四种不同来源精子对ICSI治疗结局的影响分析

钟安　宋革　陈瑞玲

【摘要】 目的 比较四种来源精子进行卵胞浆内单精子注射（ICSI）的临床结局。方法 女方常规超排卵和取卵， 成熟卵子行ICSI注射， 比较采用睾丸精子组（A组）、附睾精子组（B组）、输精管精子组（C组）和射出精子组（D组）的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。结果 四组受精率、卵裂率及临床妊娠率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 而C组优胚率39.40%低于A、B、D组的49.86%、53.34%、49.08%（P<0.05）。结论 射出精子、睾丸精子、附睾精子和输精管精子可以通过ICSI技术治疗各种因素的男性不育。

【关键词】 卵胞浆内单精子注射；睾丸精子；附睾精子；射出精子；输精管精子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.23.073

男性不育是男科疾病中的常见病， 对于各种因素造成的重度少弱畸形精子症、无精子症的治疗一直较为困难。1992年Palermo等[1]发明了卵胞浆内单精子注射技术（ICSI）， 为严重男性因素不育的治疗带来了新的突破， 但不同来源的精子行ICSI治疗的结局是否有差异存在争议， 本研究对此进行初步的探讨， 报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集本院2014年3月～2015年12月因男方因素行ICSI治疗的不育症患者， 共397个周期， 不育原因为重度少弱畸形精子症、无精子症。依据精子来源不睾丸精子组（A组）83个周期、附睾精子组（B组）107个周期、输精管精子组（C组）18个周期和射出精子组（D组）189个周期。无精子症患者进入治疗周期前均行附睾穿刺或睾丸活检， 以明确附睾或睾丸内有无精子， 其中输精管精子组为双侧输精管结扎术后患者。重度少弱畸形精子症患者行ICSI治疗的标准为：精子浓度<5.0×106/ml， 前向运动精子（PR）<10%或正常精子形态（N）<2%。

1. 2 方法

1. 2. 1 常规超排卵 采用促性腺激素激动剂（GnRHa）进行降调节， 用卵泡生成激素（FSH）促超排卵， 当卵泡发育成熟后， 肌内注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）诱发排卵， 36～38 h后在B超引导下行取卵。

1. 2. 2 经皮附睾精子抽吸术（PESA）取精 患者取仰卧位， 常规消毒铺巾后， 5 ml 2%利多卡因生理盐水1：1稀释后精索局部麻醉阻滞。用连接7号针头的5 ml注射器抽取精子分离液约1 ml， 左手固定一侧附睾， 右手持注射器经皮穿刺附睾， 持续施加负压抽吸， 直至有乳白色附睾液体抽出， 将抽出的附睾液放入培养皿中， 在倒置显微镜下寻找活动精子。

1. 2. 3 睾丸取精术（TESA）取精 麻醉方法同上。固定一侧睾丸后用连接9号针头的10 ml注射器经皮穿刺睾丸抽吸， 将抽吸出的曲细精管置于培养皿中， 用注射器针头撕碎曲细精管， 倒置显微镜下寻找活动精子。

1. 2. 4 输精管取精 选择输精管较粗一侧， 5 ml 2%利多卡因生理盐水1：1稀释后局部麻醉后， 用输精管固定钳固定输精管于阴囊皮下， 用输精管分离钳撑开阴囊皮肤暴露输精管， 并用输精管固定钳固定输精管。用连接7号钝针头的5 ml注射器抽吸精子分离液约1 ml后， 插入近附睾端输精管， 边冲洗输精管边负压抽， 将抽出的输精管精液放入培养皿中， 在倒置显微镜下寻找活动精子。

1. 2. 5 射出精子获取 禁欲4～7 d， 手淫法取精， 将全部精液射入取精杯中， 放入37℃ 、5% CO2培养箱中， 待精液液化后， 采用梯度离心法进行处理。

1. 2. 6 受精、移植及临床妊娠情况的判定 取卵后3～4 h行ICSI， 受精后16～18 h观察受精情况。取卵后第3天选择评分最高的1～3个胚胎进行移植。移植后2周测血HCG确定有无妊娠， 5周后 B超观察有无临床妊娠和有无多胎妊娠。

1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

A组受精率为87.33%， 卵裂率为98.31%， 优胚率为49.86%， 妊娠率为60.24%。B组受精率为83.87%， 卵裂率为95.45%， 优胚率为53.34%， 妊娠率为63.55%。C组受精率为80.52%， 卵裂率为95.97%， 优胚率为39.40%， 妊娠率为55.56%。D组受精率为86.75%， 卵裂率为96.71%， 优胚率为49.08%， 妊娠率为61.90%。四组受精率、卵裂率及临床妊娠率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， C组优胚率低于其余各组（P<0.05）。

3 讨论

精子在睾丸中产生， 在附睾运行过程中不断成熟， 获得运动能力、识别卵子透明带的有力及与卵子结合的能力。理论上睾丸精子最不成熟， 畸形率相对较高， 活动能力差， 但本研究用睾丸精子、附睾精子、输精管精子与射出精子行ICSI进行比较， 发现不同来源精子借助显微注射技术直接进入卵浆内， 均能达到较好的受精能力。

Bukulmez[2]比较射出精子组、附睾精子组、睾丸精子组的ICSI结局， 结果各组间无明显差别。李满等[3]的研究表明， 使用射出精子、附睾精子、睾丸精子在受精率、卵裂率及临床妊娠率方面无明显差别。张丹等[4]报道射出精液组、经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精组在受精率、优胚率、卵裂率和临床妊娠率比较差异无明显差别。本研究与其结局一致， 但C组优胚率低于其余各组（P<0.05）， 可能由于输精管精子在输精管环境停留时间过久， 大量精子发生老化或凋亡导致ICSI操作时间和卵子暴露时间延长， 也可能与输精管结扎手术使得输精管精子内环境发生改变相关， 具体因素还需要进一步探讨。

综上所述， 不论是射出的精子、还是附睾或睾丸精子、或者是输精管精子， 不影响其ICSI的受精率、卵裂率和临床妊娠率。

参考文献

[1] Palermo G， Joris H， Devroey P， et al. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte. Lancet， 1992 ， 340（8810）：17-18.

[2] Bukulmez O. The origin of spermatozoa does not affect intracy-toplasmic sperm injection outcome. European Journal of Obstetrics Gynecology & Reproductive Biology， 2001， 94（2）：250-255.

[3] 李满， 庄广伦， 张敏芳， 等.用射出精子、附睾精子、睾丸精子显微受精治疗男性不育.中华外科杂志， 2000， 38（4）：280-282.

[4] 张丹， 谭丽， 赵冬梅.三种不同来源精子行卵泡浆内单精子注射临床结局的比较.中国医学创新， 2014， 32（11）：11-13.

[收稿日期：2016-04-22]