液基配合DNA-ICM技术在乳腺穿刺细胞学诊断中的应用

吴海远，项锋钢，孟凡鹏＊，许艳梅＊（青岛大学医学院，山东 青岛 266021；单县中心医院，山东单县 274300）

液基配合DNA-ICM技术在乳腺穿刺细胞学诊断中的应用

吴海远，项锋钢，孟凡鹏＊，许艳梅＊
（青岛大学医学院，山东 青岛 266021；⋆单县中心医院，山东单县 274300）

目的探讨液基配合DNA图像分析技术在乳腺肿块定性诊断中的差异，探讨液基配合DNA-ICM技术在乳腺癌普查中的应用价值。方法选择乳腺肿块患者行细针穿刺，同时行普通涂片、液基细胞制片和液基配合DNA-ICM共255例，以术后病理组织学检查结果作为对照，比较三种细胞学检查方法在乳腺肿块诊断中敏感性和特异性。结果普通涂片细胞学检查85.3%、液基细胞制片95.5%、液基配合DNA-ICM98.7%，各组比较，P均＜0.05,有显著性差异。普通涂片瑞氏染色细胞学检查82.8%、单纯液基巴氏染色细胞学检查94.9%、液基配合DNA-ICM检测99.0%，各组比较，P均＜0.05,有显著性差异。结论细针穿刺单纯液基巴氏染色细胞学检查及液基制片配合DNA-ICM技术优于普通涂片巴氏染色细胞学检查。

液基细胞学检查；DNA图像分析技术；乳腺肿块；细针穿刺

在我国，每年约160万人诊断为癌症以及120万因此而死亡，其中乳腺癌是城市女性癌症的第一位及农村女性癌症的第四位，且年轻化趋势明显，每年乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的12.2% 和9.6%[1]，早发现、早诊断对改善乳腺癌预后具有重要的临床价值，因此寻找一种设备简单、安全方便、无创或微创、费用低而诊断敏感性及特异性高的方法具有重要的临床意义。本文采用普通涂片瑞氏染色、单纯液基巴氏染色和液基制片配合DNA-ICM对乳腺肿块病变性质进行检测，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般材料 乳腺肿块患者予以细针穿刺，同时行普通涂片瑞氏染色细胞学检查、单纯液基巴氏染色细胞学检查、液基制片并配合DNA-ICM共255例，全部患者最终均有病理组织学检查。其中女性患者254例，年龄最小者19岁，年龄最大者87岁，平均年龄47岁,男性患者1例,年龄为77岁。

1.2 方法

1.2.1 细针穿刺 采用普通的一次性10ml注射器及5号针头进行穿刺。穿刺时患者取仰卧位，充分暴露患侧乳腺，局部皮肤消毒，左手固定肿块，右手持注射器经皮刺入肿块内负压抽吸，沿不同方向穿刺5到10次，见针头乳头部有吸出物时，慢慢退掉负压，拔掉针头。将吸出物涂片2～3张行普通涂片瑞氏染色，并将剩余吸出物注射入液基管中用于做液基染色制片。

1.2.2 制片方法 液基制片采用滴片法。在试管中加入1 ml细胞分散液，将置有前期处理后样本沉淀的离心管轻轻振荡5s,用一次性吸管取细胞悬液2滴加入细胞分散液中，混匀后再吸取混合液两滴垂直滴于载玻片正中，常温晾至半干后置于75%乙醇中固定。

1.2.3 染色方法 涂片采用瑞氏染色；液基滴片采用巴氏染色；DNA-ICM采用Fulgen染色。

1.2.4 涂片及液基制片形态学判断标准 由两名经验丰富的细胞学医师诊断：（1）阴性表现为正常的腺上皮细胞或良性病变：细胞圆形或卵圆形，大小一致，核染色均匀，核膜及核仁不明显。（2）可疑表现为明显增生或重度增生的乳腺上皮细胞：胞质量减少，核增大、拥挤，染色质稍增多，偶见核分裂。（3）阳性表现为乳腺癌细胞：细胞弥漫性分布，排列紊乱，细胞核常相差两倍以上、可见核分裂，核浆比例增大，核膜增厚、深染，核仁增大。

