CPE在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平

2016-12-12何志伟甘跃力

肝脏 2016年11期

何志伟甘跃力

·临床与基础研究·

何志伟甘跃力

目的研究羧肽酶E(CPE)在胆囊胆固醇结石患者肝脏的表达水平，探讨两者之间的相关性。方法选取我院2012年6月到2015年6月期间收治肝胆手术患者术中留取肝标本39例，以其中胆囊胆固醇结石患者24例作为观察组，以未患胆囊胆固醇结石患者15例作为对照组。分别测定血清甘油三酯和总胆固醇，胆汁中胆汁酸、磷脂和胆固醇含量和胆固醇饱和指数，并检测肝脏CPE表达水平。结果观察组血清甘油三酯、总胆固醇，胆汁中胆汁酸、磷脂与对照组相比，差异均无统计学意义(t≤1.479，均P>0.05)。观察组胆汁胆固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和胆固醇饱和指数(1.31±0.14)明显高于对照组(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12)，差异均具有统计学意义(t≥13.421，均P<0.05)。观察组肝脏CPE表达水平明显低于对照组，差异具有统计学意义(t=-58.341，P<0.05)。相关性分析表明，肝脏CPE表达水平与胆汁中胆固醇含量(r=-0.532)和胆固醇饱和指数(r=-0.614)具有显著负相关(均P<0.05)。结论胆囊胆固醇结石的主要影响因素在于患者胆汁胆固醇含量和饱和度，肝脏CPE表达水平下降与胆囊胆固醇结石的形成有关，其作用机制可能是肝脏CPE表达水平的变化对胆汁胆固醇含量和饱和度的改变。

胆囊；胆固醇结石；肝脏；羧肽酶E

胆囊结石是临床上常见的胆囊良性疾病，随着近年来生活水平的提高和生活方式的改变，胆囊胆固醇结石的发病率在胆囊结石中的比例不断上升[1]。胆囊胆固醇结石的发病机理十分复杂，包括环境因素、遗传因素及其复合作用，具有多个易感基因，包括胆固醇合成、转运相关基因如ABG5/8、NPC1l1、LXR等，胆囊胆固醇成核相关基因如MUC5AC等，胰岛素抵抗基因RBP4等[2]。羧肽酶E(CPE)是一种多功能的蛋白，对内分泌和神经系统具有重要的调节作用。研究表明肝脏CPE表达水平可能与胆囊胆固醇结石的形成有密切的关系[3]。本研究对胆囊胆固醇结石患者肝脏CPE表达水平进行研究，现报道如下。

资料和方法

一、一般资料

选取我院2012年6月到2015年6月期间收治的肝胆手术患者术中留取肝标本39例。以其中胆囊胆固醇结石患者24例作为观察组，以未患胆囊胆固醇结石患者15例作为对照组(主要为肝脏良性肿瘤、外伤等患者)。其中观察组(n=24例)男13例，女11例，平均年龄53.65±8.38岁，平均体质量指数(BMI)为23.24±2.79 kg/m2；对照组(n=15例)男8例，女7例，平均年龄55.43±9.25岁，平均BMI为22.87±2.65 kg/m2。两组患者性别、年龄、BMI等一般资料比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。

二、检测方法

(一)血脂检测抽取患者空腹血，离心取血清，采用酶法测定血清甘油三酯和总胆固醇。

(二) 胆汁检测胆汁抽取后，采用酶法测定胆汁中胆汁酸、磷脂和胆固醇含量，并计算胆汁中胆固醇饱和指数(CSI)

(三)肝脏中CPE表达水平检测提取肝脏组织的总蛋白，采用免疫印迹法(Western blot)检测肝脏CPE的表达水平。操作步骤如下：SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离提取的总蛋白并以湿转法进行转膜，转膜后的PVDF膜于5%脱脂奶粉溶液中封闭1 h，置于稀释的一抗中4℃孵育过夜，然后以辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗室温下孵育2 h，与暗室中进行显影，以内参对比，通过灰度扫描法计算肝脏CPE的相对表达水平。

结果

一、两组患者血清和胆汁指标比较

两组患者血清和胆汁生化指标比较如表1。观察组血清甘油三酯、血清总胆固醇、胆汁胆汁酸、胆汁磷脂与对照组相比，差异均无统计学意义(t≤1.479，均P>0.05)。观察组胆汁胆固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和胆固醇饱和指数(1.31±0.14)明显高于对照组(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12)，差异均具有统计学意义(t≥13.421，均P<0.05)。

表1 两组患者血清和胆汁生化指标比较(±s)

注：*与对照组相比，P<0.05

二、两组肝脏CPE表达水平比较

两组肝脏CPE表达水平比较如图1。观察组肝脏CPE表达水平明显低于对照组，差异具有统计学意义(t=-58.341，P<0.05)。相关性分析表明，肝脏CPE表达水平与胆汁中胆固醇含量(r=-0.532)和胆固醇饱和指数(r=-0.614)具有显著负相关关系(均P<0.05)。

