HLA-B27/B7检测在强直性脊柱炎诊断中的价值分析

马小龙 刘春燕

临床研究

HLA-B27/B7检测在强直性脊柱炎诊断中的价值分析

马小龙 刘春燕

目的 探讨人类白细胞抗原（HLA）-B27+/B7-百分比及平均荧光强度（MnX）检测对强直性脊柱炎（AS）患者的诊断和临床分级价值。方法 选择2014年1月至2015年4月普洱市人民医院收治的确诊AS患者38例为AS组，其他原因引起的腰腿痛患者40例为非AS组，同期本院体检健康志愿者30例为健康对照组。用流式细胞仪检测3组HLA-B27+/B7-百分比及平均MnX，并结合影像学检查结果进行临床分级评估。结果 AS组HLA-B27+/B7-百分比〔（92.21±3.30）%比（46.04±2.11）%、（29.57±1.25）%〕和平均MnX（13.7±0.5比1.5±0.1、2.1±0.1）均明显高于非AS组及健康对照组（P均＜ 0.05），AS组HLA-B27阳性率显著高于非AS组及健康对照组〔92.1%（35/38）比12.5%（5/40）、3.3%（1/30），P均＜ 0.05〕；X线Ⅰ～Ⅳ级HLA-B27百分比差异无统计学意义〔分别为（92.03±3.05）%、（91.44±2.85）%、（93.65±3.10）%、（90.65±2.77）%，P均＞ 0.05〕，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级之间平均MnX比较差异有统计学意义（分别为5.3±0.2、7.6±0.3、19.0±1.2、24.6±1.9，P均＜ 0.05）。结论 HLA-B27百分比及平均MnX对AS的诊断、临床分级和早期预测有一定的价值。

强直性脊柱炎；人类白细胞抗原B27；荧光强度

强直性脊柱炎（AS）是一种自身免疫性疾病，具有慢性、进行性、炎症性等特点，是关节病中最常见的疾病之一，呈世界范围分布，不同种族及国家的发病率亦不同，我国AS的发病率约为0.3%，全世界的总发病率为0.9%［1］。AS伴常染色体隐性遗传，有明显的家族聚集发病趋势［2］，以青年男性发病率较高，病变常累及骶髂关节和中轴关节，易发生全脊柱强直，致残率极高。AS的诊断主要依据临床症状、体征和X线检查，但临床表现与类风湿关节炎、骨关节炎等极度相似，X线的改变仅在病情发展到一定程度时才能被观察到，特别是早期改变（Ⅰ级和Ⅱ级）很难被临床医师发现。早在1973年，国外研究已发现人类白细胞抗原B27（HLA-B27）的表达与AS高度相关［3］。 本研究旨在探讨外周血淋巴细胞HLA-B27/B7百分比和荧光强度（MnX）以及影像学检查在AS患者临床诊断与临床分级等方面的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年1月至2015年4月入住普洱市人民医院被确诊为AS的患者38例为AS组，诊断符合1984年修订纽约标准；X线表现分级符合修订纽约标准；其中男性25例，女性13例；平均年龄（28.9±12.1）岁。同期选择其他原因如类风湿关节炎、骨关节炎引起的腰腿痛患者40例为非 AS组，其中男性26例，女性14例；平均年龄（40.5±10.6）岁。以同期30例体检健康志愿者作为健康对照组，其中男性20例，女性10例；平均年龄（31.4±13.1）岁。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 外周血细胞HLA-B27/B7检测 取各组受试者清晨空腹静脉血2 mL，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，加入混匀全血50 μL，同型对照组加入异硫氰酸荧光素（FITC）标记IgG2a和藻红蛋白（PE）标记IgG1抗体10 μL，测定管加入HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE抗体10 μL。避光孵育30 min后分别加入Optilyse C裂解液（美国Beckman Coulter公司）混匀30 min，离心5 min，加入500 μL磷酸盐缓冲液（PBS）混匀，再次离心，加入500 μL PBS混匀上机检测。用流式细胞仪检测HLA-B27/B7百分比及MnX。取健康志愿者HLA-B27阳性率及平均MnX为参考范围，以HLA-B27阳性率＞ 60%、平均MnX ＞ 5记为AS阳性诊断［4］。

1.2.2 影像学检查 所有AS患者接受X线检查，由2名以上有经验的放射科医师确定其骶髂关节炎分级，依据骶髂关节的X线表现，按照修订纽约标准分为0～Ⅳ5级：0级为正常；Ⅰ级为可疑异常；Ⅱ级为轻度异常，可见局限性侵蚀、硬化，但关节间隙正常；Ⅲ级为明显异常，呈中度或进展性骶髂关节炎，伴有侵蚀、硬化、关节间隙增宽、狭窄或部分强直一项或一项以上改变；Ⅳ级为严重异常，完全性关节强直。

