176例成人急性髓细胞白血病免疫表型分析及其与疗效、复发关系的研究

宋 斌，陈 雁，吴修伟，常 娟，周 璐，张荣耀，李章志，张 霞，章正华，万楚成

（十堰市太和医院湖北医药学院附属医院血液科，湖北十堰442000）

176例成人急性髓细胞白血病免疫表型分析及其与疗效、复发关系的研究

宋 斌，陈 雁，吴修伟，常 娟，周 璐，张荣耀，李章志，张 霞，章正华，万楚成

（十堰市太和医院湖北医药学院附属医院血液科，湖北十堰442000）

目的 探讨成人急性髓细胞白血病（AML）免疫表型的特点及其与疗效、复发的关系。方法 选择2013年2月至2014年2月期间在我院血液科进行治疗的176例成年AML患者进行免疫表型检测，随访观察24个月，记录复发的数据。结果 176例AML患者中髓系特异性抗原主要阳性表达依次为CD13（165例、93.75%）、CD117（115例、65.34%）、CD33（109例、61.93%）、MPO（81例、46.02%）、CD64（51例、28.98%）；造血干/祖细胞标记抗原主要阳性表达依次为CD38（122例、69.32%）、HLA-DR（94例、53.41%）、CD34（85例、48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原阳性表达的有79例，主要为CD56（58例、32.95%）、CD7（31例、17.61%）。在176例患者中，123位患者化疗1至2个疗程后达到完全缓解，其中：HLA-DR、CD34、CD7、CD19等4个抗原表达阳性的患者的缓解率低于表达为阴性的患者（P＜0.05）；在24个月的随访观察中，123例得到缓解的患者当中25例出现复发，其中患者HLA-DR、CD34、CD7阳性表达的患者复发比例高（P＜0.05）。结论 CD13、CD33、CD38等抗原在AML患者中表达较高，其中44.88%的患者伴有淋系抗原的表达；而患者具有CD7、CD34、CD56、HLA-DR表达阳性后出现缓解的预期值相对较低，当患者出现CD34、CD56、HLA-DR表达阳性后增加其复发的概率。

AML； 免疫表型； 化疗； 效果； 复发

急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia，AML）是血液科常见的恶性肿瘤，由于白血病的FAB分型主观性较强，近年来流式细胞分析方法（flow cytometry，FCM）被广泛应用于白血病的检测，白血病的免疫分型在临床上得到明显的重视，据报道［1］白血病的免疫表型与治疗效果及预后之间存在一定的关联，为此笔者对急性髓性白血病患者的免疫表型及其与疗效、复发的关系进行了针对性的研究。

材料和方法

1 对象与分组

选择176例2013年2月至2014年2月期间在我院血液科进行治疗的成年AML患者作为研究对象，经诊断所有患者均符合AML的诊断标准［2］，根据FAB分型，其中 5例为M0、6例为M1、80例为M2、31例为M3、18例为M4、35例为M5、1例为M6（以M2，M3，M5为最常见类型）。其中男性 93例，女性83例，中位年龄42.4（26～72）岁。所有患者均为初次接受治疗。

2 仪器与试剂

Epics XL流式细胞仪，多甲藻叶绿素蛋白（Per CP）、红蛋白（PE）、异硫氰酸荧光素（FITC），CD2、CD3、CD20等抗体（均购买自美国Beckman Coulter公司）。

3 检验方法

抽取骨髓液2mL，以肝素抗凝，于采样后24小时内检测。试管中加入肝素抗凝骨髓液50μL及荧光标记抗体各20μL，放在避光37℃孵育15min，之后加2mL红细胞裂解液震荡混匀，沉淀10min，离心弃去上清，利用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤沉淀物2次，加入15mLPBS，流式细胞仪检测。免疫分型参考标准［3］。

4 治疗方案与评判标准

AML患者采用含阿糖胞苷方式进行化疗，包括：阿糖胞苷、柔红霉素（DA方案），阿糖胞苷、去甲氧柔红霉素（IA方案）以及阿糖胞苷、吡柔比星（TA方案），以推荐的剂量进行化疗，治疗2个疗程。利用三氧化二砷、全反式维甲酸联合化疗治疗M3型患者。以张之南等编写的《血液病诊断及疗效标准》［4］作为患者完全缓解的参考标准。

5 统计学处理

统计学软件采用SPSS16.0中文版，计数资料比较采用卡方检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 AML患者抗原表达及治疗情况

以异常细胞群表面抗原阳性超过20%为抗原阳性表达，176例AML患者多种抗原呈阳性表达（见表1），其中髓系特异性抗原主要阳性表达依次为CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%）；造血干/祖细胞标记抗原主要阳性表达依次为CD38（69.32%）、HLADR（53.41%）、CD34（48.30%），在176例AML患者中伴有淋系抗原阳性表达的有79例，主要为CD56（32.95%）、CD7（17.61%）。患者在化疗2个疗程获得缓解的有123人，缓解率为69.88%，123人中25人在2年的随访中出现复发，复发率为20.32%。

