核转录因子7类似物2基因rs7903146多态性与汉族女性乳腺癌的关系研究

刘桂红，刘静普，张 松，张怡梅，周卫华，张玉娜，刘月芹，朱铁年



·论著·

核转录因子7类似物2基因rs7903146多态性与汉族女性乳腺癌的关系研究

刘桂红，刘静普，张 松，张怡梅，周卫华，张玉娜，刘月芹，朱铁年

目的 探讨核转录因子7类似物2(TCF7L2)基因rs7903146多态性与汉族女性乳腺癌的关系。方法 选取2011年1月—2012年1月于河北医科大学第四医院住院治疗且符合纳入标准的女性乳腺癌患者564例作为乳腺癌组，另选取白求恩国际和平医院同期体检健康的女性394例作为正常对照组。取受试者外周血提取DNA，采用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)法对TCF7L2基因rs7903146位点进行基因分型。比较两组患者年龄、体质指数(BMI)以及TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率，并分析TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率与乳腺癌患者临床指标(诊断时年龄、绝经状态)和病理指标〔雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、人类表皮生长因子受体2(HER-2)状态、P53状态、Ki-67状态、淋巴结转移情况、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期、分子分型〕的关系。结果 两组患者年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)；乳腺癌组BMI大于对照组(P<0.001)。对照组和乳腺癌组TCF7L2基因rs7903146位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，表明研究样本具有群体代表性。两组均未检测出TT基因型,两组TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。诊断时年龄≥50岁、绝经后的乳腺癌患者CT基因型频率高于诊断时年龄<50岁、绝经前的乳腺癌患者(P<0.05)。ER状态、PR状态、HER-2状态、P53状态、Ki-67状态、淋巴结转移情况、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期及分子分型与乳腺癌患者CT基因型频率无关，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TCF7L2基因rs7903146多态性与乳腺癌的发生风险无关，其不是中国汉族女性乳腺癌的患病风险因子。

乳腺肿瘤；多态现象，遗传；核转录因子7类似物2基因；汉族

刘桂红，刘静普，张松，等.核转录因子7类似物2基因rs7903146多态性与汉族女性乳腺癌的关系研究[J].中国全科医学，2016，19(33)：4051-4055.[www.chinagp.net]

LIU G H,LIU J P,ZHANG S,et al.Correlation between rs7903146 polymorphism of transcription factor 7-like 2 gene and breast cancer in Chinese Han women[J].Chinese General Practice，2016，19(33)：4051-4055.

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，近年来中国乳腺癌发病率居女性恶性肿瘤首位,并以>3%的速度逐年递增。糖尿病是由遗传和环境因素共同引起的一组以糖代谢紊乱为主要表现的临床综合征，相关Meta分析显示，糖尿病患者罹患乳腺癌的相对风险为一般人群的1.2～1.5倍[1-5]。目前越来越多的研究表明，糖尿病与乳腺癌的发生存在一定联系[4-5]，但具体机制尚未明确。研究表明，乳腺癌与糖尿病均为多基因疾病[3-5]，两种疾病可能存在相同的基因突变。核转录因子7类似物2(TCF7L2)基因变异是迄今为止发现的引起2型糖尿病易患性增加最为显著的基因[6-9]，因此，本研究进一步研究了TCF7L2基因rs7903146多态性与中国汉族女性乳腺癌患病风险的关系，旨在为临床乳腺癌的治疗提供更多思路，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 纳入与排除标准 纳入标准：(1)汉族；(2)受试者间均无血缘关系；(3)乳腺癌患者均行单侧乳腺癌改良根治术，术后标本经病理和免疫组化检测证实为原发性乳腺癌；(4)体检健康者均无乳腺癌家族史及其他肿瘤史。排除标准：(1)乳腺原位癌；(2)双侧乳腺癌。

1.2 研究对象 选取2011年1月—2012年1月于河北医科大学第四医院住院治疗且符合纳入标准的女性乳腺癌患者564例作为乳腺癌组，另选取白求恩国际和平医院同期体检健康的女性394例作为对照组。

