肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因 6 的表达促进肝癌细胞 PLC/PRF5和 SMMC7721 的增殖和迁移

陈 潇，林志娟，李孟鹏，陈 超，王建勋，刘 佳，李培峰

·分子标志物·

肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因 6 的表达促进肝癌细胞 PLC/PRF5和 SMMC7721 的增殖和迁移

陈 潇，林志娟，李孟鹏，陈 超，王建勋，刘 佳，李培峰

目的观察肌细胞增强因子 2D(myocyte enhancer factor 2D，MEF2D) 对肝癌细胞 PLC/PRF5 和SMMC7721 增殖和迁移的影响，并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因 6(mitogen-induced gene 6，MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中 MEF2D 和 MIG6 转录水平的表达，以 MEF2D mRNA 表达量作为横坐标，以 MIG6 mRNA 表达量作为纵坐标，制作线性相关图；用小干扰 RNA(small interfering RNA，siRNA) 在 PLC/PRF5 细胞中下调 MEF2D 和 MIG6 后，通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit，7Sea-CCK) 和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力；用 siRNA 在 PCL/ PRF5 细胞中下调 MEF2D、用 MEF2D 过表达质粒在 SMMC7721 细胞系中上调 MEF2D 后，通过蛋白印迹检测法分别检测 MEF2D 和 MIG6 的蛋白质表达水平。 根据实验，共分为阴性对照(negative control，NC)组、siMIG6 组、siMEF2D 组、si2M(同时下调 MIG6 和 MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D 组 7 组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402 中 MEF2D mRNA、MIG6 mRNA 表达水 平 呈现负相关关系(r=-0.78) 。 细胞增殖实验，24 h 和 48 h 时，下调 MIG6 或 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMIG6 组或siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力无显著变化；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后，与 siMEF2D 组比较，si2M组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力无显著变化。 72 h 时，各组间方差分析差异有统 计学意义 (F=20.68、 P ＜0.01) ；下调 MIG6 后，与 NC 组比较，siMIG6 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力显著增强[ 光密度(optical density，OD)值为 3.73±0.18，t=3.84、P=0.02]；下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力显著下降(OD=1.79±0.22，t=3.95、P=0.02)；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后，与 siMEF2D 组比较，si2M 组中PLC/PRF5 细胞增殖能力增强(OD=2.99±0.03，t=4.83、P＜0.01)。 细胞划痕实验，各组间方差分析差异有统计学意义(F=42.27、P＜0.01) ；48 h 时，下调 MIG6 后，与 NC 组比较，siMIG6 组中 PLC/PRF5 细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为(51 ± 4)%，t=3.22、P＜ 0.05)]；下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中 PLC/ PRF5 细胞迁移能力显著下降[细胞迁移率为(19±3)%，t=7.70、P＜0.01]；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后，与siMEF2D 组比较，si2M 组中 PLC/PRF5 细胞迁移能力增强[细胞迁移率为(46±3)%，t=6.99、P＜0.01]。 蛋白质印迹检测，下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞 MIG6 蛋白表达水平显著上升(t= 7.86、P＜0.001)；上调 MEF2D 后，与空载对照组比较，MEF2D 组中 SMMC7721 细胞 MIG6 蛋白表达水平显著下降(t=4.61、P=0.004)。 结论 肝癌细胞 PLC/PRF5 和 SMMC7721 中 MEF2D 和 MIG6 表达量呈负相关关系，MEF2D 很可能通过负向调控 MIG6 的表达从而促进肝癌细胞 PLC/PRF5 和 SMMC7721 增殖和迁移。

