的是猪大肠杆菌的标准菌种三种，分别是K88、K99和987P，实验过程中所用到的仔猪就是某猪场的新生仔猪，实验中所用到的药物就是复方中药免疫球蛋白生物制剂。

2.2 关于实验的方法

首先就是体外的黏附性实验

第一步就是要对小肠上皮细胞实施分离，具体的方法就是对仔猪进行屠宰，取下整个小肠，并选择20cm左右的额十二指肠和回肠，需要注意的是，对仔猪进行屠宰的时候，仔猪一定是要禁食初乳的；紧接着就是用PBS液进行反复冲洗，主要目的是为了将肠道的粪便冲洗干净；接下来就是要对小肠进行缝线处理，具体方法就是用缝线把小肠的远端记住，等到加入了pH值是6.8的EDTA之后，再把小肠的远端系住；然后把小肠进行浸泡处理，具体 是浸泡在PBS液中，在37℃的温度条件下进行孵育，时间大约是15～25min，同时不断振动；使用离心管将小肠的内容物收集起来；之后纵向把小肠切开，将小肠上皮的黏膜细胞用载玻片刮除，将其放置到已经装有小肠内容物的离心管中；通过吸管，对小肠的内容物进行反复的吹吸，主要目的就是为了把原本成团的细胞分离成单个的；然后就是在4℃的条件下，按照4000转/min的转速进行离心处理，时间大约是10min；把上清液倒掉，剩下的沉淀物用HBSS液进行洗涤处理之后，再进行离心处理；对小肠的上皮细胞进行收集，通过显微镜进行计数。

其次就是小肠上皮细胞黏附实验

这个实验的具体方法就是使用1ml的复方中药免疫球蛋白生物制剂，然后将其与大肠杆菌溶液1ml进行混合，在37℃的条件下进行0.5h的培养；然后在1ml的黏膜细胞中加入复方中药免疫球蛋白生物制剂大肠杆菌混合培养液中，剂量大约是1ml，同样是在37℃的条件下进行振荡培养，时间大概是120min，然后把上述三者混合得来的液体在4℃的条件下按照4000转/min的速度进行离心处理，时间大约是20min，再对其进行洗涤；接下来将1ml的大肠杆菌加入1ml的黏膜细胞溶液中，在37℃的条件下进行120min的培养，然后通过第二步骤的方法进行离心处理；离心完成之后，黏膜细胞会在缓冲液中悬浮；把悬浮的黏膜细胞在冰乙醇中进行固定，时间大概是15min，然后进行染色处理，时间大约0.5h，之后通过光学显微镜进行观察；最后就是用白细胞稀释管吸取混合液到计数板中，进行计数与计算。

第三就是复方中药免疫球蛋白生物制剂的体外抑菌试验

在大肠杆菌溶液中，分别加入复方中药免疫球蛋白生物制剂，添加剂量是0.05g，效价分别是0.1：160/1：640/1：2560，在合适的温度条件下进行培育，时间分别是60min、180min和300min，进行计数和菌数的检查。

2.3 关于实验的结果

首先关于体外黏附实验

三种菌种都能够在分离的新生仔猪十二指肠和回肠的小肠上皮细胞上进行吸附，只是黏附的数量有所差异，其中以K88的黏附个数最多，是18.5个。1：2560效价的复方中药免疫球蛋白生物制剂祖辈中，黏附度是基本相同的，这就可以说明上皮细胞的受体也是相同的。

其次关于复方中药免疫球蛋白生物制剂的体外抑菌实验

分别在三种菌种中加入复方中药免疫球蛋白生物制剂，在最初的60min到180min的时间里，抑菌作用是最强的，但是等到过了三个小时，抑菌作用不仅仅开始减弱，而且减弱是非常急剧的，等到了五个小时的时候，抑菌作用完全消失。从实验的结果可以看出来，复方中药免疫球蛋白生物制剂对于三种菌种的抑菌效果是相同的。

3 结论

从实验可以得出如下结论，如果时间在60～180min这个范围，那么1：160、1：640和1：2560效价的复方中药免疫球蛋白生物制剂的抑菌作用是最为显著的，等到过了180min以后，抑菌作用的减弱极为迅速，等到300min的时候作用完全消失，这就说明复方中药免疫球蛋白生物制剂的确是有抑菌作用的，主要原因很有可能是生物制剂中的免疫球蛋白直接黏附在病原菌的细胞壁上，从而导致细胞的完整性得以改变，对细菌的生长起到了抑制性作用，却并不能将细菌完全杀死。也就是说，这些作用在一定程度上抑制了大肠杆菌的繁殖，仔猪发病的时间也因此而推迟，当新生仔猪逐渐长大的时候，抵抗力逐渐增强，这就导致发病率大大降低，实现对仔猪腹泻的预防作用。

[1] 陈瑞芳，杜祯，孟日增.新生仔猪腹泻体外抑菌治疗的研究[J].黑龙江畜牧兽医，2008，（6）：82-83.

[2] 周然，张和平.抗仔猪腹泻乳抗体的分离制备及体外抑菌特性的研究[J].内蒙古科技与经济，2004，（24）：49-51.

[3] 张平.复方中药免疫球蛋白生物制剂治疗新生仔猪腹泻的药物作用机制的研究[D].内蒙古大学，2015.