万山区牛传染性胸膜肺炎的流行病学调查报告

2017-01-17张倩倩田贵刚

中国畜牧兽医文摘 2017年10期

关键词：微量胸膜病原

张倩倩田贵刚

（贵州省铜仁市万山区农牧科技局，贵州万山554300）

万山区牛传染性胸膜肺炎的流行病学调查报告

张倩倩田贵刚

（贵州省铜仁市万山区农牧科技局，贵州万山554300）

为了掌握本地黄牛传染性胸膜肺炎的流行状况，提供有效防控措施。万山区历时3个月对全区存栏黄牛按0.5%的比例采样，并采用微量凝集试验筛选和病原分离培养的方式进行检测。通过检测结果显示，血清学检出阳性率为0.01%，病原检测阳性率为0%。可见本地区黄牛暂无传染性胸膜肺炎病的发生与流行。

黄牛胸膜肺炎调查

牛传染性胸膜肺炎又也称牛肺疫，是由丝状支原体引起的一种高度接触性传染性肺炎。牛支原体是一种多系统炎症的致病性病原体，各种牛均易感染，发病率60%以上，死亡率30%～50%。病牛和带菌牛是本病的主要传染来源；传播途径主要以呼吸道感染，也可经消化道或生殖道感染。而牛传染性胸膜肺炎是以肺间质淋巴管、结缔组织和肺泡组织的渗出性炎症及浆液性纤维素性胸膜肺炎为主要特征[1]。世界动物卫生组织（OIE）将本病列为A类法定传染病，我国将其列为一类传染病。本病几乎在所有养牛的国家都曾有发生，对养牛业造成巨大威胁。

1 材料和方法

1.1 样品来源

全区各乡镇畜牧站对本辖区内存栏牛按0.5%比例采集血清，共采集牛血清125份，并送区动物疫病预防控制中心实验室检测，本地区未进行牛传染性胸膜肺炎的疫苗的注射。对凝集反应阳性的个体牛，从活体无菌采集鼻拭子和鼻分泌物，并在第7肋和第8肋之间下半部无菌穿刺采集胸水。待检样品-20℃保存。

1.2 主要仪器及试剂

主要仪器：纯水仪、离心机、移液器、微量板、水浴锅、智能生物培养箱等；主要试剂：抗原、标准阳性血清和阴性血清，配制适宜支原体生长的培养基所需的系列试剂。

2 检测方法

采用血清学与病原学相结合的方式进行检测，即用微量凝集试验进行血清学检测，对微量凝集试验检测阳性反应的个体再采样进行病原培养[2]。具体操作严格按照检测规范进行。

2.1 血清学检测

2.1.1 操作方法

被检血清，对标准阴、阳性血清用灭菌生理盐水作1：4比例稀释，经56℃～58 ℃水浴锅灭能30min。抗原用灭菌生理盐水作1：8比例稀释。用微量加样器吸取被检血清25μl，加入微量板的一个孔中。再加抗原25μl于同一孔内，每份被检血清用一个孔。每板设阴、阳性血清和空白对照。轻轻摇动反应板混匀，放室温暗处或4℃～8℃冰箱内静置5～20h。

2.1.2 判定标准

凝集程度：“++++”为100%凝集；“+++”为75%凝集；“++”为50%凝集；“+”为25%凝集；“-”为不凝集。

2.1.3 判定方法

判定前轻轻振动反应板，再静置3-5min 即行判定。判定时用8 w日光灯照明，手持反应板，借助侧光在黑色背景上判定。受检血清出现阳性反应的需重复试验1次，如2次结果不一致时，应再复试1次，以2次以上试验结果一致时为准。在阴、阳性血清和生理盐水对照正确情况下，被检血清出现“ ++” 以上凝集的判为阳性；“+”和“-”为阴性反应。

2.2 病原学检测

2.2.1 样品准备

根据上述血清学检测结果，对5头凝集反应阳性的牛从活体无菌采集鼻拭子、鼻分泌物和胸水。样品采集送实验室时用运输培养基：其成分包括：不含蛋白胨和葡萄糖的心浸液，10%的酵母浸膏，20%马血清，0.3%琼脂，500IU/m1青霉素和醋酸铊（浓度1：7000）。样品低温保存。

2.2.2 病原培养

培养MmmSC需要适当的培养基。该微生物不稳定，含量少且生长又有特殊需要。该培养基须含有一种基础培养基（例如心浸液或蛋白胨），新鲜的优质酵母浸膏以及10%的马血清，另外还须加入葡萄糖、甘油、DNA、脂肪酸等营养成分，为防止其他杂菌生长，培养基加青霉素抑制剂，同时在培养基中加入1.0%～2.0%琼脂制成固体培养基。把样品编号后直接接种。37℃恒温培养，连续观察10d。在琼脂平板上未见小的中心致密的“煎蛋”样典型菌落。