1.2.5 DNA-ICM阳性判断标准 DNA-ICM通过测定细胞核的积分光密度IOD来判断DNA的相对含量。（1）DNA-ICM诊断阴性病例：正常二倍体细胞为主，未见异型细胞。（2）DNA-ICM诊断可疑病例：出现1～3个DNA倍体异型细胞。（3）DNA-ICM诊断阳性：出现3个以上的异型细胞。

1.2.6 灵敏度及特异度评价 灵敏度=真阳性数/（真阳性数+假阴性数）；特异度=真阴性数/（真阴性数+假阳性数）；本研究中的阳性数包含了阳性和可疑阳性。

1.3 统计学处理 应用SPSS 17.0软件，采用fornage's 和χ2检验。

2 结果

应用SPSS 17.0软件，所获数据采用fornage’s统计学方法，对普通涂片瑞氏染色细胞学检查、单纯液基巴氏染色细胞学检查及液基制片配合DNA-ICM扫描三种检查方法的灵敏度及特异度进行比较。

2.1 病理组织学诊断结果 对255例乳腺肿块患者

行细针穿刺，三种检测方法与病理组织学诊断结果如下：瑞氏检查阴性105例，可疑阳性16例，阳性134例；巴氏检查阴性101例，可疑阳性7例，阳性147例。液基配合DNA阴性100例，可疑阳性2例，阳性153例；病理学检查阴性99例，可疑阳性1例，阳性155例。普通涂片瑞氏染色、液基巴氏染色、DNA扫描阳性结果见图1、2、3。

图1 普通涂片瑞氏染色（4X10）

图2 液基制片巴氏染色（4X10）

图3 DNA扫描阳性直方图及散点图

2.2 普通涂片、单纯液基细胞学及液基配合DNAICM检查的灵敏度及特异度 普通涂片瑞氏染色细胞学检查阳性中恶性133例，良性17例，阴性结果中恶性23例，良性82例，灵敏度为85.3%，特异度为82.8%。

单纯液基巴氏染色细胞学检查阳性中恶性149例，良性5例，阴性中恶性7例，良性94例，灵敏度95.4%，特异度为94.9%。

液基细胞制片配合DNA-ICM检查阴性中恶性154例，良性1例，阴性中恶性2例，良性99例，灵敏度98.7%，特异度为99.0%。

普通涂片瑞氏染色细胞学检查、单纯液基巴氏染色细胞学检查和液基配合DNA-ICM扫描在乳腺肿块穿刺诊断中的敏感性与特异性的比较见表1。

表1 三种检查方法的灵敏度与特异度的比较(%)

3 讨论

乳腺癌是中国女性最常见的恶性肿瘤，普查和早期诊断是降低乳腺癌死亡率的关键。细针穿刺吸取细胞学检查在临床上已经沿用很多年，它具有微创、安全、价廉、重复性好等特点，结合普通涂片HE染色细胞学检查能简便、快速、准确地对肿块的良恶性做出初步的判断，避免不必要的手术治疗[2]，但是普通涂片HE染色细胞学检查也有明显的局限性，如：细胞分布不均，漏诊率较高；视野内混有较多的血液、黏液等成分，不利于观察；受主观因素影响较为明显，判读结果差异较大。液基制片技术是指薄层制片自动装置制备的细胞学涂片的一项技术，该方法克服了传统细胞学涂片假阴性率较高的不足[3]，能够清除各种影响视野的杂质如血液等、使标本及时得到固定、细胞不易变形、还可以对诊断困难的患者再次制片及行免疫细胞化学检查，该制片方法细胞分布均匀，减少了漏诊的机会，固定快速、减少了制片时间[4-5]。保存液中的细胞经Thin Prep2000系统程序化处理后，随机取样制成均匀的薄层涂片，能最大限度地收集到癌细胞成分。我们行普通涂片瑞氏染色细胞学检查、单纯液基巴氏染色细胞学检查和液基配合DNA-ICM扫描的255例，全部标本均有术后病理组织学诊断作对照，据上述三种检查方法的敏感性和特异性结果比较分析如下。