1.3 统计学处理 使用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析，计数资料以例数或百分比表示，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组HLA-B27+/B7-的百分比及平均MnX比较 AS组HLA-B27+/B7-百分比及平均MnX均显著高于非AS组及健康对照组，差异均有统计学意义（P均＜ 0.05）。见表1。

2.2 各组HLA-B27阳性率比较 AS组HLA-B27阳性率显著高于非AS组及健康对照组，差异有统计学意义（P均＜ 0.05）。见表1。

表1 各组HLA-B27/B7百分比、平均MnX及HLA-B27阳性率比较

2.3 X线检查不同分级AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比较 X线检查不同分级AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比较差异均无统计学意义（P均＞ 0.05），Ⅲ、Ⅳ级平均MnX较Ⅰ、Ⅱ级明显升高，差异有统计学意义（P均＜ 0.05）。见表2。

表2 X线检查显示不同分级AS患者HLA-B27百分比及平均MnX比较

3 讨论

HLA-B27属于Ⅰ型主要组织相容性复合体（MHC）基因，位于第6号染色体的短臂上，DNA片段长约3 600 kb，在机体中所有有核细胞上均有表达，在淋巴细胞表面含量丰富。早在1973年，人们就已发现HLA-B27抗原的表达与AS呈高度相关，超过90%的AS患者HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群的阳性率仅为5%～10%［5］，由于AS症状与许多疾病相似而难以确诊，因此检测HLA-B27对AS诊断有重要意义。HLA-B27抗原的表达除与AS有关外，还与反应性关节炎、银屑病关节炎有一定相关性［6］。

AS为血清阴性脊柱关节病，病变几乎全部累及骶髂关节，多沿脊柱向上蔓延，椎间盘及附近韧带常发生钙化和骨性强直［7］。到目前为止，研究发现感染、遗传和免疫等因素与AS 的发生关系密切，但其确切的发病机制仍尚未明确。齐亚军等［8］通过分析近年来有关AS发病机制的研究发现，氧化/抗氧化系统失衡在AS的发生发展中起着至关重要的作用。长期以来，研究者针对AS的治疗进行了大量的临床研究，并在缓解临床症状、减少不良反应等方面取得明显疗效［9］；但AS患者病情不能逆转，对患者的生存质量有重要影响，因此早期诊断和治疗非常必要。虽然目前有关HLA-B27与AS之间的关联尚未明确，但其与AS的高度相关性已得到公认。如AS已出现X线所见的特征性脊柱改变和骶髂关节炎症变化时，已经错过了最佳治疗时机，致残率极高，但其发病隐匿，临床症状和X线表现与多种疾病类似，容易误诊，因此早期检测HLA-B27对诊断AS有重要意义。

刘湘等［10］采用病例对照研究方案，使用聚合酶链反应-序列特异性引物（polymerase chain Reaction-squence specific primer，PCR-SSP）高分辨技术检测HLA-B27亚型，分析HLA-B27基因亚型与AS的相关性，探讨HLA-B27基因亚型检测的临床意义，结果显示，PCR-SSP法能检测出29个HLA-B27亚型（B*2701～B*2730，其中B*2722除外），B*2702～B*2704、B*2706、B*2713亚型可能与AS的发病有关。裴兵［11］的研究选择了187份AS患者标本，分别进行流式细胞术HLA-B27抗原检测和PCR-SSP基因型检测，结果显示，两种检测技术均能有效检测到标本中的HLA-B27，且流式细胞仪检测HLA-B27的敏感度为100%，特异度为96.7%，准确度为98.7%，适合于AS患者临床大规模样本量的筛查。本研究结果也表明，AS患者HLA-B27抗原阳性率及平均MnX明显高于健康对照组，且虽然Ⅲ级以上伴HLA-B27阳性患者与Ⅰ级、Ⅱ级患者抗原阳性率差异无统计学意义，但Ⅲ级以上患者平均MnX明显高于Ⅰ、Ⅱ级。值得提出的是，本研究38例AS患者中有3例HLA-B27阴性，40例非AS组中有5例HLA-B27阳性，而30例健康志愿者有1例HLA-B27阳性。流式细胞术所用的单克隆抗体在检测HLA-B27时会与多种其他HLA抗原，特别是HLA-B7发生交叉反应，对检测结果造成影响。35例HLA-B27阳性患者中有4例检测结果为HLA-B27+/B7+，调查这4例双阳性病例发现，有3例为确诊AS后经抗肿瘤坏死因子抗体、免疫抑制等药物治疗的患者，1例系类风湿关节免疫抑制治疗后HLA-B27+/B7+表达。所以药物干扰HLA-B27的表达存在一定的假说，需要更多研究进一步证实。