肌细胞增强因子 2D；有丝分裂诱导基因 6；肝细胞癌；负向调控；细胞增殖；细胞迁移

肝 细 胞 癌 (hepatocellular carcinoma，HCC) 是 我国发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一。目前HCC 的病因和发病机制仍未确定，因此努力寻找HCC 治疗的特殊靶点，进而为肿瘤靶向治疗提供新思路尤 为 重 要。 肌 细 胞 增 强 因 子 2D(myocyte enhancer factor 2D，MEF2D) 最初被认为是肌细胞特异性 DNA 结合蛋白。 以往研究表明，MEF2D 在肝癌中表现为上调，而且临床肝癌样本中 MEF2D 增高与不良预后相关联[1]。 有丝分裂诱导基因 6(mitogen-induced gene 6，MIG6) 是一个抑 癌 基因， 它的缺失可以加快肿瘤进 程[2]。 本课 题组 前期 将肝 癌细胞中 MEF2D 下调后进行基因测序并通过 SAS 软件分析基因芯片结果，发现 MEF2D 可能参与了对 MIG6转录的负向调控，在肝癌中发挥重要的作用。 本研究检测 MEF2D 和 MIG6 在肝癌细胞 PLC/PRF5 和SMMC7721 中的表达情况，观察下调 MEF2D 和 MIG6后，PLC/PRF5 和 SMMC7721 细胞增殖和迁移能力变化，并探讨 MEF2D 对 MIG6 的负向调控作用机制，为肝癌的靶向治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞株 7702、PLC/PRF5、SMMC7721、hcclm3、Huh7、 HepG2、 7703、 Bel-7402、 Hela 购 自 中国科学院细胞库；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)和无 血 清 最 小 必 须 培 养 基 (Opti-Minimal Essential Medium，Opti-MEM)为美国 Gibco 公司产品；洛斯维-帕克纪 念 研 究 所 (Roswell Park Memorial Institute，RPMI)1640 培养基为美国 HyClone 产品；达尔伯克改良伊格尔培养基 (Dulbecco’s mo-dified Eagle medium，DMEM) 为美国 HyClone 产品；MEF2D 和 MIG6的小干 扰 RNA(small interfering RNA， siRNA) 购 自中国上海吉玛制药技术有限公司；空载对照质粒和MEF2D 质粒购自中国上海吉凯基因化学技术有限公司；互补 DNA(complementary DNA，cDNA) 反转录试剂盒 PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)RR047A、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR) 试剂 SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ购自中国大连 TaKaRa 公司；质粒大抽试剂盒 Endo-Free Plasmid Maxi Kit购自美国 Omega 公司；LipofectamineTM2000 转染试剂购自美国 Invitrogen 公司； XfectTM纳米颗粒转染试剂购自中国大连 TaKaRa 公司；细胞增殖与毒性检测试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit，7Sea-CCK)购自中国七海生物公司；细胞裂解液购自中国索莱宝公司； 二辛可宁酸 (bicinchoninic acid， BCA)蛋白浓度测定试剂盒购自中国索莱宝公司；脱脂奶粉购自中国伊利公司；MEF2D 抗体购自美国 BD Biosciences公司；MIG6 抗体购自美国 Cell Signaling Technology公司；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH) 抗 体 购 自 中 国博士德生物工程有限公司；辣根过氧化物酶标志山羊抗兔 IgG 和山羊抗小鼠 IgG 购自北京中杉金桥生物技术公司；ImmobilonTMWestern 发光检测试剂购自美国 Millipore 公司。 其余试剂为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 根据实验，共分为阴性对照(negative control， NC) 组、 siMIG6 组、 siMEF2D 组、si2M(同时下调 MIG6 和 MEF2D) 组、空白对照组、空载对照组、MEF2D 组 7 组。

1.2.2 细胞培养 PLC/PRF5、SMMC7721 细胞使用 RPMI1640 培 养 基， 7702、 hcclm3、 Huh7、 HepG2、7703、Bel-7402、Hela 细胞使用 DMEM，细胞培养液均含 10%FBS，按 100 ∶1的比例加入双抗，37 ℃、5% CO2条件下培养，每 2 d 换 1 次液，并用 0.25%的胰蛋白酶溶液进行传代。

1.2.3 细胞转染

1.2.3.1 siRNA 转染 将 PLC/PRF5 细胞接种于 6孔板于 37 ℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞汇合率达 70% ～ 80% 时，更换为 Opti-MEM 后进行转染；用100 μL Opti-MEM 柔 和 混 匀 5 μL siRNA 和 LipofectamineTM2000 转染试剂，室温放置 5 min 后混匀两者，室温放置 20 min 形成复合物；将 200 μL 复合物加入 6 孔板中，补足 Opti-MEM 至 2 mL，37 ℃ 、5% CO2条件下培养 48 h 后提取蛋白质。

