40%嘧霉·异菌脲悬浮剂的高效液相色谱分析
2016-12-19刘世禄高敬雨
潘 静，徐 妍，马 超，刘世禄，王 佳，东 琴，高敬雨
（北京明德立达农业科技有限公司，北京 100085）
40%嘧霉·异菌脲悬浮剂的高效液相色谱分析
潘 静，徐 妍，马 超，刘世禄，王 佳，东 琴，高敬雨
（北京明德立达农业科技有限公司，北京 100085）
采用高效液相色谱法测定40%嘧霉·异菌脲悬浮剂中嘧霉胺和异菌脲的质量分数，使用C18反相柱和紫外可变波长检测器，以乙腈+0.3%冰乙酸水溶液为流动相，用外标法进行分析和定量。结果表明，嘧霉胺和异菌脲的线性相关系数分别为0.999 2和0.999 5，标准偏差分别为0.12、0.14，变异系数分别为0.79%、0.56%，平均回收率分别为99.42%、99.23%。
嘧霉胺；异菌脲；高效液相色谱；分析
嘧霉胺（pyrimethanil）是一种新型高效、低毒的苯胺基嘧啶类杀菌剂，有内吸传导及熏蒸作用，主要用于番茄、黄瓜和葡萄等作物，防治灰霉病等病害，对已产生抗性的灰霉病菌有效［1］。其作用机理独特，通过抑制病菌侵染酶的分泌，从而阻止病菌的侵染，并杀死病菌。嘧霉胺单剂的分析已有报道，分析方法有气相色谱和液相色谱法［1-3］。异菌脲（iprodione）为广谱型二羧酰亚胺类杀菌剂，广泛用于防治果树、蔬菜、谷物病害及水果贮藏期病害，对香蕉、柑橘、芒果尤其有效［4］。异菌脲具有一定保护和铲除作用，能够抑制孢子萌发及菌丝生长。异菌脲的最大残留限量一直被美国和欧盟严格监测，目前报道的异菌脲分析方法有气相色谱法［5-6］、毛细管色谱法［7］以及高效液相色谱法［8-9］。嘧霉胺和异菌脲复配制剂的分析方法尚未见报道。本文采用反相高效液相色谱法对40%嘧霉·异菌脲悬浮剂进行了测定，方法准确、可靠，具有重现性好，分析速度快，分离效率高的优点，是生产企业产品检测的理想方法。此方法也可用于对嘧霉胺和异菌脲原药的分析。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
Agilent 1260高效液相色谱仪（具可变波长紫外检测器、自动进样装置和色谱数据处理工作站）；过滤器（滤膜孔径0.45 μm）。乙腈（色谱纯）；冰乙酸（分析纯）；水（新蒸2次蒸馏水）；嘧霉胺标样（≥99.5%）、异菌脲标样（≥99.0%）、40%嘧霉·异菌脲悬浮剂（15%嘧霉胺+25%异菌脲），北京明德立达农业科技有限公司提供。
1.2 色谱操作条件
色谱柱：不锈钢柱（150mm×4.6mm），内装ZORBAX SB-C18填充物，粒径5 μm；检测波长：230 nm；流动相：V（乙腈）∶V（0.3%冰乙酸水溶液）=65∶35；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；柱温：（25±2）℃。
在上述色谱操作条件下，嘧霉胺的保留时间约为3.8 min，异菌脲的保留时间约为4.7 min，见图1、图2。
图1 嘧霉胺、异菌脲标样的高效液相色谱图
图2 40%嘧霉·异菌脲悬浮剂的高效液相色谱图
1.3 溶液配制
1.3.1 标样溶液的配制
分别称取嘧霉胺标样0.006 2 g、异菌脲标样0.010 3 g（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入适量流动相溶解，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷至室温，用乙腈定容，摇匀后备用。
1.3.2 试样溶液的配制
准确称取试样0.04 g（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入适量流动相溶解，在超声波清洗器上脱气10 min，使试样全部溶解，冷至室温，用乙腈定容，摇匀，过0.45 μm滤膜，备用。
1.4 测定
在上述色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，直至相邻2针嘧霉胺（或异菌脲）响应值相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。用外标法计算质量分数。
1.5 计算
将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的嘧霉胺（或异菌脲）峰面积分别进行平均。试样中嘧霉胺（或异菌脲）的质量分数w（%）按下式计算。
式中：A1—标样溶液中，嘧霉胺（或异菌脲）峰面积的平均值；A2—试样溶液中，嘧霉胺（或异菌脲）峰面积的平均值；m1—嘧霉胺（或异菌脲）标样的质量，g；m2—试样的质量，g；P—标样中嘧霉胺（或异菌脲）的质量分数，%。
1.6 允许差
嘧霉胺、异菌脲2次平行测定结果之差，分别应不大于0.3%、0.5%，取其算术平均值，作为测定结果。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
