多粘类芽孢杆菌防治铁皮石斛细菌性叶斑病及促生效果

徐桑尔，卢 鹏，金莉萍，王勇军*

（浙江农林大学a.林业与生物技术学院，b.生物农药高效制备技术国家地方联合工程实验室，浙江临安 311300）

多粘类芽孢杆菌防治铁皮石斛细菌性叶斑病及促生效果

徐桑尔a，卢 鹏b，金莉萍a，王勇军ab*

（浙江农林大学a.林业与生物技术学院，b.生物农药高效制备技术国家地方联合工程实验室，浙江临安 311300）

采用双层培养法测定了生防细菌多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病病原细菌的拮抗活性，温室试验测定了CF05防治铁皮石斛细菌性叶斑病的效果。结果表明，CF05菌剂显著抑制铁皮石斛细菌性叶斑病病原细菌的生长，对病害的防治效果达到63.6%。同时，CF05菌剂显著促进铁皮石斛的生长，鲜质量提高了31.0%，侧芽增加31.58%。

多粘类芽孢杆菌；铁皮石斛；细菌性叶斑病

铁皮石斛（Dendrobium officinal Kimura et Migo）为兰科石斛属多年生草本植物，是一种重要的药用植物，已在我国进行了大面积栽培。当前，一种由萎蔫短小杆菌（Curtobacterium flaccum faciens）引起的细菌性叶斑病在浙江很多铁皮石斛种植大棚发生严重，导致产量损失严重［1］，亟待安全有效的防治措施。

多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）是一种广泛存在于土壤、植物体内的根际促生菌，对真菌、细菌、线虫等引起的植物病害具有防治效果，是一种安全高效的生物农药。多粘类芽孢杆菌通过产生多种抗生素及酶等物质拮抗植物病原菌的生长，诱导植物产生水杨酸，诱发植物系统抗性，合成植物生长素、细胞分裂素等物质促进植物生长，具有溶磷、固氮等活性［2］。本研究测定了多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病的防治效果和促生效果。

1 材料与方法

1.1 材料

生防菌多粘类芽孢杆菌CF05分离自浙江天目山柳杉土壤中，本实验室保存［3］。5×1010·m L-1芽孢杆菌液由生物农药高效制备技术国家地方联合工程实验室通过发酵制备，用水稀释至108· m L-1。病原菌萎蔫短小杆菌YJ-05分离自发病的铁皮石斛，本实验室保存［1］。温室生物防治效果测定在临安天目山铁皮石斛潘山基地，供试植物为6个月幼苗。

1.2 方法

1.2.1 双层培养法测定CF05对植物病原细菌的拮抗作用

取10μL CF05菌悬液点于LB培养基上，每皿1点，30℃培养36 h后，用三氯甲烷熏蒸10～12 h，杀死细菌；制备1×109·m L-1的病原细菌菌悬液，取100μL病原菌菌悬液加入到10 m L融化后冷却至45℃左右的半固体LB培养基中，迅速混匀，倒入经过熏蒸后的多粘类芽孢杆菌培养基上，均匀铺平，30℃培养24 h，观察抑菌圈。

1.2.2 CF05防治铁皮石斛细菌性叶斑病的效果测定

采用每盆20 m L稀释后的CF05芽孢菌液进行灌根处理，空白对照（CK）为20 m L清水。每处理设重复3次，随机区组排列。每个重复100盆，分别于2015年4月24日和2015年5月11日进行2次灌根，2015年6月30日调查病情指数。病级参考郭晓强等［4］进行划分。

1.2.3 铁皮石斛促生能力测定

按照1.2.2节进行处理，灌根2次后，称量植株鲜质量，计算植物侧芽数。

1.3 数据统计与分析

试验数据采用DPS v7.05数据系统进行统计分析，显著性水平采用Duncan’s新复极差法分析。

2 结果与分析

2.1 CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病病原菌的拮抗作用

从图1可以看出，多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病病原菌具有明显的拮抗效果，抑菌圈明显，说明CF05菌株可产生活性较强的拮抗物质。

图1 多粘类芽孢杆菌对铁皮石斛细菌性叶斑病病原菌的拮抗作用

2.2 CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病的防治效果

从表1可以看出，CF05芽孢菌液处理后病情增长率为32.8%，明显低于对照的90.1%，防治效果达到63.6%，说明CF05对铁皮石斛细菌性叶斑的扩展具有明显的抑制作用，防治效果显著。

表1 多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病的防治效果

2.3 CF05对铁皮石斛的促生效果

从表2可以看出，多粘类芽孢杆菌CF05处理的铁皮石斛生长势明显较对照好，叶片幼嫩新鲜，鲜质量较对照增加了31.0%。多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛侧芽的萌发具有明显的促进作用，增加率达到31.5%。因此，多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛具有显著的促生效果。

表2 多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛的促生效果

3 小结与讨论

随着化学农药的大量使用，环境安全和食品安全等问题日趋严重，安全高效的生物农药可成为替代化学农药的首选，生物农药的研究和应用也成为当前植物病虫害防治的热点。本试验测定了多粘类芽孢杆菌CF05对铁皮石斛细菌性叶斑病的防治效果和促生效果，表明多粘类芽孢杆菌可有效防治铁皮石斛细菌性叶斑病，并具有显著的促生效果，是一种药肥双效的微生物菌剂，表现出很好的推广应用价值。当前，活体生物农药在农业上的广泛推广使用仍面临稳定性不好、效果不高、生产成本偏高等问题［5］，今后将针对微生物遗传改良、发酵工艺优化及农药制剂品种改良等方面来开展下一步研究。

［1］ WANG Y，JIN L，LU P.First report of bacterial leaf spot caused by Curtobacterium flaccum faciens on Dendrobium officinale Kimura et Migo in China［J］.Plant Disease，2016，100（2）：515.

［2］ 苍桂璐，张付云，杨阳，等.多粘类芽孢杆菌的研究进展［J］.安徽农业科学，2013（2）：487-489.

［3］ 郭芳芳，谢镇，卢鹏，等.一株多粘类芽孢杆菌的鉴定及其生防促生效果初步测定［J］.中国生物防治学报，2014（4）：489-496.

［4］ 郭晓强，李翔，赵志强，等.不同杀菌剂对花生叶斑病防治效果及产量影响的研究［J］.花生学报，2014（1）：56-60.

［5］ 陈军，孙冬丽，缪有志，等.微生物农药的研究进展［J］.安徽农业科学，2010，38（23）：12561-12563.

（责任编辑：侯春晓）

S432.4+2；S567.23+9

：A

：0528-9017（2016）12-2033-02

文献著录格式：徐桑尔，卢鹏，金莉萍，等.多粘类芽孢杆菌防治铁皮石斛细菌性叶斑病及促生效果［J］.浙江农业科学，2016，57（12）：2033-2034.

10.16178/j.issn.0528-9017.20161233

2016-09-27

浙江省“三农六方”科技协作计划

徐桑尔（1993—），女，浙江绍兴人，硕士研究生，从事植物病理学研究工作，E-mail：610674352@qq.com。

王勇军（1981—），男，江西抚州人，副教授，从事微生物农药开发工作，E-mail：wangyj@zafu.edu.cn。