1.2.3.2 质粒转染 将 SMMC7721 细胞接种于 6孔板于 37 ℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞汇合率达 70% ～80%时，更换新鲜含 10%FBS 的 RPMI1640培养液进行转染；用 100 μL Xfect反应缓冲液混匀 5 μL 质粒和 0.3 μL XfectTM纳米颗粒转染试剂，混合两者后涡旋数秒，室温放置 15 min 形成复合物；将200 μL 复合物加入 6 孔板中，补足 RPMI1640 培养液至 2 mL，37 ℃ 、5%CO2条件下培养 48 h 后提取蛋白质。

1.2.4 RT-qPCR 收集 Hela、7702、hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、 HepG2、 7703、 Huh7、 Bel-7402 细 胞， 用Trizol法提取总 RNA，反转录后进行 RT-qPCR 扩增，反应 体 系 为 20 μL； RT-qPCR 检测 细 胞 中 MEF2D mRNA、MIG6 mRNA 表达水平。 Hela 细胞在此被作为阳性对照是因为该细胞已经被验证可以表达MEF2D[3]。 GAPDH 作为内参，每次实验均做 3 个重复孔。 最后以细胞中的 MEF2D mRNA 表达量作为横坐标，以 MIG6 mRNA 表达量作为纵坐标，制作线性相关图。 引物序列见表1。

1.2.5 细胞增殖能力检测实验 7Sea-CCK 法检测细胞增殖能力。 在 96 孔板中接种细胞悬液，每孔约2×103个细胞；转染 NC 组、siMIG6 组、siMEF2D 组、si2M 组后，分别于 0、24、48、72 h 检测；检测时每孔加入 10 μL 7Sea-CCK 溶液，并确保起始培养体积为100 μL，37 ℃ 细胞培养 箱 孵 育 1 h， 用酶 标仪 检测450 nm 处的光密度(optical density，OD) 值，以不含细胞的等体积空白培养基孔作本底，绘制细胞生长曲线，实验重复 3次。

1.2.6 细胞划痕实验 将细胞接种于 6 孔板于 37℃、5%CO2培养箱中培养，待细胞汇合率达 70% ～80%时，使用 200 μL 枪头比着直尺垂直用力划横线；用磷酸缓冲液冲洗 3 遍后，分别转染 NC 组、si-MIG6 组、siMEF2D 组、si2M 组，加入无血清的 RPMI 1640 培养液进行培养；分别于 0、48 h 用倒置显微镜观察迁移效果并拍照，实验重复 3 次；应用 Image Pro Plus 软件分别测量 0 h 和 48 h 时 PLC/PRF5 细胞划痕图的面积和高度，计算细胞迁移率。

1.2.7 蛋白质印迹检测 肝癌细胞 PLC/PRF5 和SMMC7721 转染 48 h 后，收集新鲜细胞加入细胞裂解液，低温高速离心 (4 ℃ 、12 000 r/min、30 min) ，提取细胞总蛋白。 BCA 蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白浓度测定后，相等蛋白上样量进行 10%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，转膜至聚偏氟乙烯上；加入由 Tris 缓冲盐溶液和吐温-20(Tris Buffered Saline with Tween-20，TBST) 配制的 5%脱脂奶粉封闭 1 h，加入一抗，4 ℃ 摇床过夜孵育，TBST漂洗 3 次，每次 10 min；加入相应的二抗，室温孵育1 h，TBST 漂 洗 3 次， 每 次 10 min。 膜 上 滴 加 发 光液，1 min 后通过化学发光成像系统( 法国 Vilber 公司 Solo 4S) 显色，实验重复 3 次以上；应用 ImageJ 软件测量灰度值分别检测 PLC/PRF5 和 SMMC7721细胞中 MIG6 和 MEF2D 蛋白的表达量。