对嘧霉胺和异菌脲标样溶液分别进行紫外扫描，得到相应的吸收。嘧霉胺在200 nm、270 nm附近均有较大紫外吸收，异菌脲在200 nm附近有最大紫外吸收。在200 nm波长下杂质的响应值较大，对嘧霉胺和异菌脲有一定的干扰。因此，综合考虑多种因素，最终选择230 nm作为嘧霉胺、异菌脲的检测波长。
2.2 流动相的选择
对甲醇+水、乙腈+水、甲醇+冰乙酸水溶液、乙腈+冰乙酸水溶液经多次配比试验。结果发现，用乙腈+0.3%冰乙酸水溶液（体积比为65∶35）作为流动相，流速为1.0 mL/min时，分离效果最好，出峰时间短，且峰形尖锐、对称。
2.3 分析方法的线性关系曲线
配制嘧霉胺（或异菌脲）5个不同质量浓度的标样溶液，在上述色谱操作条件下进样分析。以嘧霉胺（或异菌脲）质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线（见图3、图4）。嘧霉胺线性方程为y= 14.359 2 x+24.360 0，线性相关系数R2=0.999 2；异菌脲线性方程为y=16.788 6 x+93.780 0，线性相关系数R2=0.999 5。
图3 嘧霉胺线性关系图
图4 异菌脲线性关系图
2.4 分析方法的精密度
在上述色谱操作条件下对同一个样品进行5次平行测定。测得嘧霉胺的标准偏差为0.12，变异系数为0.79%；异菌脲的标准偏差为0.14，变异系数为0.56%（见表1）。该方法的精密度能满足定量分析要求。
表1 40%嘧霉·异菌脲悬浮剂精密度测定
2.5 分析方法的准确度
为了考察分析方法的准确度，测定了产品的回收率。在已知含量的40%嘧霉·异菌脲悬浮剂中加入一定量的嘧霉胺、异菌脲标样，按上述色谱操作条件进行测定，并计算回收率。嘧霉胺平均回收率为99.42%，异菌脲平均回收率为99.23%（见表2）。
表2 40%嘧霉·异菌脲悬浮剂准确度测定
3 结论
本文提出的40%嘧霉·异菌脲悬浮剂中有效成分质量分数的分析方法，具有较高的准确度和精密度，并且操作简便、快速，是企业进行产品检测的理想方法。
［1］季汝泉，杨俊柱.嘧霉胺的高效液相色谱分析研究［J］.安徽化工，2005（2）：50-51.
［2］蒋廷福.嘧霉胺高效液相色谱和气相色谱2种分析方法研究［J］.广西植保，2012，25（1）：3-5.
［3］李吉海，宋国江，张明宇.嘧霉胺的高效液相色谱分析［J］.农药，2002，43（9）：22.
［4］朱伟军.反相高效液相色谱法测定异菌脲原药含量［J］.河南化工，2002，27（11）：44-45.
［5］张学忠.异菌脲的气相色谱分析［J］.现代农药，2002，1（6）：15-16.
［6］中国农业百科全书总编委会农药卷编委会.中国农业百科全书：农药卷［M］.北京：农业出版社，1993：554.
［7］单炜力，简秋.复配制剂中异菌脲的毛细管气相色谱分析［J］.农药科学与管理，2000，21（1）：7-8.
［8］张武，张强，曹宗兴，等. 50%异菌脲可湿性粉剂的高效液相色谱定量分析［J］.天津农业科学，2010，16（5）：91-93.
［9］吕岱竹，韩红新.用固相萃取—高效液相色谱法测黄皮中的异菌脲残留量［J］.热带作物学报，2006，27（4）：101-102.
Analysis of Pyrimethanil+Iprodione 40%SC by HPLC
PAN Jing，XU Yan，MA Chao，LIU Shi-lu，WANG Jia，DONG Qin，GAO Jing-yu
（Beijing Mindleader Agroscience Co.，Ltd.，Beijing 100085，China）
A method was developed for the determination of pyrimethanil + iprodione 40%SC by HPLC on C18column，with variable wavelength UV detector，using acetonitrile + 0.3%acetic acid aqueous solution as mobile phase. The results showed that the linear coefficients of pyrimethanil and iprodione were 0.999 2 and 0.999 5，the standard deviations were 0.12 and 0.14，the variation coefficients were 0.79%and 0.56%，the average recoveries were 99.42%and 99.23%，respectively.
pyrimethanil；iprodione；HPLC；analysis
TQ 450.7
A
10.3969/j.issn.1671-5284.2016.02.009
2015-10-31
潘静（1974—），女，安徽省凤阳县人，工程师，主要从事农药产品的分析与检测工作。Tel：010-62975002；E-mail：panjing@mdldagro.com
顾林玲）
◆环境与残留◆