3.1 单纯液基巴氏染色细胞学检查的敏感性95.5%明显＞普通涂片瑞氏染色细胞学检查的敏感性85.3%，同时单纯液基巴氏染色细胞学检查的特异性94.9%明显＞普通涂片瑞氏染色细胞学检查的特异性82.8%，三者间比较，P均＜0.05，有显著性差异，这可能与下列因素有关：液基制片细胞分布均匀、而普通涂片瑞氏染色细胞分布不均，漏诊几率较高；液基制片能够清除各种影响视野的杂质如血液等，易于发现异型或异常细胞，而普通涂片瑞氏染色视野内混有较多的血液、黏液等成分，不利于观察；液基制片客观性良好、固定快速、细胞不易变形破坏，普通涂片瑞氏染色制片受主观因素影响较为明显，易造成细胞变性，不易于诊断[4-5]。但是研究对象不同，收集的标本不同，所得到的结果也不同，庄鹏晖等在应用痰标本研究肺癌的结果，他们发现液基细胞学检查与普通涂片在敏感性与特异性方面无显著性差异，或许与研究对象有关，需进一步研究验证。

液基细胞学检查、液基制片配合DNA-ICM扫描均较普通涂片瑞氏染色在乳腺癌[6]的筛查中有更高的敏感性和更低的漏诊率，前两种方法做为乳腺肿块的早期定性诊断更具可靠性、更适用于早期乳腺癌的普查。但是液基细胞学检查、液基制片配合DNA-ICM扫描在乳腺癌的筛查中虽然误诊率较低，但也存在误诊的可能性，需应用其他检查方法进一步验证，否则可能造成误诊误治，给患者本人及家庭造成身体、精神巨大的伤害以及经济上的巨大损失。既往陈嫒等研究结果显示：随着DNA异倍体细胞数量的增加,液基细胞学检查的阳性率相应增加。换言之，如果癌变前期甚至于癌变的几率越大，液基配合DNA-ICM扫描的敏感性和特异性就越高，本研究与陈嫒等的研究结果基本相似，说明本研究具有临床应用价值。同时在陈嫒等人的研究结果中也发现：液基细胞学检查为正常或良性改变的9例妇女,由于DNA异倍体出现,组织病理学检查证实部分患者为癌变前期，DNA异倍体为阴性的15例患者，组织病理学却证实为恶性病变[7]；在本研究的结果中也有类似的现象：液基制片技术配合DNA-ICM结果为可疑阳性而病理学检查为良性的病例，主要是乳腺导管上皮内瘤变和乳腺非特异性炎；乳腺导管上皮内瘤变I级表现为DNA-ICM可疑阳性而病理学检查为良性，乳腺导管上皮内瘤变II级则表现为DNAICM阳性而病理学检查为可疑恶性，这样的结果提示可能在乳腺导管上皮内瘤变I级进展到乳腺导管上皮内瘤变II级的过程中，乳腺导管上皮细胞发生了质的变化。需要说明的是，乳腺非特异性炎则可能没有规律可循，为什么部分乳腺非特异性炎DNAICM可疑阳性而病理学检查为良性、而另一部分乳腺非特异性炎DNA-ICM和病理学检查均为良性呢？张智慧等[8]研究认为液基制片配合DNA-ICM对乳腺结核的诊断准确性欠佳，该组病例中的乳腺非特异性炎是否有潜在乳腺结核的可能性呢？目前尚不得而知。

3.2 液基配合DNA-ICM扫描优势明显 首先，在研究的255例患者中，液基配合DNA-ICM扫描发现155例阳性患者，而单纯液基细胞学检查发现154例阳性患者，使得该患者获得了及时诊治的机会，减少了漏诊的几率，液基配合DNA-ICM扫描使得4例只有极少量甚至单个的异倍体细胞的患者明确为恶性病变，使得漏诊率有所降低。在液基配合DNA-ICM扫描检查组与单纯液基巴氏染色细胞学检查组对比研究时发现，单纯液基巴氏染色细胞学检查组中的7例可疑阳性的患者，经液基配合DNA-ICM扫描其中的5例患者明确为阳性病例，提示液基配合DNAICM扫描技术对数目极少的异倍体细胞有更高的敏感性。其次，液基配合DNA-ICM扫描可以提供客观的数据，去除了诊断医师主观因素的影响，能避免诊断医师自身诊断能力不足、误判、阅片视野遗漏等诸多不足，能使得疾病的确诊率提高，避免了进一步的有创性、昂贵的检查，而且提高了早诊断的几率，避免延误甚至漏诊患者的病情。我们推测液基配合DNA-ICM扫描对于大样本筛查将会明显优于单纯液基细胞学检查，其意义重大。这会在今后的实际工作中积累样本进行相应研究进一步证实并尽早应用于临床实践。

[1] Kuramoto H,Iwami Y,Sugimoto N,et al.Application of a new Liquidbased Procedure for the Screening of Cerical Cancer:A Preliminary Study[J].Acta Cytol,2012,56(1):74-79.