1.3 统计学处理 应用 SPSS 19.0 软件，计量资料以均数±标准差(¯x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，2 组间进行比较采用 t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MEF2D mRNA、MIG6 mRNA 在肝癌细胞中的表达 正常肝细胞 7702 不表达 MEF2D，肝癌细胞Bel-7402、Huh7 中 MEF2D mRNA 表达水平很高，但MIG6 mRNA 表达水平却不高；肝癌细胞 hcclm3 中不表达 MEF2D mRNA，而 MIG6 mRNA 表达水平却很高(图 1)。 线性相关图中发现肝癌细胞 hcclm3、SMMC7721、 PLC/PRF5、 HepG2、 7703、 Huh7、 Bel-7402 中 MIG6 mRNA、MEF2D mRNA 表达水平呈现负相关关系(r=-0.78，图 2)。

2.2 下调 MIG6 和 MEF2D 后对肝癌细胞增殖的影响 不同时间点组间单因素方差分析见表 2。 24 h和 48 h 时，下调 MIG6 或 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMIG6 组和 siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力无显著变化；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后，与siMEF2D 组比较，si2M 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力无显著变化。 72 h 时，各组间方差分析差异有统计学意义(F=20.68、P ＜ 0.01)，下调 MIG6 后，与NC 组比较，siMIG6 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力显著增强，差异有统计学意义(OD=3.73±0.18，t= 3.84、P=0.02)；下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力显著下降，差异有统计学意义(OD=1.79±0.22，t=3.95、P= 0.02)；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后， 与 siMEF2D组比较，si2M 组中 PLC/PRF5 细胞增殖能力增强，差异有统计学意义(OD=2.99±0.03，t=4.83、P＜0.01)。 见图 3。

2.3 下调 MIG6 和 MEF2D 后对肝癌细胞迁移的影响 各组间方差分析差异有统计学意义(F=42.27、P＜0.01) 。 48 h 时，下调 MIG6 后，与 NC 组比较，si-MIG6 组中 PLC/PRF5 细胞迁移能力显著增强，差异有统计学意义[细胞迁移率为(51±4)%，t=3.22、P＜0.05]；下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中 PLC/PRF5 细胞迁移能力显著下降，差异有统计学意义 [ 细胞迁移率为 (19 ± 3)%， t=7.70、 P ＜0.01]；同时下调 MIG6 和 MEF2D 后， 与 siMEF2D组比较，si2M 组中 PLC/PRF5 细胞迁移能力增强，差异有统计学意义[细胞迁移率为(46±3)%，t= 6.99、P＜0.01]。 见图 4。

2.4 肝癌细胞中下调或上调 MEF2D 后对 MIG6的蛋白表达水平的影响 肝癌细胞 PLC/PRF5 和SMMC7721 中 MEF2D 和 MIG6 的蛋白灰度值见表3、4。 下调 MEF2D 后，与 NC 组比较，siMEF2D 组中PLC/PRF5 细胞 MIG6 蛋白表达水平显著上升，差异有统计学意义(t=7.86、P＜0.001)；上调 MEF2D后，与空载对照组比较，MEF2D 组中 SMMC7721 细胞 MIG6 蛋白表达水平显著下降，差异有统计学意义(t=4.61、P=0.004)。 见图 5。