1.3 DNA基因提取 取所有受试者清晨空腹外周静脉血2 ml，采用DNA提取试剂盒(Promega公司)提取DNA(按说明书进行操作)，-80 ℃保存备用。

1.4 基因分型 采用聚合酶链式反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)法对TCF7L2基因rs7903146位点进行基因分型。PCR扩增上游引物5′-GGGGAGCCGTCAGATGGTAAT-3′；下游引物5′-TTGCCTTCCCTGTAACTGTGG-3′，PCR产物长232 bp。PCR反应体系中含基因组DNA 1 μl，10×PCR buffer 1.5 μl，MgCl21.5 μl，10 mmol/L dNTPs 0.3 μl，10 pmol/L引物各0.25 μl，5 U/μl热启动Taq DNA 聚合酶0.2 μl，进行PCR扩增。PCR扩增参数:94 ℃ 预变性2 min；94 ℃ 变性20 s，56 ℃退火20 s，72 ℃延伸40 s，35 个循环；72 ℃延伸3 min。检测TCF7L2单核苷酸多态性(SNP)rs7903146多态性的探针为通用探针:5′-P-AGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATATTT-FAM-3′；分型探针1:5′-TTAGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATAC-3′，产物长54 bp；分型探针2:5′-TTTTTAGAGAGCTAAGCACTTTTTAGATAT-3′，产物长57 bp。其中通用探针5′端磷酸化，3′端用荧光素FAM标记。配制10 μl LDR体系:10×连接酶buffer 1 μl，2 μl PCR产物，10 pmol/L分型探针及通用探针各0.01 μl，40 U/μl Taq DNA连接酶0.125 μl。反应程序:94 ℃变性30 s,56 ℃退火3 min，共30个循环。采用测序仪(型号：ABI 3730XL)进行检测：取1 μl连接产物，加10 μl上样loading(已混入Mark)，95 ℃变性3 min，立即冰水浴。

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本研究背景：乳腺癌与糖尿病的发病率均在逐年上升，越来越多的研究表明糖尿病与乳腺癌密切相关，有关糖尿病与乳腺癌的具体发病机制目前尚不清楚，关于二者相互作用的机制也无一致的结论。乳腺癌与2型糖尿病有共同的病因学，如肥胖、高胰岛素血症及胰岛素抵抗等。乳腺癌与2型糖尿病不仅具有相同的病因学，还在临床表现、群体遗传学背景等方面具有很多的相似性，鉴于这两种疾病的相似性，特别是在遗传学背景上的相似性，研究者常将2型糖尿病的易患基因作为导致乳腺癌发生的候选基因。

本研究创新之处：本研究旨在探讨糖尿病易患基因之一的核转录因子7类似物2(TCF7L2)基因多态性与中国汉族女性乳腺癌发病风险的关系。对于TCF7L2基因单核苷酸多态性的研究很多，但多集中在其与糖尿病发病的关系方面，有关TCF7L2基因与肿瘤关系的研究国外有少量报道，主要为TCF7L2基因与结肠癌及前列腺癌关系的研究。本研究主要分析TCF7L2基因与中国汉族女性乳腺癌发生的相关性，为疾病的预防和治疗提供理论基础。

本研究不足之处：本研究为病例对照研究，因时间跨度较大，本院乳腺癌免疫组化指标检测有所变动，故部分免疫组化指标数据缺失，可能对结果造成一定影响。

1.5 观察指标 比较两组患者年龄、体质指数(BMI)以及TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率，并分析TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率与乳腺癌患者临床指标(诊断时年龄、绝经状态)和病理指标〔雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、人类表皮生长因子受体2(HER-2)状态、P53状态、Ki-67状态、淋巴结转移情况、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期、分子分型〕的关系。病理指标均参照中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2013版)[10]进行判定。

2 结果

2.1 两组年龄、BMI比较 两组患者年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)；乳腺癌组BMI大于对照组，差异有统计学意义(P<0.001，见表1)。

2.3 TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率与乳腺癌患者临床指标的关系 诊断时年龄≥50岁、绝经后的乳腺癌患者CT基因型频率高于诊断时年龄<50岁、绝经前的乳腺癌患者，差异有统计学意义(P<0.05，见表3)。

2.4 TCF7L2基因rs7903146位点基因型与乳腺癌患者病理指标的关系 ER状态、PR状态、HER-2状态、P53状态、Ki-67状态、淋巴结转移情况、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期及分子分型与乳腺癌患者CT基因型频率无关，差异无统计学意义(P>0.05，见表4)。

3 讨论

TCF7L2也称T细胞转录因子-4(TCF-4)，该基因位于染色体10q25.3，长度约为215.9 kb，是一种含有高迁移率组(HMG)盒的转录因子[11]。研究表明，