[2] 陈瑾，贾忠.乳腺恶性肿瘤术前早期诊断方法比较与筛选[J].医学研究杂志，2006,35(4):19-22.

[11] Wang K P,Brower R,Haponik E F,Siegelman S.Flexible transbronchial needle aspiration for staging of bronchogenic carcinoma[J]. Chest,1983,84(5):571-576.

[3] Lee KR,Ashfag R,Birdsong GC,et al.Comparison of onventional papanicolaou smears and a fluid based,thinayer system for cervical cancer screening[J].Obstet Gyecol,1997,90(4):278-280.

[4] Mygdakos N,Nikolaidou S,Tzilivaki A,et al.Liquid Based Preparation (LBP)cytology versus Conventional Cytology in FNA samples from breast,thyroid,salivary gland and soft tissue.Our experience in Crete (Greece)[J].Rom J Morphol Embryol,2009,50(2):245-250.

[5] Piaton E,ynel J,tin K,al.Conventional liquid-based techniques versus cytyc Thinprep processing urinary samples:a qualitative approach[J].BMC Clin Pathol,2005,5（1）：9-16.

[6] National Cancer Institute.The 1989 Bethesda system for eporting cervical/vaginal cytological diagnoses[J].JAMA,1989,262（1）: 931-933.

[7] 陈媛，徐友娣.DNA定量分析和宫颈液基细胞学检查在宫颈病变中的诊断价值[J].实用妇产科杂志，2010，26（11）：845-848.）

[8] 张智慧，潘秦镜，孙耘田.针吸液基薄片与传统涂片的对比研究[J].中华肿瘤杂志，2004,26（2）：102-105.

The App lication of Liquid Based with DNA-ICM Technology in Cytological Diagnosis of Breast Diseases

Wu Haiyuan，Xiang Fenggang,Meng Fanpeng⋆,etal
(Medical College of Qingdao University,Qingdao 266021,Shandong；*Center Hospital of Shanxian County,Shanxian 274300,Shandong)

ObjectiveNow we have a comparison which is about Liquid-based with the DNA image cytometry technology,The aimis to observe differences in the qualitative diagnosis of breast masses and to study the application value of DNA-ICM liquid-based matching technique in breast cancer screening.MethodsThe outpatients and inpatients with breast masses were selected who underwent fine needle aspiration in Shanxian County Central Hospital from December 2012 to March 2014.The 255 patients were executed Liquid-based with the DNA image cytometry(DNAImage Cytometry,DNA-ICM)technology,the cytological examination of simple liquid-based Papanicolaou staining and W right's staining cytologic examination of general smear with postoperative pathologic examination as control group.The differences of the three kind of cytological examination compared about sensitivity and specificity in the diagnosis of breast mass.ResultsThe sensitivity of W right's staining cytologic examination of general smear,the cytological examination of simple liquidbased Papanicolaou staining and Liquid-based with the DNA image cytometry(DNAImage Cytometry,DNA-ICM)technology about the diagnosis of breast mass is 85.3%and 95.5%,98.7%,the difference is statistically significant(P＜0.05).The specificity of W right's staining cytologic examination of general smear,the cytological examination of simple liquid-based Papanicolaou staining and Liquid-based with the DNA image cytometry(DNAImage Cytometry,DNA-ICM)technology are better than the W right's staining cytologic examination of general smear.They can be used for the screening and diagnosis of breast masses as the preferred method.

Liquid-based cytology；DNA image cytometry technology；Breast mass；Fine needle aspiration

R-365

：A

：1008-4118（2016）01-0014-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.01.006

2015-06-29

吴海远（1984-），男，现在单县中心医院工作。研究方向：病理学。

项锋钢。E-mail:xiangfenggang@163.com。