3 讨论

MIG6 是一个独特的、即刻早期反应基因。 它作为一个接头蛋白，通过与上皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR) 胞内部分直接结合来抑制其酪氨酸激酶酶活性，是 EGFR 通路重要的负反馈调控因子[4-5]。 MIG6 在多种肿瘤细胞中表现为下调，甚至在多种人类肿瘤中都表现出高频率的等位基因缺失[6]。 已有研究表明，MIG6 可以抑制六价铬导致的 DNA 损伤且阻止人肺上皮细胞的转化，降低肺致癌的可能性[7]。 MIG6 也可以作为一个关键的肿瘤抑制子阻止子宫内膜癌的发生[8]。MIG6 的下调能促进肝癌细胞的迁移能力，促进肝癌细胞的增殖及抑制凋亡[9]。 本研究中，下调 MIG6后，发现肝癌细胞 PLC/PRF5 和 SMMC7721 的增殖能力和迁移能力均显著增强，说明该基因在肝癌中起到一个抑癌基因的角色。 MEF2D 属于转录调节因子 MADS-box 家族，最初被认为是肌细胞特异性DNA 结合蛋白，多结合在许多肌特异性基因的调控区域控制转录过程，在多种发育和生理过程中发挥重要功能[10]。 目前大量的研究已证实，MEF2D 参与了多种细胞的信号传导过程。 在白血病中，MEF2D可与其他基因形成融合基因导致染色体易位，形成异常的信号转导通路，从而促使白血病形成和发展[11-12]。 在癌细胞中，MEF2D 还可以受到很多微小RNA(microRNA，miRNA) 的调控，如在胃癌细胞中，miR-19 可以抑制 MEF2D 的表达并抑制 Wnt/β-catenin通路的激活[13]； 在肺 癌细胞中， miR-218 也可以直接抑制 MEF2D 的表达来抑制肺癌细胞的增殖[14]。除此之外，MEF2D 在调节癌细胞分化、增殖和存活等方面也发挥着重要的作用[15-16]。

近几年，一些 MEF2D 是如何直接调控肿瘤生物学功能的研究机制也陆续报道。最近已有研究表明，MEF2D 能将微环境刺激传达给 E 盒结合锌指蛋白 1，促进结直肠癌细胞的上皮-间充质细胞转化和转移[17]；MEF2D 也可以通过结合 Pokemon 基因的启动子区域促进其转录，两者协同可以促进肝癌细胞的浸润[18-19]。 然而，MEF2D 与 MIG6 之间的调控关系在此之前鲜见报道。 本研究表明，在肝癌细胞中 MEF2D mRNA、MIG6 mRNA 表达 水平 呈现 负相关关系，提示 MEF2D 和 MIG6 之间可能存在着某种调控关系。本研究首先通过细胞增殖检测实验和细胞划痕实验检测了分别下调 MEF2D 或 MIG6 后肝癌细胞 PLC/PRF5 的增殖和迁移能力，结果与文献报道保持一致[9]。 然后，在肝癌细胞 PLC/PRF5 中同时下调 MEF2D 和 MIG6 后，发现同时下调 MEF2D和 MIG6 后消除了单下调 MEF2D 对肝癌细胞 PLC/ PRF5 增殖和迁移的抑制能力，表明 MEF2D 与 MIG6之间确实存在负调控关系。 最后，通过蛋白质印迹法进行验证，在 PLC/PRF5 细胞中下调 MEF2D 后，MIG6 的蛋白表达水平明显上升；在 SMMC7721 中上调 MEF2D 后，MIG6 的蛋白表达水平显著下降。 提示 MEF2D 也许可以通过结合 MIG6 基因的启动子区域的顺式作用元件来促进其转录。

在今后的工作中应继续探讨 MEF2D 负向调控MIG6 的作用机制，进一步确定 MEF2D 是否结合并通过 MIG6 启动子上游顺式作用元件来调控靶基因的转录。 由于 MEF2D 和 MIG6 在肿瘤中起到的关键作用，关于两者作用机制的深入研究对肝癌的靶向治疗具有重大意义。

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Myocyte enhancer factor 2D promotes the proliferation and migration of hepatoma cells PLC/PRF5 and SMMC7721 by negatively regulating mitogen-induced gene 6 expression

CHEN Xiao1， LIN Zhijuan1， LI Mengpeng1， CHEN Chao1， WANG Jianxun1， LIU Jia2， LI Peifeng1
(1.Institute for Translational Medicine， Qingdao University， Qingdao Shandong 266071， China；2.School of Pharmacy， Qingdao University， Qingdao Shandong 266071， China)