表1 AML患者各类抗原表达情况（例）

2 髓系抗原表达与疗效的关联

主要的阳性表达髓系特异性抗原对应的缓解率分别是CD13+69.70%、CD13-72.73%；CD117+73.43%、CD117-68.85%；CD33+69.72%、CD33-70.15%；MPO+75.30%、MPO-65.26%；CD64+66.67%、CD64-71.20%。阳性与阴性表达之间的

缓解率均无明显统计学差异，P＞0.05，表2。

表2 主要的阳性表达髓系特异性抗原与缓解的关联

3 造血干/祖细胞标记抗原表达与疗效的关联

主要的阳性表达造血干/祖细胞标记抗原对应的缓解率分别是CD34+62.35%、CD34-79.12%；HLA-DR+60.64%、HLA-DR-80.49%；CD38+66.39%、CD38-77.77%，其中CD34与HLA-DR阳性与阴性表达之间的缓解率存在明显统计学差异，P＜0.05，表3。

表3 主要的阳性表达造血干/祖细胞标记抗原与缓解的关联

4 淋系抗原表达与疗效的关联

主要的阳性表达淋系抗原对应的缓解率分别是CD56+58.62%、CD56-75.42%；CD7+54.83%、CD7-73.10%，两个抗原阳性与阴性表达之间的缓解率均存在明显统计学差异，P＜0.05，表4。

表4 主要的阳性表达淋系抗原与缓解的关联

5 抗原阳性与复发的关联

在两年的随访中，获得缓解的123人中有25人复发，对阳性与阴性表达之间的缓解率存在明显差异的4个抗原进行回顾分析，分类计算复发率，CD34+28.30%、CD34-14.28%；HLA-DR+28.07%、HLA-DR-13.63%；CD56+35.29%、CD56-14.60%；CD7+35.29%、CD7-17.92%，其中具有HLA-DR+、CD34+、CD56+表达的患者复发率更高，存在明显统计学差异，P＜0.05，表5。

表5 抗原阳性与复发的关联

讨 论

白血病是造血干细胞发生高度异质性病变的恶性克隆性疾病，是严重威胁我国成人及青少年的恶性肿瘤。检测急性白血病的方法常用形态学检查，这是最基本的分型方法，对判断、识别白血病原始细胞的所属类别、增生程度都具有较好的临床价值，但是其诊断符合率常常不足60% ～80%［5-6］，免疫分型是通过分析细胞内外表达的特殊抗原，对白血病细胞的来源和分化进行精细分析，具有样本分析准确率高、速度快、重复性好等优点，近年来在血液系统恶性肿瘤的诊断中得到了广泛的应用。

在本研究收集的样本中，常见的髓系抗原表达为CD13（93.75%）、CD117（65.34%）、CD33（61.93%）、MPO（46.02%）、CD64（28.98%），与葛繁梅［7］的报道一致，与许晓东、鹿群先等［8-9］报道的CD33是AML患者最高表达的抗原不相符；而HLADR、CD38、CD34是造血干/祖细胞表面的标记抗原，所有AML患者中有79例伴有淋系抗原阳性表达（包括CD56、CD7），这与相关报道一致［10］。考虑出现此类情况应与样本数量有关，样本数量没有足够大时，偏差往往存在，总的来说，髓系抗原、造血干/祖细胞标记抗原、淋系抗原阳性表达符合文献预期。

所有患者中，根据FAB分型，其中M2、3、5三种

类型患者的例数超过 20，以M3抗原表达做最高，CD13等髓系抗原的表达次之，而仅在淋系抗原和造血干细胞标记抗原中CD38高表达，与其他分型差异较大［11］，这也从侧面揭示M3型治疗、预后与其他分型不同提供了佐证。相对来说，髓系抗原表达在各分型中，表达较为平均，而造血干/祖细胞标记抗原尤其CD34、HLA-DR在分化程度相对较低的类型如M1、2、4型中表达较高，同时CD7、CD56等淋系抗原也拥有和干/祖细胞抗原相似的抗原，在M1、2、4型中表达较高。

在我们的研究中，我们观察到表达较高的髓系抗原与治疗效果之间并不存在明显的关联；而相对髓系抗原来说，表达较低的干/祖细胞抗原与淋系抗原，一旦阳性表达，患者往往具有较差的缓解率与较高的复发率。以CD56为例，CD56是主要表达在NK细胞以及部分T细胞表面上的抗原，与细胞粘附有关联，表达增高后，往往提示患者复发的可能性更高，与报道［12］的结果也类似，但是目前尚无大规模的临床研究对此提供支持，因此这一观点仍有争议，也有研究认为CD56阴性或阳性表达与患者复发关联较小，但王会芳等［13］也认为CD56阳性是分化较差的白血病类型。

根据我们在临床中的实践，研究人员倾向认为，此类抗原往往表达不高，但是一旦表达也提示肿瘤变异程度可能更高，从而出现上述结果，但是也有可能与研究的方法、样本数量或者治疗方案的差异有关，需要进一步大样本的观察。

总的来说，就我们的研究分析认为，白血病的免疫分型与患者的治疗效果及复发之间存在有一定的关联，具有进一步研究的价值。

［1］谷芳娜，李国辉，刘利，等.急性髓系白血病染色体核型及免疫表型分布及治疗后临床疗效分析.昆明医科大学学报，2015，36（3）：113-116.