尽管HLA-B27阳性暂不能列入世界卫生组织（WHO）诊断AS的标准， HLA-B27阳性不能代替X线证据，但其在AS诊断、治疗、预后方面的重要性已被临床医师认可。值得一提的是，首先，AS出现骶髂关节影像方面的改变，韧带骨化至少需要发病后3年［12］，早期诊断、治疗尤为重要。其次，HLA-B27检测能更大程度避免X线对患者的伤害，减轻其经济负担。所以，临床医师对HLA-B27阳性应给予重视，特别是平均MnX对临床分级和病情严重程度、治疗效果的重要性尚需要更多的研究加以证实。

1 Santos FP， Bastos E， Ligeiro D， et al. Genetic basis of ankylosing spondylitis. Acta Reumatol Port，2007，32：243-252.

2 Brophy S， Calin A. Ankylosing spondylitis： interaction between genes， joints， age at onset， and disease expression. J Rheumatol，2001，28：2283-2288.

3 Brewerton DA， Hart FD， Nicholls A. Ankylosing spondylitis and HL-A 27. Lancet，1973，1：904-907.

4 吴丽娟.临床流式细胞学检验技术.北京：人民军医出版社，2010，228-232.

5 袁玉华，王学谦. B27在强直性脊柱炎发病中的作用研究进展.中华风湿病学杂志，2002，6：113-115.

6 黄彦弘，伍沪生，宋慧.未分化脊柱关节病分类标准的临床验证.中华风湿病学杂志，2002，6：165-168.

7 鲁琳，周伟生.强直性脊柱炎的影像学诊断研究进展.医学影像学杂志，2005，15：322-325.

8 齐亚军，刘健，曹云祥，等.氧化应激与强直性脊柱炎.中国中西医结合急救杂志，2013，21：315-317.

9 施欣红.正清风痛宁与雷公藤多甙治疗强直性脊柱炎的比较研究.中国中西医结合急救杂志，2003，10：154-154.

10 刘湘，宁勇，姚群峰，等.强直性脊柱炎患者HLA-B27基因亚型检测的临床意义.实用检验医师杂志，2010，2：143-146.

11 裴兵.探讨流式细胞术检测HLA-B27在强直性脊柱炎中的临床应用价值.实用检验医师杂志，2012，4：31-34.

12 肖征宇，曾庆馀.对强直性脊柱炎和脊柱关节炎的认识.中华风湿病学杂志，2013，17：289-292.

（本文编辑：邸美仙）

Clinical value of HLA-B27/B7 detection for diagnosis for ankylosing spondylitis

MA Xiao-long, LIU Chun-yan. Department of Laboratory Medicine, Puer People's Hospital in Yunnan Province, Puer 665000, China

Objective To evaluate the humam leukocyte antigen (HLA)-B27+/B7-percent and mean fluorescence (MnX) for diagnosis and clinical classification in ankylosing spondylitis (AS). Methods Thirty-eight patients with AS (AS group) and 40 patients with back leg pain without AS (non-AS group), and 30 healthy controls (health control group) admitted to Puer People's Hospital in Yunnan Province from January 2014 to April 2015 were enrolled. HLA-B27+/B7-percent and MnX were determined by flow cytometry (FCM), which were combined with iconography for clinical classification in AS. Results HLA-B27+/B7-percent [(92.21±3.30)% vs. (46.02±2.11)%, (29.57±1.25)%] and MnX (13.7±0.5 vs. 1.5±0.1, 2.1±0.1) in AS group were significantly higher than those in non-AS group and health control group (P all ＜ 0.05), and HLA-B27 positive percent in AS group was significantly higher than that of non-AS group and health control group [92.1% (35/38) vs. 12.5% (5/40), 3.3% (1/30), P all ＜ 0.05]. There was no significant difference in HLA-B27 positive percent among grade Ⅰ to Ⅳof X-ray [(92.03±3.05)%, (91.44±2.85)%, (93.65±3.10)%, (90.65±2.77)%, respectively, P all ＞ 0.05], and there were significant difference in MnX among grade Ⅰ,Ⅱ,Ⅲand Ⅳ (5.3±0.2, 7.6±0.3, 19.0±1.2, 24.6±1.9, respectively, P all ＜ 0.05). Conclusion The determination of HLA-B27 percent and MnX could be an effective method for diagnosis, clinical classification and early finding of AS.

Ankylosing spondylitis; Humam leukocyte antigen B27; Fluorescence

665000 普洱市，云南省普洱市人民医院检验科

马小龙，Email：13141596@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2016.03.011

2016-07-26）