结核感染T细胞斑点试验诊断结核性胸膜炎的评价

李锐成，杨文青，沈建军，邹菊贤，张惠中

（第四军医大学唐都医院临床实验与检验科，西安 710038）

论著

结核感染T细胞斑点试验诊断结核性胸膜炎的评价

李锐成，杨文青，沈建军，邹菊贤，张惠中

（第四军医大学唐都医院临床实验与检验科，西安 710038）

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)技术在结核性胸膜炎诊断中的价值。方法:回顾分析78例结核性胸膜炎患者的临床资料及T-SPOT.TB检测结果，并与同期进行的胸水中找抗酸杆菌及影像学检查进行对比分析。结果：78例胸腔积液标本中，T-SPOT.TB阳性率为84.84%（56/66），高于同期的胸腔积液抗酸杆菌检查诊断的9例（阳性率为13.63%，9/66）和影像学检查诊断的64例（阳性率为37.50%，24/64），差异有统计学意义（P<0.05）。结论：T-SPOT.TB检测对结核性胸膜炎的诊断有较高的敏感性,是一种安全、有效的方法。

胸腔积液；结核分枝杆菌；结核感染T细胞斑点试验；结核性胸膜炎

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的传染性疾病，严重威胁人类健康，我国在全球22个结核菌感染高负担国家中位居第四[1]。早期诊断和早期治疗是控制结核病的关键所在。结核性胸膜炎是一种常见的肺外结核病，约有5%的肺结核合并有结核性胸膜炎，是由结核菌及其代谢产物侵入高敏状态的胸膜腔而导致的胸膜炎症[2]，它具有起病隐匿、无典型征象、病程缓慢等临床特点,诊断较为困难,容易误诊、漏诊[3]。为提高结核性胸膜炎的诊断水平，本文回顾性分析78例结核性胸膜炎患者的临床资料及结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）检测结果，并与同期进行的胸腔积液找抗酸杆菌、影像学检查及病理检查进行比较，分析T-SPOT.TB技术在早期结核性胸膜炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择第四军医大学唐都医院2015年1月-12月收治的结核性胸膜炎患者78例，其中男52例，年龄40～90岁，平均68.24岁；女26例，年龄40～82岁，平均65.43岁。78例患者中，右侧病变19例，左侧病变31例，双侧病变28例。患者先行胸水常规、胸水生化、胸水找抗酸杆菌、结核菌素试验（PPD）、血沉、T-SPOT.TB检测，再行影像学检查（B超、CT），最后做支气管镜、胸腔镜、活检和病理。根据患者的病史、临床表现、影像学资料以及上述检查结果做出诊断。诊断结核性胸腔积液需满足以下任何1条[4]:（1）涂片或培养有结核分枝杆菌；（2）组织或胸膜活检病理为结核病变；（3）经抗结核治疗胸腔积液明显吸收。

1.2 主要试剂 T-SPOT.TB检测试剂为英国Oxford Immunotec公司生产的F-SPOT.TB诊断试剂盒。

1.3 主要方法 T-SPOT.TB：（1）采集患者肝素锂抗凝的空腹外周血5 mL行外周血单个核细胞分离；外周血单个核细胞洗涤和计数并配制成标准浓度的细胞悬液。将细胞悬液和抗原加入微孔培养板并37℃、5%CO2浓度培养箱中培养过夜；洗涤微孔板并加入酶标抗体；洗涤微孔板并加入底物反应液；最后斑点计数。(2)结果判读：①阴性对照孔斑点数为6个以下时，抗原A或抗原B任一孔斑点数超出阴性对照孔6个斑点数，定为阳性；②阴性对照孔斑点数为6～10个时，抗原A孔或抗原B孔斑点数大于2倍阴性对照孔斑点数，定为阳性；③如不符合上述标准，且阳性对照孔正常时检测结果为阴性。

1.4 统计学分析 用SPSS18.0软件进行统计分析，率的比较用χ2检验，P<0.05具有统计学意义。

2 结果

78例结核性胸膜炎患者中有66例做了TSPOT.TB检测，阳性率为84.84%(56/66)，高于同期的胸腔积液抗酸杆菌检查诊断的阳性率（13.63%，9/66）和影像学检查诊断的阳性率（37.50%,24/64），差异有统计学意义（P<0.05）。详细结果见表1～3。

表1 78例结核性胸膜炎患者实验室检查结果

表2 78例结核性胸膜炎患者影像学检查结果

表3 78例结核性胸膜炎患者其它检查结果

3 讨论

结核性胸膜炎是一类发病率极高的病症，但由于缺乏病原学依据，造成临床较难确诊[5]。既往结核性胸膜炎的诊断主要依靠临床表现、试验性诊断、影像学检查、痰涂片检查，特别是根据抗结核治疗的有无疗效进行判断。但许多患者的临床表现不典型，个体差异较大，以致临床诊断难以准确、及时，也是导致误诊、漏诊的主要原因。近年来随着结核耐药菌群的增多[6-7]、AIDS流行和人口流动性的加大等原因,其发病率呈上升趋势,所以提高对该病的早期诊断水平极为关键。