［2］van Dongen J J，Lhermitte L，Biittcher S，et al.EuroFlow antibody panelsforstandardizedn-dimensionalflowcytometric immunophenotyping of normal，reactive and malignant leukocytes.Leukemia，2012，26（9）：1908-1975

［3］刘贵建.急性白血病的MICM分型.中华检验医学杂志，2004，27（6）：398-400.

［4］张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准.第3版.北京：科学出版社，2007：103-105.

［5］熊见，解小红，黄敏，等.多参数流式细胞术在白血病免疫分型中的应用探讨.国际检验医学杂志，2012，33（12）：1427-1429.

［6］刘艳荣，于弘，常艳，等.四色荧光标记抗体在白血病免疫分型中的应用及意义.中国实验血液学杂志，2002，10（5）：423-427.

［7］葛繁梅，刘延香，任羽，等.急性髓系白血病128例免疫表型与预后的关系研究.陕西医学杂志，2014，43（4）：454-456.

［8］许晓东，赵声明，郑天林，等.多参数流式细胞术在成人急性髓系白血病免疫表型中的应用.白血病淋巴瘤，2009，18（5）：270-271

［9］鹿群先，张光彩，李德鹏，等.急性髓细胞白血病免疫表型分析.临床内科杂志，2001，18（2）：127-129.

［10］孙超，周新，郭宏锋，等.急性髓系白血病免疫表型特征及遗传学特征分析.现代生物医学进展，2015，15（11）：2042-2044.

［11］王清霞，张秋堂，岳保红，等.成人急性髓性白血病免疫学表型分析.郑州大学学报（医学版），2008，43（4）：779-781.

［12］许晓东，胡翠华，常乃柏，等.成人急性髓细胞白血病免疫分型特点及临床预后分析.中国实验诊断学，2010，14（3）：423-426.

［13］王会芳，苏显都，于彩霞，等.125例成人急性髓系白血病免疫表型特点分析.解放军医学院学报，2015，36（4）：363-367.

（潘子昂编辑）

《标记免疫分析与临床》征订启事

《标记免疫分析与临床》是国内外公开发行的医学刊物，是“中国科技论文统计源期刊”（中国科技核心期刊），被《中国学术期刊综合评价数据库》、《中国期刊网》、《中国学术期刊（光盘版）》、“万方数据 -数字化期刊群”全文收录。读者对象为标记免疫分析工作者、临床医生及相关专业科研人员。是读者学习的园地，是作者发表论文的平台。

本刊为月刊，定价为每期25.00元，全年300.00元（含邮费）。邮发代号2-307，欢迎广大读者及时向当地邮局订阅，亦可直接汇款至杂志社订阅。

地址：北京市西城区三里河二区甲1号305室

《标记免疫分析与临床》杂志社

邮编：100045 电话：（010）68515701（010）68517801

网址：www.chinabjmy.com E-mail：bjmy@china-isotope.com

Phenotype Analysis in Adult Acute Myeloid Leukemia and Its Relationship with Remission/Recurrence

SONG Bin，CHEN Yan，WU Xiu-wei，CHANG Juan，ZHOU Lu，ZHANG Rong-yao，LI Zhang-zhi，ZHANG Xia，ZHANG Zheng-hua，WANG Chu-cheng
（Department of Hematology，Taihe Hospital Affiliated Hospital of Hubei Medical College，Shiyan 442 000，China）

Objective To investigate the immune phenotype characteristics of adultacute myeloid leukemia（AML）and its efficacy.Methods We selected 176 cases of adult AML patients who were admitted in our hospital hematology treatment from February 2013 to February 2014.Immunophenotyping was performed in all subjects and patients were followed up for 24 months.Results AML patients with positive expression in myeloid-specific antigen were CD13（165 Li，93.75%），CD117（115 Li，65.34%），CD33（109 Li，61.93%），MPO（81 cases，46.02%），CD64（51 cases，28.98%）.Hematopoietic stem and progenitor cell marker antigen expression of major／were CD38（122 Li，69.32%），HLA-DR（94 Li，53.41%），CD34（85，48.30%）.Lymphoid antigen expression was found in 79 cases out of 176 cases of AML patients，mainly for CD56（58 Li，32.95%），CD7（31 cases，17.61%）.123 patients with chemotherapy 1-2 rounds achieved complete remission.HLA-DR，CD34，CD7，CD19 positive expression rates were lower in complete remission patients（P＜0.05）.After 24 month follow-up，25out of 123 patients had recurrence.The patients with HLADR，CD34，CD7 expression had higher recurrent rate（P＜0.05）.Conclusion CD13，CD33，CD38 expressions were higher in AML patients，of which 44.88%patients had lymphoid antigen expression.The patients who had positive CD7，CD34，CD56 and HLA-DRwere less likely to go into remissions.The patients who had positive CD34，CD56 and HLA-DR expression were more likely to have recurrence.

AML； Phenotype； Chemotherapy； Effect； Relapse

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.028

2016-05-31；

2016-06-20