表1 两组年龄和BMI比较Table 1 Comparison of age and BMI between two groups

表2 两组TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率分布比较〔n(%)〕Table 2 Comparison of distributions of CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 between breast cancer group and control group

表3 TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率与乳腺癌患者临床指标的关系〔n(%)〕Table 3 Association between CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 and clinical index of breast cancer patients

表4 TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率与乳腺癌患者病理指标的关系〔n(%)〕Table 4 Association between CC and CT frequencies in TCF7L2 gene rs7903146 and pathological index of breast cancer patients

TCF7L2有17个外显子，其中外显子4、13、14、15、16是选择性的，外显子9、16、17具有选择剪接的受体位点，不同的剪接方式可产生不同的基因剪接异构体，在羧基端产生短、中、长的开放阅读框架,只有长阅读框架才能与羧基端结合蛋白1(CtBP1)结合而抑制转录。TCF7L2表达产物具有高度变异性[12]。TCF7L2在人成熟的胰岛B细胞和脂肪组织中高表达,少量表达于血液和骨骼肌中[13]。TCF7L2在Wnt信号通路中有很重要的作用,能与细胞核内β连环蛋白(β-catenin)结合,通过细胞表面的Wnt信号通路调节相关基因的表达，从而在细胞增殖、正常胚胎形成及调节肌肉、脂肪组织形成方面起关键作用[14-15]，同时在胚胎发育过程中对胰腺、胰岛细胞的发育起至关重要的作用[16]。TCF7L2基因在肠内高表达，与结直肠癌的发生密切相关[17-21]。NAIDU等[22]研究表明，TCF7L2基因rs7903146(T)变异可能增加乳腺癌的发生风险，有可能成为乳腺癌的候选易感基因。这种变异还可能增加肿瘤远处转移风险。亦有研究表明，TCF7L2还可通过Wnt信号通路调节胰高糖素原基因的表达[23]，继而调节GLP-1(glucagon-like peptide-1)水平改变胰岛B细胞功能，从而参与葡萄糖稳态的调节。从既往研究中可知，TCF7L2基因与乳腺癌及糖尿病均有关[1-5]，因此本研究观察糖尿病易感基因TCF7L2是否与中国汉族人群乳腺癌的发生有关。

本研究结果显示，乳腺癌组患者BMI高于对照组，提示BMI可能是乳腺癌患病的影响因子，正常人群应注意控制饮食、增强锻炼以减轻BMI，降低乳腺癌的发生风险。乳腺癌组患者TCF7L2基因rs7903146位点CC、CT基因型频率分别为92.7%和7.3%，与对照组的89.3%、10.7%比较无差异，表明与CC基因型比较，CT基因型频率未显著改变乳腺癌的发生风险。分析乳腺癌患者不同临床指标发现，诊断时年龄≥50岁、绝经后的乳腺癌患者CT基因型频率高于诊断时年龄<50岁、绝经前的乳腺癌患者，表明TCF7L2基因rs7903146位点更可能是年龄≥50岁及绝经后女性患者的易感基因，因此需加强对该类人群的健康教育，包括积极体检，以早期发现疾病并治疗，提高患者的生存期。分析其不同病理指标发现，ER状态、PR状态、HER-2状态、P53状态、Ki-67状态、淋巴结转移情况、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期及分子分型与乳腺癌患者CT基因型频率无关，表明TCF7L2基因rs7903146多态性与乳腺癌的发生风险无关。到目前为止，只有两项有关TCF7L2基因rs7903146多态性与乳腺癌发生风险的研究，NAIDU等[22]采用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测来自马来群岛的387例乳腺癌患者及252例无任何肿瘤病史的健康女性的TCF7L2基因多态性发现，乳腺癌患者中rs7903146(T)等位基因频率明显高于正常人，而CT或TT基因型与乳腺癌的发生风险无关；然而携带T等位基因(CT+TT)或T基因型的女性乳腺癌风险明显增加，且rs7903146(T)与淋巴结转移有关。总之，TCF7L2基因rs7903146(T)变异可能增加乳腺癌的发生风险，成为乳腺癌的候选易患基因，这种变异还可能增加肿瘤远处转移的风险。CONNOR等[24]对西班牙裔及非西班牙裔白种女性的研究发现，TCF7L2基因rs7903146位点TT基因型显著增加乳腺癌的发病风险〔OR=1.24,95%CI(1.03，1.49)〕，且与ER(-)/PR(-)有关〔OR=1.56,95%CI(1.07，2.27)〕。不同研究结论有差异的原因可能与样本量不同、选取受试者的种族、个体特征如绝经状态及肿瘤的不同组织病理类型等有关。这些差异可能改变病例组和对照组基因型及等位基因频率，从而影响基因多态性与肿瘤发病风险的关系。