传统的早期诊断方法主要有：（1）PPD：一般来讲，它只对婴幼儿和未接种卡介苗的人员诊断有意义，只要接触过结核菌即可呈阳性反应，不管主动还是被动，而大多数人均感染过结核菌，绝大部分是不发病的，感染了结核菌不等于是结核病。胸腔积液查抗酸杆菌：其优点是简便、快速、价廉，送检当天出结果；缺点是敏感性低 (本研究阳性率为13.63%)，特异性差，不能区分死活菌，对L型和颗粒型结核分枝杆菌也不能检出，且易受取材及实验人员素质等因素影响，此外近些年来随着抗酸杆菌的变异菌株增多，其假阳性率亦有升高趋势[8]。ADA：即腺苷酸脱氨酶，活动性结核时，细胞免疫启动，T淋巴细胞增多，ADA作为活动性结核时辅助性T淋巴细胞的一种标志物会进入胸腔积液中，导致结核性胸膜炎时胸水中的ADA活性增高（本研究阳性率74.36%），但对于一些能够导致胸腔积液中含大量淋巴细胞的疾病，如普鲁菌病、感染性单核细胞增多症、支气管肺泡癌、类风湿性关节炎以及大多数脓胸患者，其胸腔积液ADA亦可增高[9]。（2）影像学检查：B超在结核性胸膜炎的诊断方面特异性较差。一般用于筛查胸腔积液的有无和多少；CT检查作为结核性胸膜炎检查的重要方法有其较高的准确性，临床上应用较为普遍，但其只对中、晚期有确诊价值(本研究阳性率为37.50%)，而许多患者的表现征象也缺乏特异性,需要与肿瘤及其他一些疾病相鉴别。对早期的结核性胸膜炎很难发现。（3）支气管镜、胸腔镜：其检查阳性率(本研究阳性率分别为58.33%，60.71%)远远低于T-SPOT.TB检测（本研究阳性率84.84%）。另外,虽然胸膜的病理活检(本研究阳性率为66.67%)是提高结核性胸膜炎诊断率的有效方法之一,但是结核性胸膜炎患者的早期病理改变常为非特异性炎症表现。两者难以作为结核性胸膜炎早期诊断的依据，并且其作为侵入性检查，需麻醉下进行，创伤大，具有一定盲目性，检查费用较高。

T-SPOT.TB的原理：结核分枝杆菌感染后，T淋巴细胞会形成记忆性免疫细胞；通常体外分离的T淋巴细胞通过培养增殖再用相应特异抗原进行刺激，激活该细胞的记忆进而分泌干扰素；通过检测干扰素量的多少来判断患者是否有结核感染。该检测只需要患者5 mL的新鲜静脉血，具有取材方便、结果可靠、耗时短的特点，此法得到美国疾病控制预防中心的推荐和国内专家的认同，可以辅助早期诊断和鉴别诊断[8-9]。此外,T-SPOT.TB检测物不仅用于静脉血，痰液、胸腹水、脑脊液等均可用于诊断的检测物[11]，在操作时更加方便和简单。

在本次研究中，78例患者有66例行T-SPOT. TB检测，其中56例阳性，阳性率为84.84%(56/66)，高于同期的胸腔积液抗酸杆菌检查诊断的9例（阳性率为13.63%,9/66）和影像学检查诊断的64例（阳性率为37.50%,24/64），差异有统计学意义(P<0.05)。但T-SPOT.TB检测尚不能完全鉴别结核感染是否在潜伏期或活动期，对于结核发病率高、潜伏性结核多的地区，削弱了其诊断活动性结核感染的特异性。尽管如此，该检测方法还是展现了较好的应用前景[10]。另外，国内有学者提出同时行血液和胸腔积液T-SPOT.TB检测，可能为结核性胸膜炎的诊断提供更大的帮助[12]。

本研究结果表明，在结核性胸膜炎的诊断中，T-SPOT.TB检测技术相比较其它检查，具有高敏感性、取材易于获取、简单方便、无创伤的特点，是早期诊断的一个很好指标。

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[12]廖兵，丁显平.T-SPOT.TB和ADA在结核性胸膜炎中的诊断价值[J].国际检验医学杂志,2014,35(17):2323

（2016-06-07收稿）

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1006－8147（2016）06-0531-03

李锐成（1985-），男，主管技师，学士，研究方向：临床检验；通信作者：张惠中，E-mail：zhanghuizhong328@163.com。