注：*与对照组相比，P<0.05

讨论

胆囊胆固醇结石形成的主要诱因在于胆汁中胆固醇含量过高，达到过饱和的情况而从胆汁中析出，从而形成胆囊结石[4]。肝脏是胆汁分泌的源头，目前对于肝脏中影响胆汁分泌的基因和蛋白对胆囊结石影响的研究是热点之一。郭嵩等[5]综述了胆囊结石的易感基因，其认为肝脏中包括脂类调节转录因子、细胞膜和细胞内脂类转运器、脂类调节酶、脂蛋白受体等多种基因均是胆囊结石的易感基因，其表达水平的不同对胆囊结石的形成有重要影响。CPE是一种多功能的蛋白，其对内分泌具有重要的作用，并具有作为肿瘤细胞生长和增殖的生物标志物的潜力[6-7]。最新研究表明，肝脏CPE表达水平与胆囊胆固醇结石的形成有密切的关系，CPE表达水平与胆囊收缩素(CCK)显著正相关，其可能是CPE影响胆汁中的胆固醇含量变化并进而形成胆囊胆固醇结石的主要机制之一[8]。

本研究中，观察组血清甘油三酯、血清总胆固醇、胆汁胆汁酸、胆汁磷脂与对照组相比，差异均无统计学意义(t≤1.479，均P>0.05)。观察组胆汁胆固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和胆固醇饱和指数(1.31±0.14)明显高于对照组(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12)，差异均具有统计学意义(t≥13.421，均P<0.05)。说明胆囊胆固醇结石的主要影响因素在于患者胆汁胆固醇含量和胆汁中胆固醇饱和程度，而血清血脂和胆汁胆汁酸、磷脂则无明显影响。本研究结果与杨士勇等[9]对胆囊胆固醇结石患者血清和胆汁分析结果一致，其认为肝脏中易感基因的LRH-1及其调控基因的高水平表达造成胆汁中胆固醇含量升高并形成胆囊胆固醇结石的主要影响因素。此外，本研究中观察组肝脏中CPE表达水平明显低于对照组，差异具有统计学意义(t=-58.341，P<0.05)。说明胆囊胆固醇结石患者肝脏中CPE的表达水平较普通患者低，其可能是胆囊胆固醇结石形成的相关因素。

胆汁代谢是一个复杂的过程，林晶等[10]对胆囊胆固醇结石的发生与胆汁代谢相关调节蛋白的关系进行了研究，其认为胆汁代谢相关调节蛋白对胆汁分泌的影响在胆囊胆固醇结石发生中具有重要的意义。而CPE具有调节内分泌的功能，其可能对肝脏胆汁分泌和其中的胆固醇含量产生一定的影响[11]。相关性分析表明，肝脏中CPE表达水平与胆汁中胆固醇含量(r=-0.532)和胆固醇饱和指数(r=-0.614)具有显著负相关(均P<0.05)。肝脏CPE表达水平的下降提高了患者胆汁中的胆固醇含量和饱和度，肝脏CPE表达水平的变化对胆汁分泌的影响可能是导致胆囊胆固醇结石的发生重要作用机制。

综上所述，胆囊胆固醇结石的主要影响因素在于患者胆汁胆固醇含量和饱和度，肝脏CPE表达水平的下降与胆囊胆固醇结石的形成有关，其作用机制可能是肝脏CPE表达水平的变化对胆汁胆固醇含量和饱和度的改变。

[ 1 ] 尹纯林, 项和平, 洪磊,等. 脂联素、胰岛素抵抗在胆囊胆固醇结石形成中的作用. 肝胆胰外科杂志, 2012, 24:96-98.

[ 2 ] 刘姗, 许国强. 胆囊胆固醇结石症易感基因的研究进展. 国际消化病杂志, 2014, 34:182-183.

[ 3 ] 杨士勇, 韩天权, 蒋兆彦,等. 基因芯片法检测胆囊胆固醇结石病人肝脏羧肽酶E的表达. 外科理论与实践, 2006, 11:212-216.

[ 4 ] 林晶, 陈进宏. 胆汁代谢相关调节蛋白与胆囊胆固醇结石. 外科理论与实践, 2013, 18:493-496.

[ 5 ] 郭嵩, 曹红勇, 杨士勇. 胆囊结石致石基因的研究进展. 外科理论与实践, 2013, 18:94-98.

[ 6 ] 谭金凤, 尚建红, 沈宏伟,等. 羧肽酶E——肿瘤增殖和转移的潜在标志物. 实用医学杂志, 2015, 31:1362-1364.

[ 7 ] 周坤，姜晓峰，梁红艳. 羧肽酶E的高表达与肿瘤的生长和转移相关. 实用肿瘤学杂志, 2012, 26:158-161.

[ 8 ] 戴树龙, 杨士勇, 潘超,等. 胆囊胆固醇结石患者肝脏羧肽酶E表达. 江苏医药, 2015, 41:265-267.

[ 9 ] 杨士勇, 杨坤兴, 陈毛冰,等. 胆囊胆固醇结石患者肝脏LRH-1及调控基因蛋白表达差异. 浙江临床医学, 2013, 15:1281-1283.

[10] 刘换新, 周东, 游娟,等. 羧基肽酶E(CPE)在人乳腺腺癌中的表达和功能. 复旦学报(医学版), 2013, 40:523-528.

(本文编辑：易玲)