综上所述，TCF7L2基因rs7903146多态性与中国汉族女性乳腺癌的发生无关，但结论仍需进一步的大样本量研究进行验证。

作者贡献：刘桂红进行试验设计与实施、资料收集整理、撰写论文、成文并对文章负责；刘静普、张松、张怡梅、周卫华、张玉娜、刘月芹进行试验实施、评估、资料收集；朱铁年进行质量控制及审校。

本文无利益冲突。

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(本文编辑：毛亚敏)

Correlation between rs7903146 Polymorphism of Transcription Factor 7-like 2 Gene and Breast Cancer in Chinese Han Women

LIUGui-hong,LIUJing-pu,ZHANGSong,ZHANGYi-mei,ZHOUWei-hua,ZHANGYu-na,LIUYue-qin,ZHUTie-nian.DepartmentofEndocrinology,FourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China

Correspondingauthor:ZHUTie-nian,DepartmentofOncology,BethuneInternationalPeaceHospital,Shijiazhuang050082,China;E-mail:zhutienian@medmail.com.cn

Objective To investigate the correlation between the polymorphism of transcription factor 7-like 2(TCF7L2) gene and breast cancer in Chinese Han women.Methods According to the inclusion criteria,564 women with breast cancer who received treatment in the Fourth Hospital of Hebei Medical University from January 2011 to January 2012 were selected as the breast cancer group.394 healthy women who underwent physical examination at the same period in Bethune International Peace Hospital were selected as the normal control group.The DNAs were extracted from the peripheral blood of subjects.The genotypes of TCF7L2 gene rs7903146 was detected by polymerase chain reaction-ligase detection reaction(PCR-LDR).The age,body mass index(BMI) and genotype frequency of CC and CT in TCF7L2 gene rs7903146 of patients in two groups were compared,and the correlation between genotype frequency of CC and CT in TCF7L2 gene rs7903146 and clinical index(age and menopausal status at the time of diagnosis) and pathological index 〔estrogen receptor(ER) status,progesterone receptor(PR) status,human epidermal growth factor receptor 2(HER-2) status,P53 status,Ki-67 status,lymph node metastasis,tumor size,histological grade,tumor stage and molecular typing〕 of patients with breast cancer.Results There was no significant difference in age of patients between the two groups(P>0.05);BMI in breast cancer group was greater than that in the control group(P<0.001).The distribution of the TCF7L2 gene rs7903146 genotype in the control group and the breast cancer group were all in line with the Hardy-Weinberg equilibrium(P>0.05),which indicated that the study sample had group representativeness.Both of the two groups were not detected with TT genotypes.There was no significant difference in the frequencies of CC and CT genotypes in TCF7L2 gene rs7903146 between the two groups(P>0.05).The CT genotype frequency of breast cancer patients aged 50 or over after menopause at the time of diagnosis was higher than that of patients aged under 50 pre-menopause(P<0.05).There was no significant relationship between CT genotype frequency of ER status,PR state,HER-2 status,P53 status,Ki-67 status,lymph node metastasis,tumor size,histological grade,tumor stage as well as molecular typing in breast cancer patients(P>0.05).Conclusion The rs7903146 polymorphism of TCF7L2 gene is unrelated to the risk of breast cancer occurrence,and it is not the risk factor of Chinese Han women developing breast cancer.

Breast neoplasms;Polymorphism,inheritance;Transcription factor 7-like 2 gene；Han nationality

河北省卫生厅医学科学研究重点课题(20110466)

050011河北省石家庄市，河北医科大学第四医院内分泌科(刘桂红，周卫华，张玉娜，刘月芹)；白求恩国际和平医院肿瘤科(刘静普，张怡梅，朱铁年)；河北医科大学第三医院检验科(张松)

朱铁年，050082河北省石家庄市，白求恩国际和平医院肿瘤科；E-mail：zhutienian@medmail.com.cn

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2016.33.006

2016-03-13；

2016-09-06)