ObjectiveTo study the effects of myocyte enhancer factor 2D(MEF2D)on proliferation and migration of hepatoma cells PLC/PRF5 and SMMC7721， and regulating the expression ofmitogen-induced gene 6(MIG6).MethodsThe mRNA levels of MEF2D and MIG6 were detected by real time fluorescence quantitative PCR in hcclm3， SMMC7721， PLC/PRF5， HepG2， 7703，Huh7， Bel-7402 cell lines and we drew a linear correlation diagram with “ MEF2D mRNA expression” on the horizontal axis and “ MIG6 mRNA expression” on the vertical one in these hepatoma cell lines.The expression of MEF2D and MIG6 were down-regulated by small interfering RNA(siRNA)，then the proliferation and migration were observed by 7Sea-Cell Counting Kit(7Sea-CCK)and wound healing assay in PLC/PRF5 cell lines.The expression of MEF2D and MIG6 were detected by western blot after MEF2D down-regulated by siRNA in PLC/PRF5 cell lines or up-regulated by plasmid in SMMC7721 cell lines.The experimental were divided into seven groups:negative control (NC)group， siMIG6 group， siMEF2D group， si2M(both MEF2D and MIG6 were down-regulated) group ， blank group， empty vector plasmid group and MEF2D group.ResultsWe found that the level of MEF2D mRNA was negatively correlated with expression of MIG6 mRNA in hcclm3，SMMC7721， PLC/PRF5， HepG2， 7703， Huh7， Bel-7402 cell lines(r=-0.78).Next， the results analyzed by 7Sea-CCK showed that the proliferation ability was significantly enhanced at 72 h after siMIG6 treatment compared with NC group in PLC/PRF5 cell lines(OD=3.73±0.18， t=3.84， P= 0.02) ， while there was no change at 24 h and 48 h.However， the proliferation ability was significantly suppressed at 72 h under MEF2D knockdown condition in PLC/PRF5 cell lines compared NC group(OD=1.79 ± 0.22， t=3.95， P=0.02) ， but the proliferation ability was significantly increased at 72 h under MEF2D and MIG6 both knockdown condition compared with siMEF2D group (OD=2.99±0.03， t=4.83， P ＜ 0.01).Furthermore， wound healing assay revealed that the cell mobility in siMIG6 group was significantly increased[cell mobility=(51±4)%， t=3.22， P＜0.05] at 48 h compared with NC group and the cell mobility in siMEF2D group was significantly reduced [cell mobility=(19±3) ， t=7.70， P＜0.01]in PLC/PRF5 cell lines， but the cell mobility in si2M group was significantly increased at 48 h compared with siMEF2D group[cell mobility=(46±3)%，t=6.99， P＜0.01].The result of western blot showed that， compared with NC group， the expression of MIG6 was significantly increased under MEF2D siRNA treatment in PLC/PRF5 cell lines(t= 7.86， P ＜ 0.001) ， while its level was significantly decreased by the elevated level of MEF2D in SMMC7721 cell lines(t=4.61， P=0.004).ConclusionThe expression of MEF2D was negatively correlated with the level of MIG6 of PLC/PRF5 and SMMC7721 cell lines.Thus， MEF2D promotes the proliferation and migration of PLC/PRF5 and SMMC7721 cell lines possibly through negatively regulating MIG6 expression.

Myocyte enhancer factor 2D(MEF2D) ； Mitogenin-duced gene 6(MIG6) ；Hepatocellular carcinoma； Negative regulation； Cell proliferation； Cell migration

Q522；R329.2＋8；R735.7

A

2095-3097(2017)01-0006-07

10.3969/j.issn.2095-3097.2017.01.002

2016-12-01 本文编辑:张在文)

国家自然科学基金青年项目(81502065)；山东省自然科学基金青年项目(ZR2014HQ009)；中国博士后科学基金特别资助项目(2016T90613)；中国博士后科学基金面上项目(2015M580574)；山东省博士后创新项目(201602037)；青岛市自主创新计划应用基础研究项目(16-5-1-56-JCH)；青岛市博士后应用研究项目(2015167)

266071 山东 青岛，青岛大学转化医学研究院(陈 潇，林志娟，李孟鹏，陈 超，王建勋，李培峰)，药学院(刘 佳)

刘 佳，E-mail:dadaliujia＠qdu.edu.cn；李培峰，E-mail:peifli＠qdu.edu.cn