Folin-Ciocalteu法测定水果中多酚含量

2017-01-04李启彭寸镜楠赵仲霞罗家刚沈燕琼

浙江农业科学 2016年12期

关键词：昭通法测定果皮

李启彭，寸镜楠，赵仲霞，罗家刚，沈燕琼

（1.昭通学院化学与生命科学学院，云南省昭通 657000；2.昭通市农产品质量安全中心，云南省昭通 657000）

Folin-Ciocalteu法测定水果中多酚含量

李启彭1，寸镜楠1，赵仲霞1，罗家刚1，沈燕琼2*

（1.昭通学院化学与生命科学学院，云南省昭通 657000；2.昭通市农产品质量安全中心，云南省昭通 657000）

采用超声波法提取昭通特色水果中的多酚，并用Folin-Ciocaltue法测定其含量。试验结果表明，红玫瑰葡萄、红富士苹果、雪花梨和山楂的果皮和果实中多酚含量分别为11.1624、10.1081、26.3451、67.1485 mg·g-1和1.7511、3.7478、15.7872、19.7410 mg·g-1。该试验可为昭通特色水果的开发及深加工提供理论依据。

超声波法；Folin-Ciocaltue法；水果；多酚

多酚（polyphenol）又称为植物单宁，广泛存在于植物的皮、叶、果实以及根中［1-2］。该类化合物具有抗氧化、清除机体自由基、预防高血压和冠心病等功效，被广泛应用于食品、药品和医药等领域［3-6］。目前，多酚的提取方法主要有溶剂萃取法、超声波法、微波法和超临界萃取法等［7-9］。此外，多酚含量的测定方法有福林酚法、酒石酸亚铁法和高锰酸钾法等［10-12］。各种提取和测定方法均有利弊，需要根据不同的研究目的而采用不同的提取及测定方法。昭通市地处滇东北，素有“锁钥南滇，咽喉西蜀”之称，该地区属于高原季风干燥型气候，日照充足，有利于水果的生长，很多昭通水果闻名省内外，深受人们的喜爱。目前，只有少量的报道关于昭通特色水果中多酚的研究，然而系统研究各种特色水果中多酚的含量仍然需要［13-14］。因此，系统研究昭通各种特色水果中多酚的提取及含量测定方法，为昭通特色水果的开发利用、深加工以及合理选择膳食提供理论依据，具有重要的研究意义。

1 材料与方法

1.1 材料

供试水果有红玫瑰葡萄、红富士苹果、山楂和雪花梨，均为昭通特色水果，购买自昭通市农贸市场。

1.2 标准液配制

准确称取没食子酸标准品5.0 mg，溶解于8.0 m L甲醇中，以蒸馏水定容至100 m L，摇匀备用，可得50.0 mg·L-1没食子酸标准溶液（现配现用）。准确吸取上述标准液1 m L于25 m L的容量瓶中，加入1 m L Folin-Ciocaltue试剂充分震荡，再加入8 mL 50 g·L-1的Na2CO3溶液，充分摇匀，静置45 min［13-14］。用紫外分光光度计在500～900 nm波长范围内扫描测定其吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图，选择最大吸收波长。

1.3 标准曲线的绘制

分别吸取50 mg·L-1的没食子酸标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 m L于25 m L的容量瓶中，依次加入80%甲醇1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2和0.1 m L，摇匀，再分别加入1 m L的Folin-Ciocaltue试剂充分震荡后，依次加入8.0 m L的50 g·L-1Na2CO3溶液充分摇匀，静置45 m in，在765 nm波长处测定其吸光度［13-14］。

1.4 待测样品的制备

将红玫瑰葡萄、红富士苹果、山楂和雪花梨洗净，分离果皮和果肉，然后在80℃恒温烘箱中干燥24 h，冷却后粉碎。分别称取粉碎的4种水果的果皮样品50 mg于圆底烧瓶中，加入5 mL 80%甲醇，在25～40℃及53 kHz超声波提取40 min后过滤，在同等条件下重复2次，合并滤液，并用蒸馏水定容至100 m L备用［13-14］。分别称取粉碎的4种水果的果肉1 000 mg于圆底烧瓶中，加入15 m L 80%甲醇，在25～40℃及53 kHz超声提取40 m in后过滤，在相同条件下重复2次，合并滤液并用蒸馏水定容至250 m L备用。分别取上述4种水果的果皮和果肉提取液1 m L加入1 m L Folin-Ciocaltue试剂，充分震荡，加入8.00 m L的50 g·L-1Na2CO3溶液，充分摇匀静置45 min后，在765 nm波长处测定其吸光度［13-14］。按上述方法重复3次，计算其相对标准偏差。

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长的选择

用紫外分光光度计在波长500～900 nm范围内扫描测定吸光度。图1表明，标准液显色反应后最大吸收峰在765 nm左右。因此，以765 nm作为最大吸收波长。

图1 没食子酸标准液的最大吸收波长

2.2 标准曲线的建立

在765 nm处测定系列标准溶液的吸光度，然后根据没食子酸标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。将上述数据进行线性处理，得到回归方程为：Y=0.126 46 X+0.055 42，R2=0.999 24（图2）。

2.3 水果中多酚含量的测定

采用超声波法提取昭通特色水果中的多酚，并以没食子酸为标准溶液，Folin-Ciocaltue做显色剂，在765 nm处测定其吸光度，代入线性回归方程，计算出样品中多酚的含量。表1显示，红玫瑰葡萄、红富士苹果、雪花梨和山楂的果皮和果肉中多酚含量分别为11.162 4、10.108 1、26.345 1、67.148 5 mg·g-1和1.751 1、3.747 8、15.787 2、19.741 0 mg·g-1。试验结果表明，不同水果的果肉和果皮中多酚的含量各不相同，且果皮的多酚含量高于果肉［13-15］。